适于HIV-1 p24抗原检测试剂的单抗制备与筛选

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP”,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础。

一种定量检测人血清高敏C反应蛋白的化学发光免疫方法

旨在建立一种可定量检测人血清高敏CRP的化学发光检测方法（High—sensitivity C—reactive protein quantifiable chemiluminescent immunoassay，hs—CRPCLIA）。首先利用亲和层析和离子交换层析技术从肝硬化病人腹水中纯化出高纯度的天然CRP作为免疫原制备了22株CRP单克隆抗体（单抗1，其中13株单抗在磷酸胆碱配体捕获ELISA中呈阳性，然后利用方正滴定法筛选出单抗10C5和10C11建立了hs-CRP CLIA。试剂盒评估结果显示：该方法对血清中干扰物质IgG、血红蛋白、甘油三酯等无非特异性反应；该方法检测灵敏度高，在0．04～20．38mg／L范围内定量检测人血清CRP标准品呈良好线性关系限0〉0．993）；该方法准确性高、可重复性好，平均回收率为99％，批内差为4．2％～5．8％，批间差为9．0％～11．5％；该方法与进口商品化高敏CRPELISA试剂盒平行比较检测90份血清标本，结果显示两者有良好的可比性（r=0．968）。综上，建立的hs—CRPCLIA是一种准确、可靠、可定量的高灵敏C反应蛋白检测方法，该方法的临床应用，有利于改善我国心脏病风险评估及肠炎性疾病预后判断。

H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速诊断试剂的改进与初步评价

H5N1病毒高度变异,为确保本中心研制的H5N1禽流感病毒抗原快速诊断试剂对不同变异分支的H5N1病毒,特别是实时流行株的高度检测准确性,本研究根据抗原活性变异情况对中心开发的第一代H5抗原快速诊断试剂进行了改进。改进后的第二代H5抗原快速诊断试剂(H5-Dot-2nd)对25株代表亚洲地区流行的不同进化分支的H5N1禽流感病毒检测均为阳性,其中12株检测下限达到0.01HA;而对20株32HA滴度的非H5亚型流感病毒株检测均为阴性;不同机构的评价结果显示,H5-Dot-2nd的灵敏度比国外同类试剂高出10～1000倍,对非H5现场标本特异性达到99.0%(399/403)。上述结果提示,H5-Dot-2nd对历年来特别是当前流行株均具有很好的检测灵敏度,能更好地满足流感疫情监控的需要。