国际参考实验室能力验证样品的均匀性评价

目的评价国际参考实验室能力验证样品(RELA-A/B)的均匀性是否满足参考实验室比对的要求。方法参照CNASGL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》,用Roche Modular P800生化分析仪测量2014至2016年连续3年RELA-A/B的14个项目,即丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、L-γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、总胆红素(T-Bil)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、葡萄糖(Glu)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)。计算测量结果均值()、标准差(s)和变异系数(CV),用单因素方差分析和SS≤0.3σ准则分析评价其瓶间差异。结果 RELA 2014A和2014B样品AST测量结果 CV>2.0%。除RELA 2016B样品CK测量结果 CV<2.0%外,其他样品CK测量结果 CV均>2%。单因素方差分析结果显示,所有样品中CK测量结果 F均>临界值4.39,差异有统计学意义(P<0.05);2015B样品ALT和T-Bil,2014A样品Cr测量结果 F均>临界值4.39,差异有统计学意义(P<0.05);其他测量结果 F均<临界值4.39,差异无统计学意义(P>0.05)。S_S≤0.3σ准则分析结果显示,所有样品CK测量结果 S_S>0.3σ,CK测量结果存在瓶间差异;其他项目测量结果 S_S均≤0.3σ,其他项目测量结果无瓶间差异。结论国际参考实验室能力验证样品CK项目存在瓶间差异,值得注意;其他项目均匀性能满足参考实验室能力验证要求。

大量输血方案在严重产后出血中的应用探讨

目的探讨产后大量输血时不同血液制剂的最佳应用比例。方法对2018年5月~2021年4月在广州医科大学附属第三医院产科实行大量输血方案的所有患者进行回顾性分析,收集包括患者一般情况、产后出血病因、出血量、输注的血液制剂品种和数量,以及患者转归等资料。结果胎盘因素是导致产后大出血的主要原因(84%),其中69%因胎盘植入所致。100例产后大出血患者接受了大量输血方案,其中84例患者的出血情况得到很好控制。纳入研究的患者平均出血量为(2778±1253)mL,分别输注红细胞(8.6±4.7)U、新鲜冰冻血浆(543±334)mL、普通冰冻血浆(352±343)mL。5组接受大量输血方案治疗的产后大出血患者中,第1组(即红细胞:血浆=1∶1)与第3组(即红细胞∶血浆=6∶4)输血有效率较高,分别为96.88%与94.12%。结论合理的大量输血方案是治疗产后大出血的重要手段,首先推荐红细胞与血浆为1∶1方案,其次是红细胞与血浆为6∶4方案,有条件应尽早搭配使用血小板和/或冷沉淀。

同位素稀释液相色谱串联质谱法测量血清未结合雌三醇的协作研究

目的用同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)候选参考方法进行实验室间血清未结合雌三醇(u E3)协作研究,通过该研究进一步确认方法的性能特征(正确度和精密度),并将该方法在国内参考实验室推广,推动u E3标准化进程。方法依据ISO/WD 15725-1和GB/T 6379标准,拟定我国血清u E3协作研究方案。协作研究分为两个阶段:初步试验和正式试验,共9家参考实验室参加。按要求收集5个浓度水平样品并进行均匀性评价,分发到9家参考实验室,要求每个样品每日重复测量5次,连续测量3 d。计算各实验室测量结果的偏移和精密度,用格拉布斯(Grubbs)检验和柯克伦(Cochran)检验识别离群值和离群实验室。根据合格实验室的结果计算靶值,并向离群实验室和偏出允许范围的实验室提供整改建议。结果样品均匀性评价:所有样品测量结果计算F值均小于F0.05(9,20)临界值,样品中u E3是均匀的。初步试验:Grubbs检验,1个实验室测量结果为离群值;Cochran检验,2个实验室检验结果为离群值。剔除离群值后计算靶值;2017E301为(22.08±0.24)nmol/L;2017E302为(33.46±1.67)nmol/L。2个实验室结果超出允许范围。正式试验:Grubbs检验,所有实验室测量结果均未检出离群值;Cochran检验,3个实验室数据出现离群值。剔除离群值后计算靶值,2017E303为(10.36±0.35)nmol/L,2017E304为(15.47±0.26)nmol/L,2017E305为(46.97±1.19)nmol/L;各实验室间测量结果不精密度分别为1.14%~2.21%、0.79%~1.93%、0.60%~2.09%,测量结果偏移分别为-6.18%~4.83%、-2.26%~2.39%、-4.19%~4.07%。结论通过组织开展协作研究,确认各参考实验室通过协作研究方案能够快速建立并运行u E3候选参考方法,除个别实验室外各实验室的检测性能满足预定要求(不精密度<3.0%,偏移<7.5%),进一步确认了该方法的性能和各实验室运行参考方法的能力。通过初步研究和正式研究对研究方案的各实验环节进行了验证和完善;推动了u E3项目参考方法在我国参考实验室的运行,为后续厂商试剂主校准品联合定值或标准物质研制搭建了平台,促进u E3项目的标准化。

4种全自动核酸提取仪提取全血DNA效率的比较

目的比较4种全自动核酸提取仪在全血基因组检测中的核酸提取效果。方法分别用4个厂家的全自动核酸提取仪按预定的提取程序自动执行全血核酸提取,并与本实验室手工提取的核酸进行纯度和浓度比较。结果 4种全自动核酸提取仪提取全血核酸的260/280值均满足纯度1.7~2.0要求,并且核酸提取浓度高于本实验手工提取法或与本实验室手工提取法相当。结论 这4种全自动核酸提取仪提取效果优,自动化程度高,能满足临床标本应用。

四磨汤口服液对肠粘连大鼠盲肠NLRP3炎症复合体相关蛋白表达的影响

目的探讨四磨汤口服液对肠粘连模型大鼠盲肠核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症性复合体（以下简称NLRP3炎症体）表达的影响。方法选择健康雄性sD大鼠45只，随机分配为对照组、模型组和治疗组各15只。模型组和治疗组按Ellis法制备成肠粘连模型。造模成功后，治疗组给予四磨汤口服液lml／100g灌胃，对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃，均干预7天。参照Nair法对肠粘连程度进行评级；采用Western blot法检测盲肠组织NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）、白细胞介素1β（IL—1β）的蛋白表达量。结果模型组的粘连程度明显升高，且NLRP3、Caspase-1、IL-1β在盲肠组织均有表达，明显高于对照组（P〈0．05）。与模型组相比，四磨汤口服液治疗组粘连程度明显减轻，差异有统计学意义（P〈0．05）；四磨汤口服液治疗组三个检测项目蛋白表达水平明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论肠粘连的形成可能与NLRP3炎症复合体相关蛋白的表达相关。四磨汤口服液减少大鼠盲肠组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达量，从而降低肠粘连程度。

腺苷脱氨酶三种原核表达载体的构建及蛋白表达

目的利用分子克隆技术表达腺苷脱氨酶蛋白。方法从人白细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,再以其为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增腺苷脱氨酶基因,然后将目的基因连接到3种原核质粒pET-28b、pET-32a(+)和pHSIE中,再将测序完全正确的克隆质粒用CaCl2法转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白表达,并筛选最优表达条件,经Western-blot和SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。结果 3种质粒载体携带的目的基因DNA测序结果证实其很好地连接入载体质粒,表达的ADA蛋白经Western-blot和SDSPAGE鉴定符合,最优表达条件为诱导剂IPTG浓度0.4mmol/L,表达温度为16℃,表达时间为24h。结论该实验成功构建了腺苷脱氨酶的3个原核载体(BL21+pET-28b+ADA,BL21+pET-32a+ADA,BL21+pHSIE+ADA),且3个载体均成功高效表达了腺苷脱氨酶蛋白。

老年冠心病合并2型糖尿病患者血尿酸血脂水平对肠道菌群环境的影响

目的分析老年冠心病(coronary heart disease,CHD)合并2型糖尿病(T2DM)患者血尿酸、血脂水平对肠道菌群环境的影响,为老年CHD合并T2DM患者的治疗提供参考。方法实验组选取2020年1月至2021年1月来广东省中医院珠海医院治疗的老年CHD合并T2DM患者160例,患者年龄均>60岁,根据尿酸(UA)水平分为高尿酸组(n=62)和尿酸正常组(n=98),根据总胆固醇(TC)水平分为高胆固醇组(n=74)和血脂正常组(n=86),选择同期治疗的老年正常患者60例为对照组,均测定采用生化分析仪测定分析所有患者尿酸、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和总胆固醇(TC)水平,并且测定所有患者粪便标本中肠道菌群分布情况(双歧杆菌、乳杆菌、大肠埃希菌、幽门螺杆菌、链球菌);采用Spearman直线相关分析老年冠心病患者血尿酸、血脂水平和肠道菌群分布的相关性研究。结果实验组患者血清UA、LDL-C和TC水平明显高于对照组(P<0.05)。高胆固醇组乳酸杆菌和双歧杆菌明显低于血脂正常组,高胆固醇组大肠杆菌显著高于血脂正常组(P<0.05),两组幽门螺杆菌和链球菌间差异无统计学意义(P>0.05);高尿酸组双歧杆菌和乳酸菌明显低于尿酸正常组(P<0.05),高尿酸组大肠杆菌、幽门螺杆菌和链球菌显著高于尿酸正常组(P<0.05);Spearman相关分析显示UA与双歧杆菌和乳酸菌呈负相关,相关性系数为(r_(1)=-0.512,r_(2)=-0.439,P<0.05);UA与大肠杆菌、幽门螺杆菌和链球菌呈正相关,相关性系数为(r_(1)=0.491,r_(2)=0.396,r_(3)=0.218,P<0.05);Spearman相关分析显示TC与双歧杆菌和乳酸菌呈负相关,相关性系数为(r_(1)=-0.492,r_(2)=-0.427,P<0.05);TC与大肠杆菌呈正相关,相关性系数为(r=0.417,P<0.05);LDL-C与双歧杆菌和乳酸菌呈负相关,相关性系数为(r_(1)=-0.457,r_(2)=-0.404,P<0.05);LDL-C与大肠杆菌呈正相关,相关性系数为(r=0.404,P<0.05)。结论老年CHD合并T2DM患者存在肠道菌群分布异常,肠道菌群丰度与CHD合并T2DM患者的血脂、血尿酸水平具有一定的相关性。