以卵清蛋白为载体的固定化木瓜蛋白酶的制备及其性质

以变性的卵清蛋白为载体,用戊二醛为交联剂固定木瓜蛋白酶.通过正交实验考察了固定化pH值、交联剂戊二醛浓度、交联时间和酶用量对固定化木瓜蛋白酶活力的影响,确定了最适固定化条件:5%戊二醛,pH6.0,交联时间20h,每克载体含酶量12mg.对比研究了游离木瓜蛋白酶和固定化木瓜蛋白酶的性质,所得到的固定化木瓜蛋白酶最适温度90℃,最适pH9.0,米氏常数53.6mg/mL,其热稳定性及耐热性均较游离酶显著提高.

净电荷对螺旋型抗癌肽生物活性的影响

以高活性两亲性α-螺旋型阳离子抗癌肽A12L/A20L(多肽P)为模板,在其亲水面进行氨基酸定点取代,获得了一系列带有不同净电荷的多肽类似物,研究了净电荷对螺旋型抗癌肽生物活性的影响.结果表明,抗癌肽净电荷的改变对其溶血活性影响较小(最大差异为2倍),而对抗癌活性和选择性的影响显著(最大差异为10倍).抗癌肽P的净电荷最适范围为+7到+8,分子间静电排斥作用的最佳数目为3～5个,高于或低于此范围,其抗癌活性和选择性均明显降低.与人的正常细胞相比,负电性的癌细胞膜对于抗癌肽的净电荷变化更敏感,表明两亲性螺旋型抗癌肽针对癌细胞与正常细胞表现出良好的选择特异性.

4种含RGD的短肽对细胞粘附作用的影响

从两方面对比研究了4种含Arg-Gly-Asp(RGD)的细胞粘附肽RGD,RGDS,RGD-(NH2)2即RGE-NH2和RGDS-NH2对细胞粘附的影响.一方面研究了固定在聚乙交酯丙交酯共聚物(PLGA)膜上的4种细胞粘附肽通过其细胞定向作用对大肠癌细胞(HCT-8)和人成骨肉瘤细胞(OS732)细胞粘附性的促进作用;另一方面研究了外源性细胞粘附肽对HCT-8和OS732在纤维连接蛋白(FN)上粘附的竞争性抑制作用.结果发现,除了RGD-(NH2)2,其他3种肽都具有明显抑制细胞粘附的作用且具有一定的浓度依赖关系,其中以RGDS和RGDS-NH2的能力最强,RGD稍弱.对于HCT-8细胞,3种肽的最大抑制率分别为53.3%,56.3%,37.5%;而对OS732细胞,3种肽的最大抑制率分别为50.9%,49.8%,34%.

一种新的玉米抗氧化肽的制备与结构表征

用酶法在受控条件下降解玉米醇溶蛋白 ,对酶解产物进行分离纯化 ,获得一种新的抗氧化肽 ;对其一级结构进行了表征 ,氨基酸组成和顺序为 Leu-Asp-Tyr-Glu;

酶解鹿茸肽的制备、纯化及抗氧化活性

利用一种工业用碱性蛋白酶对新鲜梅花鹿鹿茸进行水解,制备得到生物活性肽.首先,考察了酶用量、底物浓度和反应时间对水解反应的影响,确定了最佳水解条件为酶与底物质量比1:150,底物与溶剂质量比1:13,水解时间60min.其次,利用硫酸胺分级沉淀法制备了鹿茸多肽粗提液,同时采用缓冲液保护其活性,再经SephadexG-25凝胶层析柱进行分离纯化,得到了具有最强抗氧化活性的鹿茸肽组分(VAP-B).最后,利用制备型高效液相色谱柱对VAP-B进一步纯化,得到了分子量在800以内的小肽活性组分(VAP-B1),其蛋白含量为70.45%.在此基础上,对小肽活性组分VAP-B1进行了理化性质分析,检测其抗氧化活性,包括清除超氧阴离子、羟自由基以及抗脂质过氧化的能力和还原能力.实验结果表明,当鹿茸肽VAP-B1浓度为20mg/mL时,对邻苯三酚自氧化的抑制率达到91.9%,有明显的清除超氧阴离子的作用;当浓度为10mg/mL时,对羟基自由基的清除作用达到100%,且在一定的浓度范围内呈剂量依赖关系.此外,鹿茸肽VAP-B1还具有一定的防止脂质过氧化和还原的作用.

大豆蛋白的小分子酶解产物抗氧化活性研究

以低温冷轧豆粕为原料、大豆分离蛋白为反应底物,进行酶水解反应,酶解产物经离子交换层析,凝胶排阻层析等方法分离,获得了平均分子量为800 D的小分子活性肽(SBP),用邻苯三酚自氧化法测定其抗氧化性。结果表明:此类小分子活性肽对邻苯三酚(PR)自氧化具有较好的抑制作用(1 mg/mL SBP的抑制率为33.3%)。与谷胱甘肽(GSH)进行比较,二者具有相似的抗氧化活性。

小分子玉米肽Leu-Asp-Tyr-Glu保护线粒体抗氧化损伤的研究

A small molecule peptide Leu-Asp-Tyr-Glu(LDYE) prepared from the enzymatic hydrolysate of zein was tested for its anti-oxidative activities. The effects of LDYE on the turgidity of mitochondria,the fluidity of membrane,the activity of cytochrome C oxidase and ATPase at subcellular level were investigated by using H\-2O\-2/Fe\+\{2+\} -induced mitochondria damage model system. It was found that the small peptide exhibited an obvious ability of removing free radicals and protecting the mitochondria from damage by oxidation. [WT5HZ]

动性球菌产生胞外脂肪酶的条件

测定了动性球菌产生胞外脂肪酶的酶活力,对动性球菌产生胞外脂肪酶的条件进行了研究.结果表明,当碳源为葡萄糖,氮源为蛋白胨,初始pH值为6.0时脂肪酶产率最高;K2HPO4,KH2PO4,CaCl2,ZnSO4和NaCl对脂肪酶产率有促进作用;CuSO4和MgSO4对脂肪酶产率有一定影响;FeCl3,BaCl2,CoSO4和MnSO4对脂肪酶产率影响较大;非离子表面活性剂吐温和聚乙烯醇均能促进脂肪酶的生成,且吐温比聚乙烯醇效果更好.

电器绝缘油中枝动菌代谢物脂肪酸的分离、纯化及结构鉴定

利用薄层层析(TLC)、液-质联机(LC-MS)等技术从电器绝缘油(变压器介质油)的枝动菌代谢物中分离得到一种脂肪酸,结合核磁共振(NMR)对其结构进行了表征,证明这种脂肪酸为癸二酸.

细胞粘附位点RGD前体二肽的化学合成与酯化

用一种新颖的化学法合成了细胞粘附位点RGD前体二肽GD（Gly-Asp）．并利用ROH-HCl法进一步完成了GD二肽乙酯化和甲酯化．考察了GD二肽对乙醇／甲醇的摩尔比、反应温度和反应时间对酯化收率的影响，使GD二肽酯化的条件得到了优化，GD二肽对乙醇／甲醇的摩尔比为1：40，反应温度30℃，反应时间1～2．5h，最大收率为80％～85％，利用质谱分析法确证了两种GD二肽酯为Gly-Asp-（OEt）2和Gly-Asp-（OMe）2．

在线教育发展下的微实验建设初探——以PAS反应微实验建设为例

在我国教育信息化进程的推动下,在线教学、翻转课堂教学模式得到了广泛推广和师生的普遍认同。吉林大学根据人才培养需要,不断进行网络教学改革,完善网络教学平台。吉林大学国家级生物实验教学示范中心基于自身在实验教学方面的优势,以国家精品资源共享课、国家精品课为依托,不断加强网络实验建设,本文以PAS反应为例,介绍微实验建设方法及实践效果。

水相合成磁性Fe_3O_4纳米颗粒

采用化学共沉淀法制备Fe3O4纳米粒子,选择NH3.H2O作为沉淀剂,并与Fe2+和Fe3+的混合溶液同时同速滴加到由氨水和硝酸氨组成的缓冲溶液中,制得了磁性Fe3O4纳米粒子.考察了磁性纳米粒子合成的一些影响因素,并用透射电镜(TEM)、X射线粉末衍射(XRD)、红外光谱等方法对其性质进行了初步表征.

碱性氨基酸对螺旋型抗菌肽生物活性的影响

以螺旋型抗菌肽HPRP-A1为模板,利用精氨酸(R)对HPRP-A1序列中的赖氨酸(K)进行不同位点、不同数量的取代,结合改造前后抗菌肽的螺旋度、疏水性及自聚集常数等理化性质,研究了螺旋型抗菌肽结构与活性的相关性.进一步结合脂质体模拟和细胞膜穿透实验,对螺旋型抗菌肽与不同类型细胞膜的相互作用过程进行了研究.结果表明,增加精氨酸的取代数量,会增强抗菌肽的疏水性和螺旋度,导致螺旋型抗菌肽对真核细胞的毒性增强;但精氨酸的增加会伴随着抗菌肽自聚集能力的降低以及抗菌肽对细菌细胞膜的渗透性降低,导致抗菌肽的抗菌活性降低.本研究对于设计和改造具有应用前景的螺旋型抗菌肽具有重要指导意义.

组织学石蜡切片制作中固定方法的改良

固定方法是组织学中制作优良石蜡切片的基础。通过对小鼠组织取材方法的改进、不同固定液的对比、固定方法的改良,探索出一种简单且易于本科生实验教学的石蜡切片固定方法。

螺旋型抗菌肽的疏水性对抗细菌与抗真菌活性的影响比较

α-螺旋型多肽HPRP-A1由15个氨基酸残基组成,来源于幽门螺杆菌核糖体蛋白L1的N端.本研究以HPRP-A1为模板,在其非极性面中心通过单个氨基酸定点取代的方法,形成一系列疏水性不同的多肽类似物,系统地研究疏水性对α-螺旋型多肽生物活性的影响.结果显示,多肽疏水性及所带净电荷对多肽生物活性起着重要的作用;HPRP-A1及疏水性相对较高的多肽类似物具有较好的广谱抗菌活性(包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌),但也有相对较高的溶血活性;多肽的疏水性与所带净电荷的变化对多肽抗细菌活性与抗真菌活性所产生的影响有着相似的变化趋势和程度.这意味着多肽与细菌的作用机制和多肽与真菌的作用机制存在一定的相关性.多肽对细菌和真菌的抗菌活性存在特异性,为设计出具有临床应用前景的抗菌肽药物奠定了基础.