为了在鸡基因组上对AMHR2基因进行精确编辑,该研究利用crispr.mit.edu:807网站设计并通过PCR退火拟合获得成对的AMHR2基因靶位点,将靶位点分别整合进pX330-U6-Chimeric_dBsa I-CBh-hSpCas9载体骨架,构建靶向AMHR2基因的成对CRISPR/Cas9...为了在鸡基因组上对AMHR2基因进行精确编辑,该研究利用crispr.mit.edu:807网站设计并通过PCR退火拟合获得成对的AMHR2基因靶位点,将靶位点分别整合进pX330-U6-Chimeric_dBsa I-CBh-hSpCas9载体骨架,构建靶向AMHR2基因的成对CRISPR/Cas9敲除载体。将包含成对靶位点的DNA序列整合进pB-CMV-DsRed-CAG-Chimeric.200 bp repeat.Puro-T2A-GFP载体骨架,构建与敲除载体对应的双荧光报告载体。载体测序鉴定正确后分别共转染HEK293T细胞与鸡DF-1细胞,通过细胞荧光粗略判断CRISPR/Cas9系统是否工作。随后,利用Puromycin对基因编辑阳性的DF-1细胞进行药物筛选富集,提取细胞基因组进行TA克隆,进一步检测CRISPR/Cas9系统的工作效率。结果表明靶向鸡AMHR2基因的CRISPR/Cas9敲除系统构建成功,且成对靶位点敲除系统的工作效率高于单一靶位点敲除系统,CRISPR/Cas9敲除系统在DF-1细胞基因组上对AMHR2基因的敲除效率约为60.0%,并在鸡DF-1细胞基因组上实现了AMHR2基因的精确编辑。展开更多
为持续改进质量管理,确保检验检测工作质量,在实验室质量管理中,运用失效模式和效益分析(failure mode and effects analysis,FMEA)进行风险管理。本文基于FMEA的实验室质量管理方式,以人、机、料、法、环为分类方式,结合近6年内外部评...为持续改进质量管理,确保检验检测工作质量,在实验室质量管理中,运用失效模式和效益分析(failure mode and effects analysis,FMEA)进行风险管理。本文基于FMEA的实验室质量管理方式,以人、机、料、法、环为分类方式,结合近6年内外部评审中所产生的不符合项、原因分析及纠正措施的具体示例进行评估分析。通过将实验室风险评估后的风险等级结合实验室现有的5S管理体系,提出针对性的应对措施,以期能有效地控制风险,更好地开展实验室质量管理。FMEA模型在实验室质量管理中的运用,可以清晰分析出实验室当前存在的风险,防止高风险质量问题的发生,有效促进5S管理体系逐步开展,不断完善实验室质量管理。展开更多
文摘为了在鸡基因组上对AMHR2基因进行精确编辑,该研究利用crispr.mit.edu:807网站设计并通过PCR退火拟合获得成对的AMHR2基因靶位点,将靶位点分别整合进pX330-U6-Chimeric_dBsa I-CBh-hSpCas9载体骨架,构建靶向AMHR2基因的成对CRISPR/Cas9敲除载体。将包含成对靶位点的DNA序列整合进pB-CMV-DsRed-CAG-Chimeric.200 bp repeat.Puro-T2A-GFP载体骨架,构建与敲除载体对应的双荧光报告载体。载体测序鉴定正确后分别共转染HEK293T细胞与鸡DF-1细胞,通过细胞荧光粗略判断CRISPR/Cas9系统是否工作。随后,利用Puromycin对基因编辑阳性的DF-1细胞进行药物筛选富集,提取细胞基因组进行TA克隆,进一步检测CRISPR/Cas9系统的工作效率。结果表明靶向鸡AMHR2基因的CRISPR/Cas9敲除系统构建成功,且成对靶位点敲除系统的工作效率高于单一靶位点敲除系统,CRISPR/Cas9敲除系统在DF-1细胞基因组上对AMHR2基因的敲除效率约为60.0%,并在鸡DF-1细胞基因组上实现了AMHR2基因的精确编辑。
文摘为持续改进质量管理,确保检验检测工作质量,在实验室质量管理中,运用失效模式和效益分析(failure mode and effects analysis,FMEA)进行风险管理。本文基于FMEA的实验室质量管理方式,以人、机、料、法、环为分类方式,结合近6年内外部评审中所产生的不符合项、原因分析及纠正措施的具体示例进行评估分析。通过将实验室风险评估后的风险等级结合实验室现有的5S管理体系,提出针对性的应对措施,以期能有效地控制风险,更好地开展实验室质量管理。FMEA模型在实验室质量管理中的运用,可以清晰分析出实验室当前存在的风险,防止高风险质量问题的发生,有效促进5S管理体系逐步开展,不断完善实验室质量管理。