mRNA疫苗冲击树突状细胞诱导抗肿瘤免疫反应的研究

目的 :以消化道肿瘤组织mRNA冲击自体DC ,诱导特异性免疫应答。方法 :20例消化道肿瘤患者外周血分离PBMC(外周血单核细胞 ) ,在IL -4、GM -CSF联合作用下诱导DC ,从消化道肿瘤组织中提取mRNA并分别在有脂质体或无脂质体介导下冲击DC ,与未经纯化的T细胞混合培养 ,诱导CTL(细胞毒性T淋巴细胞 )。以CTL作为效应细胞 ,以胃癌细胞系803为靶细胞 ,LDH释放实验检测杀伤活性。结果 :细胞表面标记检测显示诱导前后CD3、CD4、CD14显著下降 ,CD40、CD86、CD1a、CD83、HLA -DR显著升高 ,表明IL -4、GM -CSF联合作用下有效诱导出DC ,混合淋巴细胞增殖实验表明该DC具有抗原递呈 ,刺激淋巴细胞增殖的功能。经脂质体介导的mRNA冲击DC诱导的特异性杀伤反应与未经脂质体介导的mRNA冲击DC诱导的特异性杀伤反应比较 ,其杀伤率经统计学分析无显著性差异。而二者与单纯经IL -2诱导的未经纯化的T细胞产生的非特异性杀伤比较均有显著性差异。结论:以肿瘤细胞mRNA冲击DC诱导CTL可有效杀伤肿瘤细胞 。

野生型P53抑制肺癌细胞生长的研究

目的 :观察外源性野生型P53对有P53基因突变的肺癌细胞系的生长抑制作用 ,研究P53调控细胞生长分化的作用。方法 :以PCR、免疫组化、SSCP方法筛选P53突变型细胞系 ,在脂质体介导下转染野生型P53质粒pC53 -SN3 ,并以空质粒pCMV -neo做对照。用G418筛选稳定表达的细胞克隆 ,以生长曲线和集落形成实验观察所转染的野生型P53质粒对细胞生长分化的影响。结果 :经筛选发现Calu -6细胞系为P53第六外显子突变株 ,204处密码由谷氨酸突变为天冬氨酸 ,经野生型P53质粒 pC53-SN3转染后 ,发现细胞生长明显减慢 ,而转染空质粒的Calu -6细胞与未转染的细胞生长无差异 ,同时发现 pC53-SN3转染后集落形成抑制率达90.6 %。结论 :表明野生型P53基因可对肿瘤细胞细胞周期进行负调控 。

27例原发性甲状腺淋巴瘤的临床分析

目的 :分析甲状腺原发恶性淋巴瘤的临床表现、诊断及治疗。方法 :回顾1975～1999年间收治的甲状腺淋巴瘤27例 ,分析其临床表现 ,病理分型、临床分期、治疗方案及预后。结果 :原发甲状腺淋巴瘤复发及死亡率,综合治疗者(5/24)低于单纯手术者(3/3) ;低度恶性(3/17)低于中高度恶性者(5/10) ;Ⅰ期 (1/16)低于Ⅱ期 (7/11) ;腺内者(3/19)低于侵出腺外者(5/8,P<0.05)。结论 :甲状腺淋巴瘤的预后与病理分型、临床分期及治疗方案密切相关 ;

406例桥本氏甲状腺炎的临床分析

目的 :分析桥本氏甲状腺炎的临床表现、诊断及治疗。方法 :回顾了1954年1月至1999年4月间收治的桥本氏甲状腺炎406例 ,分析其临床表现 ,实验室检查结果及治疗方案。结果 :桥本氏甲状腺炎常表现为腺体弥漫肿大 ,但偶为孤立结节存在 ,甚至可以伴有疼痛、固定等恶性征象。偶可并发恶性肿瘤。结论 :本病系良性病变 ,应以内科治疗为主 ,但应注意与恶性肿瘤鉴别。外科治疗主要用于缓解压迫症状。对可疑癌肿病例应作病理切检 ,以明确诊断。

EGFR及其配体EGF与甲状腺乳头状癌淋巴转移的关系研究

目的 研究EGFR及其配体EGF与甲状腺乳头状癌淋巴结转移的关系。方法 本实验采用免疫组化S -P法 ,检测了 2 5 1例甲状腺乳头状癌表皮生长因子受体 (EGFR) ,分析了受体表达情况与淋巴转移间的关系。并检测了 5 3例甲状腺乳头状癌患者血清及尿液中表皮生长因子 (EGF)的水平。结果 在甲状腺乳头状癌中 ,EGFR出现高水平表达 ,阳性率为 6 6 9% ,明显高于对照组。不同病理分型间 ,阳性率有所不同。包膜内型、腺内型和腺外型阳性率分别为 2 9 4%、73 9%和 71 3% ,其差别有统计学意义。当出现淋巴结转移时 ,EGFR阳性率升高。N0 转移组及N1组EGFR阳性率为 88 7% ,91 0 %明显高于N0 无转移组 (19 5 % ) ,有显著性差异。经相对危险度计算和线性趋势分析表明 ,随EGFR染色强度升高 ,转移风险升高 ,二者间呈线性关系。甲状腺乳头状癌患者血清及尿液中存在着高水平的EGF。甲状腺乳头状癌患者血清EGF水平为 1 6 8± 5 6 μg/L ,尿液中为 37 2± 10 8μg/L ,均高于甲状腺腺瘤组和正常对照组。提示EGF与肿瘤的发生有密切关系。结论 在N0 期甲状腺乳头状癌病例中 ,EGFR阳性应高度考虑颈淋巴结转移 ,从而为临床选择治疗方案提供参考。

中药乳痛安片的镇痛抗炎作用研究

目的观察中药乳痛安片的镇痛、抗炎作用。方法采用甩尾法和小鼠扭体法观察乳痛安片镇痛作用;采用小鼠耳廓肿胀法、足肿胀法观察乳痛安片的抗炎作用。结果乳痛安片能明显延长小鼠甩尾的潜伏期,同时使小鼠扭体反应次数明显减少(P<0.01);中、高剂量乳痛安片可使小鼠耳廓肿胀度明显减小(P<0.05),同时足肿胀度也明显减小(P<0.01)。结论乳痛安片具有明显的镇痛、抗炎作用。

大豆苷元对人成骨样MG-63细胞OPG及RANKL表达的调节作用

目的以人成骨样MG-63细胞为研究对象,探索大豆苷元对护骨素(osteoprotegerin,OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)表达的调节作用及相关机制。方法分别应用反转录聚合酶链式反应法、蛋白免疫印迹及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术,研究大豆苷元对人成骨样MG-63细胞OPG、RANKL表达的调节作用及其分子机制。结果大豆苷元能够促进MG-63细胞OPG mRNA和蛋白的表达且能抑制RANKL mRNA和蛋白的表达,上述作用可被雌激素受体(estrogen receptor,ER)阻断剂ICI 182780所阻断。大豆苷元对MG-63细胞对OPG的促进作用以及对RANKL的抑制作用是由ERα和ERβ共同介导的。结论大豆苷元可以通过ERα和ERβ途径促进MG-63细胞OPG mRNA及蛋白的表达,并能抑制MG-63细胞RANKL mRNA及蛋白的表达。

葛根素对人成骨样MG-63细胞OPG、RANKL表达的调节作用

【目的】观察葛根素对人成骨样MG-63细胞骨吸收调节因子骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、NF-κB激活受体配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)表达的调节作用,并初步探讨对其可能的作用机制。【方法】选择兼有两种雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型表达的人成骨样MG-63细胞为研究模型,采用RT-PCR及Western blotting技术,检测OPG/RANKL的mRNA和蛋白的表达水平;采用RNA干扰技术特异性的将ERα、ERβ基因沉默,从而检测葛根素是否通过ERα和ERβ介导发挥作用。【结果】葛根素可显著上调成骨细胞OPG mRNA和蛋白的表达水平,下调RANKL mRNA和蛋白的表达水平。ER阻断剂ICI 182,780可完全阻断葛根素诱导的OPG表达水平增高,部分阻断了葛根素对RANKL表达的下调作用。利用RNA干扰技术构建ERα/ERβ不同表达状态的细胞株,结果显示:与对照组MG-63+葛根素、对照组MG-63/scrambled shRNA+葛根素相比,葛根素对MG-63/ERαshRNA和MG-63/ERβshRNA细胞OPG、RANKL的mRNA和蛋白水平的影响无显著性差异。【结论】葛根素显著上调MG-63细胞中OPG的mRNA及蛋白表达水平,同时下调RANKL的mRNA及蛋白表达水平,该作用可经ERα和ERβ共同介导。