去除高丰度蛋白质后水牛卵泡液的双向电泳差异分析

以广西沼泽型水牛卵泡液为研究对象,用试剂盒免疫去除成熟及未成熟水牛卵泡液高丰度蛋白质后,采用已建立并优化的双向电泳体系对卵泡液蛋白质样品进行分离。软件分析发现,21个差异表达蛋白质与成熟卵泡液相比,10个蛋白质点表达上调,7个蛋白质点表达下调,3个蛋白质点缺失,1个蛋白质点在水牛未成熟卵泡液中特异性表达。经质谱分析,最终鉴定出3个蛋白质点:硫酸化糖蛋白、转铁蛋白和触珠蛋白。该研究成功分离并鉴定的水牛卵泡液差异蛋白质,为揭示水牛卵母细胞发育的微环境及其成熟机制提供试验依据。其中转铁蛋白对于水牛卵泡液的发育成熟具有十分重要的促进作用,而其它2个蛋白质对水牛卵泡液的成熟相关机制还尚未清楚,有待于进一步的试验研究。

水牛卵泡液差异蛋白质双向电泳方法的建立及质谱分析

旨在研究沼泽型水牛成熟前后卵泡内差异表达蛋白质的变化规律。采用双向凝胶电泳技术分离成熟卵泡液和未成熟卵泡液总蛋白质,建立和优化了卵泡液的双向电泳体系,并使用质谱鉴定差异表达蛋白点。结果显示,丙酮沉淀法处理得到的总蛋白质样品后,在24cm(pH 4～7)胶条且上样量350μg时得到分辨率较好的双向电泳图谱。软件分析得到11个差异蛋白点,以成熟卵泡液作为对照,5个蛋白点表达上调,3个蛋白点表达下调,1个蛋白点缺失,2个蛋白点在未成熟卵泡液中特异性表达。质谱成功鉴定出4个蛋白质:过氧化物酶-2、醛糖还原酶、牛纤维蛋白原的晶体结构、转甲状腺素蛋白。该研究建立了良好的卵泡液双向电泳体系,分析并鉴定一批水牛卵泡液差异蛋白质,对于研究水牛卵母细胞的发育微环境和成熟机制提供了新的研究线索。

利用TMT标记结合2D LC-MS/MS技术分析不同时期水牛睾丸曲精细管差异蛋白质组

旨在采用TMT标记结合二维高效液相色谱/串联质谱联用的技术对不同时期水牛睾丸曲精细管的差异蛋白质组进行分析。分别提取不同时期(幼年期、老年期)水牛睾丸曲精细管总蛋白,TMT试剂标记后进行强阳离子交换柱分离多肽、nano LC分离,同时在线连接电喷雾串联(rbitrap质谱进行分析,通过SEQUEST软件搜库并对鉴定的差异蛋白数据进行生物信息学分析。结果表明:共筛选出定量差异倍数≥2倍的差异蛋白89个,以幼年期水牛睾丸曲精细管作为对照,上调蛋白质51个,下调蛋白质38个。生物信息学分析表明,TMT标记技术结合二维液相色谱串联质谱可以对不同发育时期水牛睾丸曲精细管蛋白进行有效地分离和鉴定。本研究结果为探索精子发生过程中蛋白质表达的变化规律提供了试验依据,找出可能与精子发生相关的标志性蛋白:谷胱甘肽S转移酶P(GSTP1)、过氧化氢酶(CAT)、热休克蛋白(HSP90AA1和HSPA)。

叉尾斗鱼遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD标记技术对叉尾斗鱼Macropodus opercularis 5个地理群体(南宁群体、桂林群体、龙岩群体、福州群体和广州群体)的遗传多样性进行了检测。结果表明:从40个随机引物中筛选出11个有效引物,对每条叉尾斗鱼的基因组DNA进行扩增,共扩增出139条片段;各群体的多态位点比例为26.44%～40.95%,Nei基因多样性指数为0.1042～0.1457,Shannon指数为0.1543～0.2176;而总体的多态位点比例、Nei基因多样性指数和Shannon指数分别高达84.89%、0.3110和0.4606。研究表明,叉尾斗鱼的遗传变异主要来自群体间,而群体内部的遗传多样性水平较低。

高畸形率水牛精子与正常水牛精子差异表达蛋白的分离和鉴定

旨在分析高畸形率和正常水牛精子的差异表达蛋白。运用双向凝胶电泳以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析鉴定出高畸形率和正常的水牛精子的差异表达蛋白,并对部分蛋白进行生物信息学分析。结果显示,高畸形率和正常水牛精子之间存在16个表达差异明显的蛋白点,与正常水牛精子相比,5个蛋白斑点表达量上调,6个蛋白斑点下调,3个蛋白斑点缺失,2个蛋白斑点在畸形率高的水牛精子特有。质谱鉴定16个差异蛋白,成功鉴定出6个差异蛋白斑点,对应4种蛋白:左旋天冬酰胺酶、热应激蛋白β-9、半乳糖激酶、β-微管蛋白-2C。研究表明,高畸形率和正常水牛精子蛋白质表达存在一定的差异。

HGF/c-Met信号通路与小鼠早期卵泡发育的相关性研究

目的通过检测肝细胞生长因子(HGF)及其受体(c-Met)在早期小鼠卵巢组织的表达情况,探讨HGF/c-Met信号通路在小鼠早期卵泡发育的相关性,并通过生物信息学分析HGF/c-Met通路的生物学过程及涉及的细胞内信号通路,为后续研究HGF/c-Met通路调节早期卵泡发育的分子机制打下基础。方法选用昆明小鼠以雌∶雄(2∶1)合笼,收集生后3、7、14、21 d卵巢,采用免疫组学、蛋白免疫印迹分别检测卵巢HGF和c-Met蛋白表达及表达水平;实时荧光定量PCR检测卵巢HGF、c-Met的mRNA表达水平。结果HGF及c-Met蛋白在3、7、14、21 d卵巢中均有表达,且表达量随着小鼠日龄增长而增加(P<0.05),HGF、c-Met的m RNA水平也呈现相同的趋势(P<0.05);生物信息学分析发现HGF/c-Met通路涉及了多种生物学过程及PI3K/AKT等信号通路。结论HGF/c-Met通路参与小鼠早期卵泡发育,并可能通过细胞内信号通路PI3K/AKT调控原始卵泡启动及卵泡发育的过程。

基于“对分课堂”的医学遗传学教学探索与实践

"对分课堂"以认知心理为基础,将讲授法和讨论法有机结合,是一种新型的教学模式。文章探讨了在医学遗传学教学中采用"对分课堂"进行教学,讲授、内化吸收及讨论阶段的实施方法及效果。经实践发现,"对分课堂"有助于提高教师授课的质量,提高学生学习的主动性,为课堂教学提供新思路。

基于雨课堂的医学细胞生物学教学设计与应用

雨课堂是一种融合互联网和大数据技术的全新教学工具,基于疫情防控和教育现代化的大背景,医学细胞生物学课程采用雨课堂教学有利于提升教学成效。文章以广西中医药大学基础医学院2019级临床医学专业学生春季学期开展的医学细胞生物学雨课堂教学实践为例,设计基于雨课堂的课前-课中-课后混合式教学活动,充分调动学生主动学习细胞生物学的积极性和热情,并以期末成绩作为教学效果评估指标。最后初步探讨运用雨课堂的优势和局限性,期望能为临床医学专业细胞生物学课程教学提供有价值的参考和建议。

中医药高等院校新任教师岗前培训问题的初步探讨

近年来,随着我国经济社会的快速发展,高等教育正面临着前所未有的压力、机遇和挑战,为满足国家对高等教育教学科研的需求,各高等院校纷纷引进大批具有高学历的青年教师,并对新上岗的教师开展针对性的岗前教育及培训。然而,目前很多高校对新任教师岗前培训的重视力度不够,为此针对中医药高等院校新任教师岗前培训存在的诸多问题进行初步探讨,并提出一些可行的改进措施,以使岗前培训达到良好的效果。

水牛附睾不同部位精子超微结构及荧光标记差异分析

哺乳动物精子经过附睾成熟后才能获得运动及受精的能力,为解释水牛精子在附睾中的成熟过程,本研究选用性成熟期的沼泽型水牛附睾,利用乙烯吡咯烷酮包裹的硅胶微小颗粒(Percoll)梯度离心纯化分别提取附睾头、体和尾部精子,应用计算机辅助精子分析系统(CASA)检测精子活力,透射电镜观察附睾不同部位精子的超微结构,对精子进行荧光标记后,利用流式细胞仪和荧光显微镜观察检测不同部位精子质膜完整率、线粒体鞘膜电位和顶体差异。结果表明,Percoll分离得到附睾头、体和尾3部位精子的纯度达95%,不同部位精子活力分别为8.35%、20.21%和65.60%;附睾不同部位精子都存在着结构完整的精子以及相同的畸形类型,附睾尾部精子线粒体鞘高膜电位比率最高,精子质膜完整率从附睾头部到尾部逐渐升高,精子顶体完整率从附睾头部到尾部逐渐升高。本研究直观地展示了水牛附睾不同部位精子特征以及差异,为研究水牛精子成熟机理提供理论依据。

HGF/c-Met信号通路调控生殖细胞发生的研究进展

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)为间质来源多效性生长因子,与肝细胞生长因子受体(HGF?receptor,也称c?Met)相结合,形成具有广泛生物学功能的HGF/c?Met信号通路,可促进细胞有丝分裂、生长、成熟、运动、组织形成过程以及诱导血管生成。以往研究表明HGF广泛表达于哺乳动物的睾丸和卵巢组织中,HGF/c?Met信号通路可参与调控卵泡发生和精子发生。本综述主要对近年HGF/c?Met信号通路对卵泡发生、精子发生的调控作用的研究进展进行概括。

蛋白质组学在哺乳动物睾丸和精子发生中的应用

"蛋白质组学"一词由Wilkins在1994年提出,被称作后基因组时代一个新兴的研究手段。它从整体水平上对组织或者细胞的蛋白质表达、功能、相互作用进行研究,现在成为生命科学未来发展的主要分支之一。睾丸是哺乳动物雄性生殖系统中的一个重要的器官,由曲精小管和间质细胞组成。蛋白质组学在睾丸和精子发生研究上的应用及其技术手段的不断创新,对睾丸功能、生殖机理、生殖疾病的研究起到了极其重要的作用。所以,从蛋白质水平对睾丸和精子发生进行研究,为更好地理解雄性哺乳动物的生殖机理和疾病提供了一个新思路。

医学基础总论整合课程在教改班教学的探索与实践

医学基础总论整合课程是将无法整合到“器官系统”的基础医学内容通过新的组合方式进行整理与合并,形成内容冗余度少、结构性好和整体协调的一门课程,涵盖细胞生物学、生物化学、解剖学、遗传学、组织胚胎学、生理学、病理学、病理生理学、免疫学、微生物学、寄生虫学及药理学等12门课程的内容,实现基础医学之间总论部分的整合以及与临床医学学科初步整合。本教学团队在本校2018级教改班中进行教学实践探索,现对实践效果进行了总结分析,旨在为中医药院校临床课程体系建设和课程改革提供参考。

整合医学模式下的组织胚胎学理论教学方法探讨

组织学是一门重要的基础医学学科,与其它医学基础学科以及临床学科有着密切的联系,在整个医学体系的学习中起到承上启下的作用,是医学生接触到的最早的医学基础学科之一,由于远离临床课程,导致学生学习兴趣不高,学习效果不好。因此在组织学理论教学中,引入相关课程以及临床课程的知识点,在整合医学模式下重新构建组织学的知识体系,注重早期培养学生的临床思维能力,加强基础与临床课程的相互联系,是提高组织学理论教学水平的手段之一。

雷公藤甲素致生殖细胞凋亡的研究进展

雷公藤甲素(triptolide,TP)又被称为雷公藤内酯醇,它是从雷公藤(tripterygium wilfordii Hook.f.)中提取鉴定出来的环氧二萜内酯化合物。雷公藤在中医药的运用具有悠久历史,TP在雷公藤内含量较高,具有调节免疫系统、抗炎、抗肿瘤等功能,对多种癌症如乳腺癌、胰腺癌及肺癌等均有良好的抑癌作用[1]。

基于网络药理学和分子对接探讨班氏促卵助孕汤治疗卵巢储备功能低下的研究

目的:基于网络药理学和分子对接探讨班氏促卵助孕汤对卵巢储备功能低下的影响。方法:通过中药系统药理学(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)、中药分子机制分析中药综合数据库(traditional Chinese medicine integrative database for herb molecular mechanism analysis,TCMID)、借助中药分子机理的生物信息学分析工具(bioinformatics analysis tool for molecular mechanism of traditional chinese medicine,BATMAN-TCM)检索班氏促卵助孕汤的活性成分以及作用靶点;通过GeneCards、OMIM数据库获取卵巢储备功能低下的相关靶标。由Cytoscape软件和STRING数据库建立药物-化合物-靶标网络、靶标蛋白互作PPI网络。R语言的cluster Profiler工具包对于核心靶点展开基因本体(gene ontology,GO)功能富集以及基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。最后,对药物活性成分与疾病靶点进行分子对接验证。结果:根据筛选条件得到245个化合物和250个药物相应靶点。PPI核心网络包含80个蛋白,关键蛋白涉及INS、IL6、APP、VEGFA、EGFR、MAPK8等。GO功能富集分析取得1296个条目(P<0.05),其中生物过程(biological process,BP)1094个,细胞组成(cell composition,CC)88个,分子功能(molecular function,MF)114个;KEGG通路富集有63条通路与卵巢储备功能低下相关(P<0.05),涉及cAMP信号通路、HIF-1信号通路、雌激素信号通路、催乳激素信号通路等。分子对接结果表明,班氏排卵促孕汤的主要活性成分槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇与核心靶点INS、IL6、APP具有较好的结合活性。结论:班氏促卵助孕汤中的活性化合物可通过多靶点、多通路治疗卵巢储备功能低下。

CRISPR/Cas系统的概述及其在干扰基因表达研究中的应用及存在的问题

CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas系统是源于原核生物的一种获得性免疫防御系统,与Cas蛋白协同作用保护细菌等免受病毒或者质粒的二次感染,广泛存在于细菌和古细菌中。科学家们通过改造CRISPR/Cas系统,使其成为一种新型的基因编辑工具。最近,科学家们又通过突变Cas9这个核酸酶的切割活性区域,使其成仍可结合到特定的核酸序列上,但却失去核酸切割活性的d Cas9(dead Cas9)蛋白,利用这个空间位阻效应达到抑制基因表达的效果,实现基因的沉默。这就是利用CRISPR系统干扰基因表达基本原理。本文主要综述CRISPR/Cas系统的结构、种类、作用机制及其在干扰基因表达中的应用和存在的问题。

精卵融合过程中关键蛋白的研究进展

受精作用是有性生殖过程中的终极事件,精子与卵子间的融合过程是其中最关键的步骤。单倍体的精子和卵子相互识别和融合形成一个双倍有机体。尽管其潜在的分子机制还不是很清楚,但是最近的基因敲除试验已经证实精卵融合过程中需要3个必不可少的因子:位于卵母细胞上的CD9蛋白,精子上的Izumo1蛋白及其在卵母细胞上的受体蛋白Juno。缺乏其中的任何一种蛋白分子将会导致精卵融合机制紊乱。综述重点介绍了这3种精卵融合关键蛋白的最新研究进展。

水牛精子蛋白质图谱的构建及生物信息学

以水牛为研究对象,应用SDS-PAGE电泳分离和LTQ-Orbitrap高分辨率组合式质谱构建水牛精子蛋白质图谱,鉴定出了1 074个精子蛋白质。用生物信息学手段对水牛精子蛋白质进行GO分类,其中参与细胞代谢的蛋白质所占比例最大,说明了成熟精子进行着旺盛的代谢活动,为其受精等活动提供能量准备。生物信息学分析结果显示,参与翻译后修饰的蛋白质有36%,说明成熟的精子在RNA转录和翻译水平上基本处于沉默状态时,主要靠蛋白质的翻译后修饰来实现细胞的功能。本试验为水牛精子细胞增殖发育研究、提高水牛精子活力以及受精机理研究提供了新的手段和信息。

水牛睾丸曲精细管蛋白质组双向电泳方法的建立及优化

建立并优化了沼泽型水牛睾丸曲精细管蛋白质分离的双向电泳体系,为后续水牛睾丸曲精细管蛋白质表达谱的鉴定和研究奠定基础。比较不同IPG胶条(线性与非线性)、胶条pH范围和蛋白质上样量这三个参数对双向电泳结果的影响。结果显示,采用上样量350μg的曲精细管总蛋白、24 cm且pH值4～7的线性IPG胶条能够更好地分离水牛睾丸曲精细管蛋白质,获得质量较好且分辨率较高的双向电泳图谱,得到大约486个蛋白点。双向凝胶电泳技术能够对水牛睾丸曲精细管蛋白质进行有效分离,并通过对双向电泳体系的优化可获得蛋白质点清晰且分辨率更高的双向电泳图谱。