推进高校文化传承与创新及文化育人的研究

文化传承与创新是现代高校功能的重要内容,对高校建设与大学生成长具有十分重要的作用。高校要坚持育人导向,在坚持自觉、自信、自强与自醒的文化意识下,切实加大文化传承与创新力度,使高校通过校园文化育人功能来推进高校文化传承与创新。

高校辅导员构建和谐师生关系探析

如今全社会都在提倡"尊师重教",面对着社会发展的趋势,高校的师生关系比较和谐,构建和谐师生关系也将成为时代发展的需求。高校的辅导员与学生有着密切的关系,因此应该从辅导员着手构建和谐师生关系。本文主要从高校辅导员与大学生关系的现状及原因进行分析,通过讲述高校辅导员在构建和谐师生关系中所起的作用,提出了高校辅导员在构建和谐师生关系的几条对策,希望能够为构建和谐师生关系贡献力量。

红海榄根部盐胁迫反应的比较蛋白质组学分析

红海榄（Rhizophora stylosa）是一种典型的红树林盐生植物.本研究利用蛋白组学技术对淡栽（R0）和3%NaCl盐栽（R3）处理后的红海榄根部总蛋白进行了比较研究.双向电泳图谱的结果表明,R0和R3分别有981和972个蛋白点,蛋白点主要集中在分子量28-70 kD,等电点4.0-8.5之间.R0和R3之间差异明显的有15个蛋白点.其中,8个蛋白的表达量在R0中表达增高（10倍）,而在R3中相对下降.另外,7个蛋白的表达量在R0中较低,而在R3中表达量显著增高.对这15个蛋白点进行肽质量指纹图谱分析,10个蛋白点找到匹配蛋白.功能预测分析发现,在盐水栽培上调的蛋白质一般与逆境胁迫有关,淡水栽培上调的蛋白质一般与基本代谢有关.这些研究结果为进一步研究红海榄的耐盐机理提供了有意义的线索.

一种火龙果病原真菌的分离鉴定与杀菌剂筛选

为了鉴定火龙果的病原菌,本文从火龙果发病枝条分离病原体,通过菌丝和孢子形态学观察、核糖体rRNA基因序列分析鉴定和回接实验,首次在海南发现火龙果感染溃疡病,其病原菌为新暗色柱节孢(Neoscytalidium dimidiatum);随后,分别用多菌灵、精甲霜.锰锌、氰烯菌脂、甲基托布津、达科宁(百菌清)等5种常见杀菌剂在培养基上进行抑菌实验,从抑菌圈的大小初步鉴定多菌灵为该病害的有效杀菌剂,为指导生产上的化学防治提供了选择杀菌剂的重要依据.

橡胶树HbDHN1基因克隆及表达分析

采用Macroarray印迹杂交技术从本实验室构建的橡胶树机械伤害诱导的树皮抑制性差减杂交(SSH)cDNA文库中检测到1个差异表达EST。采用RT-PCR和RACE技术获得了该基因全长cDNA序列,包括124bp的5'端非编码区,337bp的3'端非编码区和1个编码224个氨基酸的开放阅读框。该cDNA编码的蛋白具有植物脱水素蛋白的特征性结构,属于SKn类脱水素蛋白,命名为HbDHN1,与其它植物的SKn类脱水素蛋白具有49.0%～68.2%的氨基酸序列同源性。RT-PCR分析表明,机械伤害对HbDHN1基因的表达没有明显影响,受伤组织的脱水显著上调该基因的表达。

拟南芥NiNJA基因酵母双杂诱饵载体构建及互作蛋白的筛选

JAZ蛋白是植物茉莉酸信号途径的重要负调控因子,JAZ与NiNJA形成蛋白复合体抑制茉莉酸下游转录因子的转录活性,NiNJA蛋白是联系JAZ蛋白与下游转录因子的重要因子。为了研究NiNJA调控的下游基因,首先构建了NiNJA基因的诱饵载体pGBKT7-NiNJA,然后转化酵母Y2HGold感受态,通过自转录激活实验,发现诱饵载体pGBKT7-NiNJA没有自转录激活活性。在此基础上,从拟南芥"Mate&PlateTM"Library进行酵母双杂筛选,获得若干个与NiNJA互作的蛋白,为下一步鉴定NiNJA的互作蛋白及茉莉酸的信号调控途径打下基础。

结核分枝杆菌16kDa与GST融合表达及纯化

目的:构建融合表达GST和结核分枝杆菌16kDa蛋白的表达系统,摸索表达条件及制备方法。方法:根据16kDa蛋白的基因序列设计引物,从结核菌基因组DNA中扩增该基因,酶切后插入表达载体,测序证实后转入大肠杆菌JM109菌株,经IPTG诱导表达,产物经谷胱甘肽-琼脂糖凝胶法纯化。结果:16kDa基因产物大小、酶切片断大小和载体的大小与设计一致、16kDa基因测序的结果与目的基因完全符合。表达纯化的蛋白的大小与蛋白质分子量标准相比较一致。结论:构建的表达载体成功,纯化的蛋白即为目的蛋白。

适合于高通量测序的槟榔总RNA的提取方法

为了获得能满足高通量测序要求的槟榔叶片总RNA,采用通用植物总RNA提取试剂盒和异硫氰酸胍-苯酚法提取槟榔叶片的总RNA。结果表明:异硫氰酸胍-苯酚法提取的总RNA完整性好、纯度高,通用植物总RNA提取试剂盒不能从槟榔叶片中提取完整的总RNA;70℃,10 min的热处理会导致槟榔总RNA的降解,苯酚/氯仿抽提能得到高纯度、完整性好的总RNA;总RNA质量浓度达到979 mg·L-1,OD260/OD280=1.98,OD260/OD230=2.31,能满足转录组高通量测序的要求。

HbCoi1基因启动子酵母单杂pHIS载体的构建及互作蛋白筛选

茉莉酸是调节天然橡胶树产胶的主要激素,HbCoi1是茉莉酸信号的受体,研究HbCoi1基因的表达调控对了解橡胶树的产胶机理具有重要的意义。首先PCR扩增HbCoi1基因的启动子,然后将目标序列插入pHis2.1载体,构建酵母单杂诱饵载体。将该载体转入酵母Y187菌株感受态中,在缺失培养基上检测自转录激活,发现HbCoi1基因的启动子在3-AT浓度为10 mmol·L-1时自转录激活得到有效抑制。在此基础上,通过与橡胶cDNA文库进行酵母单杂筛选,得到了几个可能与Hbcoi1启动子发生互作的基因,其中包括DNA结合蛋白、核糖体蛋白和功能未知基因,旨在为深入研究Hbcoi1基因表达调控打下基础。

橡胶HbJAZ1基因的原核表达与纯化分析

为了鉴定巴西橡胶树中存在与JAZ蛋白特异性结合的蛋白,利用pGEX-6p-1载体构建橡胶JAZ(HbJAZ1)与GST(Glutathione S-transferase)融合表达载体,并成功转化大肠杆菌进行原核表达,同时利用谷胱甘肽-琼脂糖填料成功纯化gcHbJAZ1-GST融合表达蛋白。在纯化实验中,发现HbJAZ1融合表达蛋白在大肠杆菌原核表达中是难溶蛋白,大多存在于裂解菌液的沉淀物中。

一种快捷有效的构建cDNA文库的方法

构建cDNA文库是研究基因组功能基因一种有效的手段，传统的建库方法通常需要在双链cDNA两端分别加上带限制性酶切位点的接头序列，通过酶切使之产生与质粒匹配的粘性末端，然后与质粒连接构成文库。本文介绍一种简单而且不需要核酸内切酶的构建cDNA文库的方法。该方法的主要步骤包括：（1）通过反转录合成cDNA第一条链，通过置换底物的方式在cDNA3’末端合成接头序列。（2）利用cDNA两端的接头引物，通过TaqDNA合成酶PER扩增合成cDNA第二条链。（3）将PCR产生的双链cDNA直接与T-载体连接。（4）将连接物转化大肠杆菌，得到cDNA文库。利用本方法，我们成功构建红树植物红海榄的cDNA文库。PCR结果显示插入的片段分布在O．5～3．0kb之间，大部分cDNA的长度在500—1000bp之间，表明cDNA具有较好的完整性。本方法具有操作简单、高效率、低成本、RNA模板需要量少的特点，而且适用于任何高等生物RNA样品。

红海榄脱水素基因(RsDHN1)的克隆及表达分析

采用RT-PCR和RACE技术对已获得的红海榄根部其中一个差异表达基因进行克隆,通过Blast分析和序列比对可知,该基因全长cDNA序列包括146bp的5'端非编码区,43bp的3'端非编码区和一个编码241个氨基酸的开放阅读框,命名为RsDHN1基因。该cDNA编码的蛋白具有植物脱水素蛋白的特征性结构,属于SKn类脱水素蛋白,与其它植物的SKn类脱水素蛋白具有43%～55%的氨基酸序列同源性。半定量RT-PCR分析表明,盐胁迫对RsDHN1基因的表达有明显上调作用。

巴西橡胶树HbICE1基因酵母双杂交诱饵载体的构建及互作蛋白的筛选

寒害是我国植胶区的主要自然灾害之一,不仅影响橡胶产量还威胁到橡胶树的生存。拟南芥中,ICE1是低温胁迫信号通路中的重要转录激活因子,但橡胶树冷胁迫信号途径中包括Hb ICE1在内的大部分关键基因尚未被克隆与鉴定,与Hb ICE1蛋白发生互作的蛋白也不清楚,成为严重阻碍橡胶树抗寒分子机理研究的瓶颈。为了筛选和鉴定与巴西橡胶树Hb ICE1蛋白发生互作的蛋白,阐明橡胶树抵御寒害胁迫的分子机理,本文首先通过PCR扩增出Hb ICE1基因的编码序列(约1400 bp),然后将目标序列插入p GBKT-7载体,构建酵母双杂交诱饵载体;将该载体转入酵母Y2H菌株感受态细胞中,并在缺陷型培养基上检测其自激活活性,发现Hb ICE1基因的自转录激活在含有30 mmol/L和更高浓度3-AT(3-氨基-1,2,4-三氮唑)的培养基上能得到有效抑制;进一步通过与橡胶树c DNA文库进行酵母双杂交,筛选出一些可能与Hb ICE1发生互作的蛋白,包括DNA结合蛋白、核糖体蛋白和功能未知蛋白。本研究结果为橡胶树抗寒机理研究提供了重要理论依据。

转基因大豆插入位点分析及特异性PCR检测方法的建立

采用TAIL-PCR方法研究转基因大豆外源基因LEC1插入位点序列特征,并根据此特征建立了LEC1转化事件特异性检测方法。依据正义表达载体上T-DNA区段侧翼序列设计特异性引物和简并引物,获得4个同源序列。对获得的序列进行Blastn分析发现,p69、p148、p225均为载体T-DNA区段一部分,未见大豆基因组序列;P217插入片段的序列分析表明,该序列长863 bp,其中T-DNA左边界序列长143 bp,720 bp为大豆基因组片段,与大豆光系统II类囊体膜蛋白(Thylakoid membrane proteins)的206-926区段同源性为99%,这表明,外源DNA插入了大豆基因组中类囊体膜蛋白编码区的206位。根据分离的序列建立事件特异性定性检测方法,扩增片段大小为277 bp。该事件特异性检测方法具有高度的特异性和良好的灵敏性,为转基因大豆品种LEC1的身份识别提供了有效的方法。

结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达及纯化研究

目的构建表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达系统,建立表达及纯化方法,为其应用打下基础。方法根据ESAT-6的基因序列设计引物,从结核菌基因组DNA中扩增基因,酶切后插入表达载体,测序证实后转入大肠杆菌JM109菌株,经IPTG诱导表达,产物经谷胱甘肽-琼脂糖凝胶法纯化。结果ESAT基因产物大小、酶切片断大小和载体的大小与设计一致、ESAT-6基因测序的结果与目的基因完全符合。表达纯化的蛋白的大小与蛋白质分子量标准比较一致。结论构建结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达载体成功,纯化出目的蛋白。

利用GATEWAY^(TM)技术快速构建番木瓜环斑病毒HC-pro基因的RNAi表达载体

通过RT-PCR扩增番木瓜环斑PRSV病毒HC-pro基因,序列比对结果表明,克隆到的该基因片段与已知的海南或华南地区已克隆的HC-pro基因只有约92%的同源性,说明PRSV病毒具有较大的变异性。为了培育番木瓜转基因抗病植株,利用pWATERGATE载体和GATEWAYTM技术,成功构建了番木瓜环斑病毒HC-pro基因的RNAi表达载体。具体步骤如下:①设计带特异性重组序列attB的HC-pro基因PCR的引物;②利用该引物进行RT-PCR扩增HC-pro基因;③通过BP反应,将扩增得到的HC-pro基因序列插入入门载体pDONR201中;④通过LR反应将HC-pro基因序列从pDONR201重组到目标载体pWATERGATE中,得到PRSVHC-pro基因的RNAi表达载体。

巴西橡胶树树皮环氧树脂组织切片及染色技术

介绍以环氧树脂为包埋介质,不需要碘溴染色、用于光学显微镜的巴西橡胶树半薄切片技术,详述固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片、染色及封片各程序。利用3种不同的染料能充分区分橡胶乳管细胞、木质部、形成层、导管、次生韧皮射线、初生韧皮纤维、皮层和表皮等,还能观察到许多在石蜡切片上不容易区分的细胞及其内部结构,如树皮表皮细胞下富含的丹宁细胞和叶绿体等。该技术是对巴西橡胶树石蜡包埋切片技术的改进和扩展。

拟南芥AtGRP7基因诱饵载体的构建及酵母双杂的初筛

AtGRP7基因是拟南芥的一个从动振荡器基因,目前其生理功能知之甚少。为了更好地研究与AtGRP7基因的互作蛋白,笔者利用PCR技术从携带AtGRP7基因序列的质粒中扩增该基因的编码序列,然后将目标序列插入pGBKT7载体的NcoⅠ和PstⅠ2个酶切位点之间,构成酵母双杂体系的诱饵载体。酶切和测序结果表明,构建的载体目标基因序列和阅读框是正确的。之后,将该载体转入感受态酵母Y2HGold菌株中,并检测其表达物对报告基因的激活情况。AtGRP7酵母转化菌在SD/-Trp平板上长势良好;在SD/-Trp/-Ade平板上长势较弱;在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade/-His平板上则没有生长。这说明His合成相关基因没有被转录和翻译,AtGRP7基因在该酵母双杂体系中没有自转录激活。笔者在酵母双杂的初步筛选中,还获得几个可能与AtGRP7互作的基因。

抗PRSV转基因番木瓜研究进展

番木瓜花叶环斑病毒(PRSV)严重影响着热带亚热带的重要水果番木瓜的生产,在物理和化学防治措施效果不佳的情况下,利用病原获得抗性防治PRSV的方法给番木瓜的生产带来一线生机。综述了近年来转基因番木瓜中所采用的PRSV病毒的几个基因及其优缺点。