miR-144/451的体外红系发生示踪揭示LINC01569的潜在红系发生调控影响

目的用已构建的miR-144-GFP-H1人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)示踪细胞株,以GFP荧光信号报告miR-144表达描述红系发生的进展程度,探究在红系发生过程中lncRNA的潜在功能并初步验证其功能影响。方法利用已构建的miR-144/451-GFP-H1细胞株(下文简称144-H1)进行体外红细胞诱导培养。以CD71,GPA表面分子描述进入红系发生阶段的细胞亚群。以miR-144的GFP报告基因为关键区分,对GFP阳性(高红系发生倾向)和阴性细胞群(低红系发生倾向)分别进行转录组测序,获取差异性表达的lncRNA。选取具备验证价值的lncRNA条目进行初步功能验证。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术设计对应lncRNA的功能干扰方案并获取对应lncRNA功能敲除的144-H1细胞株。使用该敲除细胞株与非敲除的144-H1细胞株进行红细胞的平行诱导培养,寻找差异节点,初步验证其对在体外发育模型下对红系发生的影响效应。结果1)构建的144-H1细胞株能够在进入体外红细胞诱导阶段后表达GFP荧光蛋白,提示miR-144的启动。2)在CD71,GPA双阳群中,GFP阳性亚群和GFP阴性亚群存在显著的lncRNA表达差异。3)对多个lncRNA条目设计了能够有效干扰其功能的序列区段删除基因编辑方案。验证编辑成功。在敲除细胞株中,lncRNA的一部分序列被直接删除。4)在红细胞诱导培养的平行验证试验中,LINC01569的功能敲除株对比非敲除株表现出明显的流式亚群差异和细胞增殖能力差异:①敲除株的GFP荧光持续高表达;②敲除株CD71-GPA双阳群在红细胞成熟过中比例持续降低;③敲除株未观察到显著的血红蛋白表达,无明显红色;④敲除株细胞增殖能力远低于非敲除株(P<0.05)。结论成功利用144-H1细胞株对lncRNA在红系发育中的潜在功能进行了探究,可设计更精密的体外发育实验来提高lncRNA功能的抓取精度。在差异性表达的lncRNA条目中,LINC01569经初步验证,对红系发生过程存在调控作用。LINC01569的功能缺失严重影响红细胞的正常分化与增殖。LINC01569在红系发生过程中的具体调控机制有待进一步探索与研究。

藏沙蒿内生真菌分离鉴定与系统进化分析

为了探讨西藏藏沙蒿内生真菌种类与种群分布情况,对采集自西藏曲水的藏沙蒿样品表面消毒后进行内生真菌分离,并采用形态学和ITS序列分析技术对分离到的菌株进行种属鉴定,通过MEGA7.0软件进行系统进化分析。结果表明,藏沙蒿内存在丰富的内生真菌,从其根、茎、叶和花组织中共分离到48株真菌,总相对分离频率为85.42%。其中镰刀菌属(Fusarium sp.)在上述组织内均存在,分布最为广泛,而链格孢菌属(Alternaria sp.)在藏沙蒿植株内分离频率最高,是藏沙蒿内生真菌的优势菌属。研究结果可进一步丰富蒿属植物内生真菌的多样性,也为藏沙蒿内生真菌次生代谢产物的研究奠定了基础。

奶牛乳房炎的微生物学诊断及综合防治

陕西某牛场发生奶牛乳房炎,从发病症状典型的病牛牛乳中无菌操作采样,接种培养分离细菌,分离一株革兰阴性细菌(G-),通过细菌生物学特性检验、生理生化试验以及动物致病性试验,从中鉴定出致病菌大肠埃希菌(Escherichia coli)。通过药敏试验,发现此细菌对诺氟沙星、氧氟沙星、大观霉素、庆大霉素、环丙沙星等抗生素敏感,对链霉素、苯唑西林、麦迪霉素、复方新诺明、万古霉素等抗生素有耐药性,经腹腔注射对小鼠有一定的致病作用。

西藏3种蒿属植物营养成分与矿物质元素含量研究

本试验采用国标法对西藏3种蒿属植物藏沙蒿(Artemisia wellbyi)、大籽蒿(Artemisia sieversiana)和青蒿(Artemisia annua)的主要营养物质、氨基酸和矿物质元素含量进行测定。结果显示:3种蒿属植物的粗脂肪、粗蛋白、粗纤维、粗灰分含量差别较大,大籽蒿粗蛋白含量最高(3.34%),青蒿最低(2.01%),相互间差异显著(P<0.05);矿物质元素含量差别也较大,常量矿物质元素中,三者均是钾含量最高,镁含量最低;微量矿物质元素中,三者均是铁含量最高,硒含量最低;3种植物均含有16种水溶性氨基酸,大籽蒿氨基酸总量最高(17.59%),青蒿的最低(7.99%)。因此,在牧草匮乏季节,藏沙蒿、大籽蒿和青蒿均可作为西藏后备牧草,供牛羊等牲畜饲用,其中大籽蒿营养价值更为全面。

翠雀内生真菌分离鉴定及分布特性研究

旨在探明有毒植物翠雀的内生真菌种类,作者采用表面消毒法分离,运用形态学鉴定,采用ITS序列构建系统进化树,确定了其内生真菌的种类。结果显示,从翠雀植物中分离得到22种内生真菌,将其根据亲缘关系进行系统进化分析,主要分为Ⅰ和Ⅱ两大种群,分属于6纲、6目、6科、7属,其中,链格孢属真菌(Alternaria sp.)为优势菌(占分离菌株数的31.82%,主要分布于花和叶中),内生真菌在花中分布最普遍(占分离菌株数的40.91%),其次,为叶(31.82%)、根(22.73%)和茎(4.55%)。结果表明,翠雀内生真菌在不同组织中的分布普遍性不同。

金龟子绿僵菌发酵液中苦马豆素含量及催化酶基因mRNA表达分析

旨在探明金龟子绿僵菌发酵液中苦马豆素含量及与苦马豆素生物合成有关的催化酶基因mRNA表达的关系,将金龟子绿僵菌接种于察氏培养基进行发酵培养,运用Q Exactive高分辨质谱仪检测培养第1、3、5、7天发酵液中苦马豆素的含量,采用qRT-PCR法检测培养第1、3、5、7天发酵液中苦马豆素生物合成通路上的催化酶基因SwnA、SwnH1、SwnH2、SwnK、SwnN、SwnR和SwnT的mRNA转录水平。结果显示,根据苦马豆素质量浓度和峰面积的变化测算出回归方程为y=31302.5x-45910.5(R2=0.9967),在培养第3天发酵液中苦马豆素含量最高为174.014μg·mg^-1;SwnA、SwnH1、SwnH2、SwnK、SwnN、SwnR和SwnT基因在不同发酵时期mRNA表达差异较大,其中SwnR基因mRNA表达与发酵液中苦马豆素含量变化相一致,而SwnH2基因mRNA表达与发酵液中苦马豆素含量变化相反。结果表明,金龟子绿僵菌SwnR基因mRNA表达与苦马豆素合成关系密切,可为后续开展苦马豆素微生物发酵工艺及其生物合成通路研究提供重要参考。

小鼠亚急性乌头碱中毒的脏器系数和血液生化指标分析

为了探讨乌头碱对小鼠血液生化指标及脏器系数的影响,120只小鼠被随机分成4组,即对照组(生理盐水)、低剂量组(0.14μmol/L)、中剂量组(0.28μmol/L)、高剂量组(0.56μmol/L),连续灌胃30 d。分别于第10、20、30天每次每组随机采集10只小鼠血液,用全自动生化分析仪测定乌头碱对小鼠血清ALT、AST活性及BUN、CRE、TC、TG、TP、ALB、GLU含量的影响,并于第30天时采集小鼠大脑、小脑、心、肝、脾、肺、肾。结果显示,各攻毒组小鼠均表现不同程度的中毒症状,且平均体重增长趋势均低于对照组。高剂量组小鼠肝、脾、肺、大脑的脏器系数明显改变(P<0.05或P<0.01)。随攻毒浓度的增加,各染毒组BUN、TC、GLU含量及ALT、AST活性呈升高趋势,与对照组相比,除低剂量组外,差异显著(P<0.05或P<0.01),CRE、TG含量先降低后升高,TP、ALB含量持续降低,部分组间差异显著(P<0.05)。结果表明,不同剂量乌头碱对小鼠脏器系数和血液生化指标有显著影响,且存在明显时间和剂量效应关系。

露蕊乌头内生真菌的分离与鉴定

为探明甘肃露蕊乌头内生真菌的种类与种群分布情况,对甘肃天祝的露蕊乌头样品采用表面消毒法进行内生真菌分离,用形态学和ITS序列分析技术对分离得到的菌株进行种属鉴定,并通过MEGA5.05软件进行系统进化分析。结果表明,露蕊乌头内存在丰富的内生真菌,从其茎、叶、根、花和种子中分离得到的内生真菌共33株,经过鉴定,分别属于2纲、3目、3科、4属;总相对分离频率为93.94%;内生真菌对叶的侵染频率最高,茎次之,种子最少;青霉属(Penicillium sp.)在露蕊乌头植株内相对分离频率最高,是露蕊乌头内生真菌的优势菌种,且在上述组织内均存在,分布最广泛;将所得到的菌株使用MEGA 5.05软件作系统进化分析,可根据亲缘关系远近分为种群Ⅰ、种群Ⅱ和种群Ⅲ。试验结果可丰富乌头属植物内生真菌的种群多样性,也为后续露蕊乌头内生真菌的次生代谢产物研究奠定基础。

亚急性乌头碱中毒小鼠的病理组织学变化

为了探讨乌头碱对小鼠病理组织学变化的影响,120只小鼠被随机分成4组,即对照组(生理盐水)、低剂量组(0.14μmol/L)、中剂量组(0.28μmol/L)、高剂量组(0.56μmol/L),连续灌胃30 d。期间记录小鼠临床症状表现,于第30天时处死小鼠,采集大脑、小脑、心、肝、脾、肺和肾,对其进行HE染色并观察病理组织学变化。结果显示,各攻毒组小鼠均表现不同程度的中毒症状,以发汗最为明显;光学显微镜观察各攻毒组小鼠心脏心肌纤维肿胀,间质静脉血管充血;大脑有噬神经现象,小脑浦肯野细胞变形、坏死;肺脏肺泡壁增厚,肺泡腔炎性细胞浸润;肝脏肝细胞索凌乱,肝细胞质空泡化;脾脏巨核细胞增多,脾血窦扩张;肾小管间质充血、出血明显。结果表明,亚急性乌头碱中毒可引起小鼠多系统器官毒性损伤,其中以心脏和神经毒性最为明显。

西藏黄花蒿内生真菌分离与鉴定

为探讨西藏黄花蒿内生真菌种类与种群分布情况,对采集于西藏曲水的黄花蒿样品,用表面消毒法对样品消毒后进行内生真菌分离,获得36株内生真菌。通过形态学和rDNA-ITS序列分析技术对所得菌株进行种属鉴定,并通过MEGA软件进行系统进化分析。结果表明,西藏地区黄花蒿内生真菌丰富,从其根、茎、叶和花组织中共分离到36株内生真菌,总相对分离频率为91.67%。其中链格孢菌属(Alternaria sp.)在黄花蒿植株内分离频率最高,为优势菌属。拟壳多孢属(Stagonosporopsis sp.)存在于根、茎和叶中,分布最广。研究结果丰富了黄花蒿内生真菌种群多样性,并为产青蒿素内生真菌筛选奠定了基础。

微生物有机肥料的生产原理及其应用

微生物有机肥料是利用固氮菌,解磷菌,解钾菌等植物益生菌在一定的条件下对动物粪便、植物秸秆等物质进行微生物发酵所产生的肥料,统称微生物有机肥料。微生物有机肥料是植物生长的最佳肥料,使用微生物有机肥料的植物所产生的农产品品质优良,并且不含化学肥料所引起的化学污染。为了进一步了解微生物有机肥料的使用条件,认识微生物有机肥料的利弊的相关知识,并在正确认识的基础上更好的生产和利用微生物有机肥料,本文概括的介绍微生物有机肥料的生产原理以及使用条件。