中国10个民族永生细胞系的建立与保存

永久保存我国各少数民族的遗传信息是中国人类基因组计划的重要内容,为此,采用EB病毒(epstein-barrSvirusEBV)上清液及Hepes转化外周血B淋巴细胞,并加入环孢霉素A(cyclosporineA)抑制T淋巴细胞,成功地对中国哈萨克族、满族、朝鲜族、赫哲族、蒙古族、锡伯族、回族、布依族、四川汉族和福建汉族的部分个体建立了永生细胞系。其中哈萨克族64株,朝鲜族58株,赫哲族18株,锡伯族43株,回族63株,布依族67株,满族65株,蒙古族62株,四川汉族51株,福建汉族58株。总计549株。为保存我国各民族遗传资源、分析各少数民族间的遗传学差异及其起源,奠定了材料基础。

中国6个人群中Y染色体15个双等位基因标记变异频率分布及单体群分析

以 6个群体 (5个民族 ) 342名男性为研究对象 ,采用等位基因特异性PCR技术对Y染色体上 15个双等位基因标记进行基因分型 ,得到 15个标记的变异频率分布并界定了 6个群体的单体群。结果显示 ,两个汉族人群中M9G的频率相当高 (96 2 0 %和 96 4 3% ) ,为一特征性标志 ;四川汉族以高M95T(82 14 % )为显著特点 ;回族以M4 5A(18 5 7% )的高频率有别于其他 5个群体 (0 % )。进一步对单体群分析表明 ,4个少数民族群体享有共同的基本单体群 ,并根据群体间的共有单体群比较推测出 4个少数民族间的相对遗传距离 。

中国鄂温克、鄂伦春、达斡尔族永生细胞系的建立与保存

本文采用EBV(Epstein BarrVirus)上清液转化B淋巴细胞 ,并加入环胞霉素A(CyclosporineA)抑制T淋巴细胞 ,成功地对中国东北地区鄂温克族、鄂伦春族及达斡尔族的部分个体建立了永生细胞系 ,其中鄂温克族49株 ,鄂伦春族40株 ,达斡尔族51株 ,总计140株。永久保存我国特有民族的基因组 。

高浓度RA诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞

目的:高浓度RA诱导小鼠ESC体外向神经细胞分化。方法:通过5μMRA刺激拟胚体向神经前体细胞分化,在不同基质上进一步诱导神经前体细胞分化为神经细胞,通过免疫荧光鉴定。结果:5μmol/LRA诱导神经前体细胞分化;神经前体细胞分化为β-tubulinⅢ阳性神经细胞,β-tubulinⅢ阳性细胞中有55%为GABA阳性,4%为CHAT阳性细胞。

中国汉族人群resistin基因5′调控区与2型糖尿病的关系

目的 分析resistin基因 5′调控区单核苷酸多态性 (SNPs)与 2型糖尿病的关系。方法 对 30名 2型糖尿病患者及 30名非糖尿病对照者resistin基因 5′调控区进行测序分析 (所有受试者均为中国汉族人群 )。采用 χ2 检验比较两组间SNPs的差异。结果 共检测出 4个SNPs多态位点 ,分别为g .- 6 38G >A(0 .14 17)、g.- 5 37A >C(0 .0 6 6 7)、g .- 4 2 0C >G(0 .30 83)、g . 35 8G >A(0 .14 17)。统计显示 2型糖尿病患者与对照组之间各SNPs等位基因频率无显著性差异。结论 在中国汉族人群resistin基因 5′调控区多态位点与

紫杉醇诱导人胃癌MGC803细胞凋亡作用研究

目的:研究胃癌发生过程中原位细胞凋亡活动以及紫杉醇对人胃癌细胞系MGC803诱导细胞凋亡的作用。方法:用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测了胃癌MGC803细胞凋亡,用紫杉醇处理培养胃癌细胞MGC803、显微镜下进行观察并且进行琼脂糖电泳,流式细胞仪检测细胞周期分布和端粒体酶活性检测。结果:癌旁对照组原位凋亡细胞增多,紫杉醇处理胃癌细胞可以诱导细胞产生典型的细胞凋亡变化。DNA发生断裂,琼脂糖电泳产生梯形条带,细胞阻滞于G2/M期,端粒体酶活性下降。结论:在体内肿瘤细胞凋亡降低,细胞分裂可加快,癌旁对照中细胞凋亡增多,体外紫杉醇可以诱导胃癌细胞系MGC803凋亡。

紫杉醇与白藜芦醇联合应用对人胃癌MGC803细胞作用的研究

目的:研究紫杉醇(PA)联合白藜芦醇(RES)对人胃癌MGC803细胞株的影响。方法:采用MTT法检测两种药物单用和联合应用对MGC 803细胞的作用,光镜观察细胞结构变化,流式细胞术检测细胞周期分布。结果:PA可抑制MGC803细胞生长,呈剂量及时间依赖性(P<0.05);PA促进人胚肺成纤维细胞(HPF)生长,呈剂量依赖性(P<0.05);PA与RES联合应用对MGC803生长抑制有协同作用(P<0.05),光镜下细胞质内产生异常物质;PA对G0/G1期有阻滞作用,RES对S期有明显阻滞作用。结论:PA对胃癌MGC803细胞有抑制作用。PA与RES对胃癌MGC 803细胞抑制具有协同作用,与单用RES相比,PA与RES联合应用可减少RES的用药剂量。

四逆汤含药血清对阿霉素诱导心肌细胞损伤机制影响的研究

目的:观察四逆汤含药血清对阿霉素(ADR)引起的培养乳鼠心肌细胞毒性的影响。方法:采用原代培养的Wister大鼠乳鼠心肌细胞,以1.0μg/mL的ADR造成急性心肌细胞中毒模型,测定心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、心肌细胞丙二醛(MDA)含量、心肌细胞搏动频率及MTT分析法测定心肌细胞活力,测定过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、超氧化物歧化酶(Cu-SOD),观察大鼠生存率的变化。结果:四逆汤含药血清对ADR引起的心肌细胞损伤可减少LDH漏出量和心肌细胞内MDA含量,并改善心肌细胞活力和搏动频率,改善Cu-SOD的活性,延长大鼠生存期。结论:四逆汤含药血清对ADR引起的心肌细胞损伤有一定的保护作用,其作用机制与其抑制ADR引起的脂质过氧化损伤有关。

紫杉醇与白藜芦醇对人胃癌MGC803细胞蛋白表达及其细胞周期的作用

目的:实验研究紫杉醇(PA)、白藜芦醇(Res)合用对人胃癌MGC803细胞影响。方法:通过流式细胞仪(FCM)检测细胞周期,Western blot。方法:研究PA与Res合用前后对体外培养的人胃癌细胞MGC803对细胞的影响。结果:FCM显示细胞生长停止在S期,S期数分数为0.52,抑制细胞有丝分裂及DNA合成。Res与PA合用可以下调Bcl-2表达,上调Bax表达,对P-gp作用不明显。结论:PA与小剂量化疗药物Res合用,可获得化疗药物单独用药相同疗效下调Bcl-2表达,上调Bax表达,增加敏感性,减少药物副作用。

紫杉醇与白藜芦醇联合应用对人胃癌MGC803细胞作用的研究

目的研究紫杉醇(PA)联合白藜芦醇(RES)对人胃癌MGC803细胞株的影响。方法采用MTT法检测两种药物单用和联合应用对细胞的作用,光镜观察细胞结构的变化,联合应用判断两药合用效果,流式细胞仪检测MGC803细胞周期分布,并且检测端粒酶的活性。结果PA可抑制MGC803细胞的生长,且呈剂量及时间依赖性(P<0.05);光学显微镜下可见经PA和RES培养的胃癌细胞质内存在异常物质;PA对人胚肺成纤维细胞(HPF)生长起促进作用,且呈剂量依赖性(P<0.05);PA与RES联合应用对MGC803细胞生长的抑制具有协同作用(P<0.05);PA对G0/G1期有阻滞作用,RES有明显的S期阻滞作用,两者可从不同环节抑制细胞增殖,同时端粒酶活性受到抑制。结论PA对胃癌MGC803细胞有抑制作用,相同剂量对正常细胞无抑制作用,PA与RES对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用RES相比,PA与RES联合应用可减少RES的用药剂量。

中国4个少数民族中SDF1多态性研究

研究与HIV 1感染相关的基质细胞衍生因子 (SDF1)等位基因突变频率和多态性在中国 4个少数民族的分布特征。应用PCR RFLP等方法检测回族 (5 7例 )、鄂伦春族 (71例 )、蒙古族 (30例 )及锡伯族 (2 6例 )共 184个个体中SDF1 3’A基因突变频率。结果得出中国 4个民族中SDF1 3’A基因的基因频率分别为 :蒙古族为 38 3%,锡伯族为 2 3 1%,回族为 2 0 2 %,鄂伦春族为 10 6 %。中国 4个少数民族中SDF1 3’A等位基因频率存在较大的差异 (χ2 =37 82 6 ,P <0 0 1) ,提示这 4个民族的遗传结构存在着一定的差异。本研究为评估中国不同民族对HIV 1的易感性及艾滋病的流行病学研究提供了基本数据。

四逆汤含药血清对心肌毒性大鼠乳鼠血清Bcl-2 Bax水平影响的研究

目的:探讨四逆汤含药血清抗心肌毒性的疗效及其作用机制。方法:采用盐酸阿霉素(ADR)损伤W istar大鼠乳鼠心肌导致心肌毒性为模型。随机分为正常组、心脏毒性ADR模型对照组、卡托普利组、四逆汤含药血清组.测定大鼠乳鼠血清Bc l-2、Bax水平,并应用光镜观察心肌组织的病理变化。结果:与正常组比较,阿霉素致心肌毒性大鼠乳鼠血清Bax水平显著降低,血清Bc l-2水平明显升高,四逆汤及卡托普利均能降低Bc l-2水平,升高Bax水平(P<0.05)。光镜显示,四逆汤含药血清治疗组心肌细胞损伤程度明显低于模型组。结论:四逆汤含药血清能调节改善心肌毒性大鼠乳鼠的神经内分泌功能,拮抗过度激活的神经内分泌系统。

紫杉醇对人胃癌MGC803细胞形态和增殖的影响

目的研究紫杉醇对人胃癌MGC803细胞的细胞形态的影响和相关增殖因素的变化。方法采用MTT法测定药物敏感性;光镜、电镜、MTT法活细胞计数、流式细胞仪等方法观察其生物学特征的改变。结果0.1mg/mL、0.2mg/mL紫杉醇可以抑制MGC803细胞于S期,紫杉醇能抑制MGC803细胞生长增殖,并且呈浓度依赖性。结论0.1mg/mL、0.2mg/mL紫杉醇能明显地抑制MGC803细胞的增殖。

不同细胞因子对DC成熟的影响及细胞穿膜肽的穿膜效率比较

目的通过比较不同因子促进树突状细胞(Dendriticcells,DC)成熟的差别,探讨如何提高DC成熟度。进一步研究多种细胞穿膜肽(Cell penetrating peptide,CPP)的入胞效率,寻找高效的CPF负载肿瘤抗原,以提高DC靶向治疗肿瘤的效果。方法针对体外培养的DC细胞,应用不同种类、不同浓度的DC培养因子和成熟因子分别诱导DC成熟,通过倒置显微镜观察成熟DC细胞数量、形态;流式检测成熟DC细胞表达CD80、CD83、CD86、HLA-DR的水平。免疫荧光染色观察TAT、SecPen、PanPro和Pan四种细胞穿膜肽穿膜效率的异同。结果常量及倍量GM-CSF诱导成熟DC的数量无统计学差异(P>0.05),CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达无统计学差异;应用改良方案培养的成熟DC数量明显高于采用传统IL-4+GM-CSF及IFN-γ诱导的成熟DC数量,差异具有统计学意义(P<0.05),但是,成熟DC细胞CD80、CD83、CD86、HLA-DR等表面标记表达无统计学差异;SecPen的穿膜效率(83.3±3.0%)明显高于其他三种穿膜肽,具有统计学意义(P<0.05)。结论改变GM-CSF的浓度并不能提高成熟DC的数量和比例;相比传统方法,改良方法诱导的DC成熟能力比传统方法有优越性;穿膜肽可以有效进入DC细胞,但不同穿膜肽穿透细胞膜的能力有显著差异,在DC肿瘤疫苗的靶向治疗中需要谨慎选择。

白藜芦醇纳米微粒对体外人胃肿瘤MGC803细胞增殖和凋亡的影响

目的观察不同浓度白藜芦醇(RES)纳米微粒在不同时间段对人胃肿瘤MGC803细胞生长和凋亡的影响。方法应用MTT法测定不同浓度的RES纳米微粒、RES、5-FU对MGC803细胞分别在0、6、12、24、48、60 h的细胞生长抑制率。流式细胞仪分析MGC803细胞周期的改变,细胞免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达,检测端粒酶活性。结果MTT法显示不同浓度的RES纳米微粒可抑制MGC803细胞增殖(60μg/ml作用60h的抑制率达64%),并且与浓度和时间均呈正相关,流式细胞仪细胞周期分析提示RES纳米微粒可将MGC803细胞阻滞于S期,细胞免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调,端粒酶活性水平下降。结论RES纳米微粒可诱导人胃肿瘤细胞MGC803发生凋亡,延长药物对胃肿瘤细胞的有效作用时间,载药纳米微球没有改变RES成分的生物学活性。

白藜芦醇对人肝癌细胞系HepG2抑制作用的探讨

目的:观察白藜芦醇(R es)对体外培养的人肝癌细胞系H epG 2生长增殖的影响。方法:采用M TT法、流式细胞仪分析R es对肝癌细胞系H epG 2细胞生长的影响及其细胞周期的变化,并且检测端粒酶的活性。结果:R es对肝癌细胞系H epG 2的增殖具有抑制作用,IC50为5.91m g/L,流式细胞仪显示,R es能引起肝癌细胞系H epG 2细胞的S期阻滞,R es也能显著地抑制端粒酶的活性。结论:R es通过改变肝癌细胞系H epG 2细胞的细胞周期分布来抑制人肝癌细胞系H epG 2细胞的生长。

紫杉醇与白藜芦醇对MGC803细胞株作用机制的初步研究

目的实验研究紫杉醇（PA）、白藜芦醇（Res）合用对人胃癌细胞MGC803的影响。方法用MTT法观察PA与Res合并用药前后对体外培养的人胃癌细胞MGC803细胞存活率的影响，用光学显微镜观察形态学改变，并通过流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果Res与PA合用与分别单独应用相比，细胞存活率明显下降，其增效倍数为单独用药的1．75—3．71倍（P〈0.05），细胞生长停止在S期，S期所占分数为0.47，抑制细胞的有丝分裂及DNA合成。结论白藜芦醇与小剂量化疗药物紫杉醇合用，可获得化疗药物单独用药相同的疗效，紫杉醇增加化疗药对肿瘤细胞的细胞毒性作用，增加敏感性，减少药物副作用。

东北汉族人群resistin基因多态性与2型糖尿病慢性并发症的关系

目的:分析中国东北汉族人群resistin基因单核苷酸多态性与2型糖尿病慢性并发症之间的关系。方法:①选择2001-01/2002-12在哈尔滨医科大学附属第二医院内分泌科住院的2型糖尿病患者500例。均了解实验目的,并自愿接受。②采用葡萄糖氧化酶法测定血糖,采用全自动生化分析仪测定血浆总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇,采用化学发光仪测定血浆胰岛素及C肽,采用全自动糖化血红蛋白分析仪测定糖化血红蛋白。③从纳入的500例患者中随机选取30例2型糖尿病患者,采其外周静脉血4mL,提取外周血DNA;并用聚合酶链反应法对resistin基因5’端行选择性扩增;对聚合酶链反应产物进行纯化后进行测序。④采用SAS(Cary,NC)软件分析resistin基因单核苷酸多态性与哪些因素相关及这些因素与2型糖尿病慢性并发症的关系;两组均数间比较采用t检验。结果:2型糖尿病患者500例均进入结果分析。①发现resistin基因5'端调节区有5个多态位点,分别为:g.-638G>A,g.-537A>C,g.-420C>G,g.-358G>A,g.-238G>A。②具有g.-238G>A多态位点的2型糖尿病患者舒张压明显高于无该多态位点者(87.50±3.91,79.82±1.71,P<0.05)。③2型糖尿病患者心血管并发症、脑血管并发症、眼部并发症及神经病变均与舒张压呈显著正相关(检验统计计量为3.9483～18.2319,P<0.05～0.01)。结论:中国东北汉族人群中有g.-238G>A多态性的2型糖尿病患者更易发生心血管并发症、脑血管并发症、眼部并发症及神经病变。

大学新教师培养的初步研究

高等教育承担着培养社会急需的应用型、创新型人才的重任，而高素质的教师队伍是培养应用型、创新型人才的基本保证。因此，加强对新教师思想道德、教学业务、教学艺术、创新意识和为人师表等方面能力的培养十分重要。