溴氰菊酯对茶树叶片生理性状的影响

以茶树品种东湖早为材料，研究了喷施溴氰菊酯对茶树叶片生理性状的影响．结果表明：茶树喷施溴氰菊酯对叶片ＳＯＤ，ＣＡＴ酶活性有抑制作用，对ＰＯＸ有激活作用，叶片内叶绿素和可溶性蛋白质含量减少．药液浓度及喷药后时间长短均影响上述各生理指标变化幅度，成熟叶的变化速率低于嫩叶，喷药后１４４ｈ仍可检测出药效．

茶树六种无机元素含量年周期动态研究

研究了3个无性系茶树品种的成熟叶片、嫩梢(正常芽和对夹叶)及不同器官(嫩梗、嫩叶)内6种元素(钙、镁、铁、锰、锌、铜)的含量及年周期的变化。结果表明,成熟叶片含钙量变化趋势是,3个品种的春叶及东湖早的夏叶均与叶龄呈负相关。政和大白茶、毛蟹的夏叶和3个品种的秋叶含量则与叶龄呈正相关。各品种叶片含镁量与叶龄呈2次曲线相关,而铁、锰、锌、铜元素的含量均与叶龄呈正相关。正常芽叶钙.镁.铁、锌,铜含量高于对夹叶,而含锰量则相反,对夹叶高于正常芽叶。嫩梗钙、镁含量高于嫩叶,而铁、锰、锌、铜的含量则有随季节不同交替变化的趋势。

茶树茎阶段发育异质性的解剖学

本文以鳛水大树茶和福鼎大白茶为材料,对茶树茎的阶段发育异质性问题,从植物解剖学角度进行了较系统的研究,并对共外部形态特征、特性进行了观察测定。结果表明,茶树茎的异质性现象是普遍存在的,两个品种不同部位的芽和茎的解剖结构是有差异的,低位枝上的顶端分生组织、伸长区及茎成熟区组织的分化程度均较高位枝的发达,为典型的“幼年型”。但不同部位间的差异显著水平有别。本文还对茎的阶段发育及生产中的有关问题进行了讨论。

茶树叶片水分与抗性的关系

通过对5个无性系茶树品种的春叶、夏叶、秋叶的含水量,水分形态及其变化的测定,以及对茶树的旱害、冻害的调查,探明了同一条件下不同品种、不同季节萌发的叶片总含水量、自由水含量和束缚水含量的差异、变化规律,及其与茶树抗旱性、抗寒性的关系。

茶树持续高效栽培综合配套技术研究

采用高施肥量、喷叶面液、不深耕、秋末轻修剪、全年采摘上中档茶的综合配套技术是茶树增加产量、净产值和利润以及提高茶叶品质的最佳组合方案。

茶树不同抗寒性品种间保护酶类活性的差异

为探讨正常栽培条件下茶树抗寒性与保护酶类活性的关系 ,以抗寒性不同的茶树品种槠叶齐、高桥早、凤凰水仙、乐昌白毛茶、云南大叶种、海南大叶种为材料 ,对其成熟叶片的超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶 (POD)等酶活性及可溶性蛋白质、丙二醛含量进行了测定 ,结果表明 ,抗寒性强的品种其 SOD,CAT活性和可溶性蛋白质含量较高 ,抗寒性弱的品种其 SOD,CAT活性及可溶性蛋白质含量较低 ,POD活性和丙二醛含量与茶树抗寒性强弱之间无明显规律可循 .SOD,CAT活性。

茶树种质资源遗传多样性的RAPD分析

用随机扩增多态DNA(RAPD)标记对取自全国产茶省的 31份种质资源、福建地区的 10份种质资源以及湖南安化云台山种有性后代居群的 30个单株的遗传多样性进行了检测。不同生态条件下的 31份不同种质资源中 ,2 1个RAPD引物扩增出 188条谱带 ,多态性比率为 90 4 3% ;福建 10份种质资源 ,2 1个RAPD引物共扩增出 15 4条谱带 ,多态性比率为 81.81% ;安化云台山种有性后代居群的 30个单株 ,2 1个RAPD引物共扩增出 15 0条谱带 ,多态性比率为 79.33%。不同生态条件下的 31份种质资源间的遗传距离为 0 2 192～ 0 70 77,福建 10份种质资源间的遗传距离为 0 14 14～ 0 4 187,安化云台山种有性后代居群的 30个单株的遗传距离为 0 12 5 2～ 0 4 6 16。从上述结果可以看出 :我国茶树种质资源的遗传多样性高 ,遗传基础丰富 ;茶树种质资源遗传多样性的变化主要是由于茶树有性杂交和茶树适应不同的生态条件所致。

茶树基因组DNA的高效提取方法

为了从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的茶树叶片中分离出高质量的基因组 DNA,对 4种植物 DNA提取方法进行改良后 ,以茶树春梢为材料 ,对提取效果进行了比较 ,并首次采用 CTAB区室法提取茶树基因组DNA.结果表明 ,用该 4种方法提取的 DNA,其 OD2 6 0 / OD2 80 都在 1.8以上 ,相对分子质量均大于 2 1kb,能完全被Eco R 酶切消化 ,也能获得清晰的 PCR扩增图谱 .因此 ,只要操作合理 ,4种方法均能提取出高质量的 DNA.

安化云台山茶树品种种群内遗传多样性的RAPD分析

利用 RAPD分子标记技术对安化云台山种茶树原产地的 2 7个有性单株以及槠叶齐、湘波绿、湘安 2 8等 3个无性系品种进行了随机扩增多态性 DNA(RAPD)分析 .采用 12 0个 10碱基随机引物 ,共筛选出能产生多态性标记的 RAPD引物 2 1个 ,扩增出 15 0个位点 ,其中多态性位点 119个 ,占 79.33% .单个引物获得的 RAPD片段数在3～ 10个之间 ,平均为 7.14个 .基于遗传距离分析 ,30个样本的遗传距离从 0 .12 5 2 (YTS9和 YTS12 )到 0 .4 6 16(湘波绿与 YTS14 ) .根据 U PGMA聚类分析 ,安化云台山种 2 7个单株包括 2个核心群体和 3个特异单株 (YTS30 ,YTS31,YTS37) ,另一方面从聚类树状图可以看出 :湘安 2 8与单株 YTS31先聚类 ,再与槠叶齐聚类 ,然后与湘波绿聚类 ,最后与 YTS30聚类 .这一方面从 DNA分子水平上验证槠叶齐、湘波绿、湘安 2 8均系从安化云台山种的后代中选育而来 ,同时也揭示一个规律 ,即作为有性群体的个体 ,当其基因组与核心群体的基因组差异大时 。

茶树品种资源遗传多样性的AFLP研究

利用AFLP-银染分子标记技术,对40个茶树品种(系)进行遗传多样性与亲缘关系分析。选用多态性高、分辨力强的引物组合EACG/MAAC、EAGG/MAAG与EAGG/MAGT分别对供试材料的基因组DNA进行扩增,共获得226条清晰可辨的带,其中多态性带207条,多态位点百分率为91.59%,这表明供试品种资源在DNA水平上酶切位点的分布存在广泛的变异。40份资源所检出的位点平均有效等位基因数、平均基因多样度、平均Shannon信息指数,分别为1.59±0.09、0.35±0.04、0.53±0.05。应用SPSS软件计算遗传距离介于0.13～0.48之间,平均为0.32;UPGMA法将40份资源分成4个类群,从相似性系数分析了各品种资源间的亲缘关系。

茶树AFLP分子连锁图谱的构建

采用改进的AFLP技术体系,对祁门4号×潮安大乌叶的F1代群体进行连锁图谱的构建。经22对引物组合的选择性扩增,共获得1925条带,平均每对引物产生87.5条带,获得多态性带485条,多态性带的比率为25.19%。共有356(73.40%)个多态性位点符合孟德尔分离比例(P=0.01),其中发生1:1分离的位点为247(69.38%)个,发生3:1分离的位点为109(30.62%)个。采用Mapmaker/Exp3.0软件进行连锁分析,分别构建了祁门4号与潮安大乌叶的AFLP分子连锁图谱,其中母本图谱包括由208个标记组成的17个连锁群,总图距为2457.7cM,标记间平均间距为11.9cM。父本图谱包括由200个标记组成的16个连锁群,总图距为2545.3cM,标记间平均间距为12.8cM。

茶树品种资源遗传亲缘关系的RAPD分析

利用RAPD技术对中国不同生态型的31个品种资源进行了遗传亲缘关系研究。从Sangon 120个引物中筛选出21个长度为10个碱基的随机引物对31个品种的基因组DNA进行扩增，共产生188条谱带，其中多态性谱带为170条（90.43%），31个品种具有丰富的多态性。品种间的遗传距离为0.219-0.708，并根据遗传距离利用UPGMA构建了品种亲缘关系树图。根据树图，当结合距离T2=0.24时，31个品种可分为三大类：第一大类包括云南、四川、贵州、广西的品种；第二大类包括广东所选用品种及福建的小叶乌龙品种；第三大类包括福建、浙江、安徽、江西、河南及湖南的品种。从DNA分子水平探讨了中国茶树品种的亲缘关系及分类。

RAPD分子标记技术在茶树亲子鉴定中的应用

为给茶树种质资源的鉴定、品种鉴定、亲子鉴定提供科学方法 ,通过对 3个人工杂交组合的亲本及 F1 代进行 RAPD分析 .结果显示 :双亲的 RAPD谱带能在其 F1 代中表现出来 ,表现率分别为 94.90 % ,97.92 % ,98.64 % ,说明 3个杂交单株是其亲本的真正后代 ,这也表明 RAPD技术在亲子鉴定中具有很强的适用性 .同时从 3个杂交组合的 RAPD分析结果可以看出 ,双亲的 RAPD谱带在 F1 代出现分离现象 。

鲜叶保存方法对茶树基因组DNA提取效果的影响

探讨一种简便有效的鲜叶保存方法,对克服茶树DNA研究中远距离采样的困难具有重要意义.为此,以槠叶齐品种的鲜梢为材料,分别采用-20℃、-70℃、硅胶脱水干燥3种方法保存样品,采用改进的CTAB法与SDS法分别对3种方法保存的样品及对照样(鲜叶)进行基因组DNA的提取与纯化,对所得DNA的质量进行多重检测的结果表明,硅胶脱水干燥法保存的样品与其他几种方法保存的样品一样,都提取获得了高质量的DNA,因此,硅胶脱水干燥法可作为远距离采样制备茶树DNA的一种较好的鲜叶保存方法,具有操作简单、经济实用、不受时空等条件限制的特点,该方法同样适用于其他植物.

茶树多酚氧化酶基因的SNP分析

选取有代表性的40个茶树品种(系)为材料,先采用PCR-SSCP-银染检测技术,对供试材料的多酚氧化酶(PPO)基因进行SSCP分析,对PPO基因作初步基因分型;根据分型分析结果,对每一类型选择典型品种的PPO基因作进一步的DNA序列分析,用DNASTAR Program进行单核苷酸多态性(SNP)搜寻.结果表明,茶树PPO基因存在丰富的SNP,其类型包括:转换(AG,CT)、颠换(AT,GC,G→T,A→C)与杂合子(C/T,A/G,G/T,A/T,A/C,G/C).在发现的37个SNPs中,有13个SNPs发生在核酸内切酶酶切位点,有10个错义SNPs位点导致氨基酸的改变.在PPO基因的保守序列区,出现SNP的频率较低.

茶树RAPD分析体系的优化

以福鼎大白茶为材料 ,采用美国的PTC 10 0 Tm热循环仪 ,对茶树RAPD分析中影响PCR扩增结果的主要因素进行了研究 ,确定了茶树RAPD的最适反应体系和扩增程序 ,即在 30 μl反应体系中 ,含 40ng模板 ,2mmol/LMgCl2 ,各 0 .2mmol/LdNTPs、0 .15 μmol/L引物和 1.5UTaqDNA聚合酶 ;扩增程序为 :第 1步预变性94℃ ,180s ;第 2步变性 92℃ ,5 0s;第 3步退火 35℃ ,5 0s ;第 4步链延伸 72℃ ,10 0s ;循环 41次 ,后延伸 72℃ ,30 0s .

重修剪对衰老茶树保护酶影响的研究

以湖南农业大学茶园26年生无性系品种政和大白茶、梅占、毛蟹为研究对象，对其进行重修剪处理，研究重修剪对保护酶系[超氧物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)]的影响，并就重修剪茶树的保护酶活性随叶龄增大的动态变化进行了探讨。结果表明：重修剪对衰老茶树的保护酶活性影响较大，重修剪处理与对照的酶活性差异达到极显著水平(P<0.01)；重修剪后茶树SOD活性提高，CAT活性下降,POD活性变化既与叶龄有关又与品种有关。

茶树AFLP—银染技术体系与品种指纹图谱的建立

通过对影响茶树AFLP—银染技术体系的关键因素作对比研究,建立了一套优化的茶树AFLP分子标记体系.应用该体系研究不同茶树品种的AFLP指纹,结果同一引物对不同品种扩增及不同引物对同一品种扩增都呈现出十分丰富的多态性,图谱清晰,分辨率高.

茶树树冠结构变化的数学模型研究

为对不同树龄茶树的树冠结构进行科学评价 ,并为制定合理的农业技术措施提供科学依据 ,以小乔木型品种福鼎大白茶和灌木型品种槠叶齐为材料 ,对湖南 8个地 (市 )规范化栽培茶园 1～ 18年生两类型品种茶树树冠结构的 15项指标进行系统调查 ,并运用计算机作数据分析 .结果表明 ,两类型品种树冠结构指标随树龄的增大呈现出基本一致的变化规律 ,各项树冠指标均可用一定的数学模型予以表达 .研究结果还表明 ,两茶树品种在 1～ 6年生期间 ,各项树冠指标增幅较大 ,7～ 14年生期间树冠指标的增加或减少的幅度不大 ,树冠结构比较稳定 ;14年生后 ,一些与茶叶品质和产量密切相关的指标 ,如新梢密度、生产枝密度、百芽重、一芽三叶长度和单叶面积下降幅度加大 .同时 ,从两类型品种树冠结构指标的变化来看 ,茶树类型不同 。

茶树多酚氧化酶基因的PCR-RFLP多态性分析

采用PCR-RFLP技术,检测茶树多酚氧化酶(PPO)基因中4个限制性核酸内切酶酶切位点在不同品种中的多态性,以研究其与品种适制性及遗传背景的关系。遗传参数分析表明:4个位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),HpaⅡ酶切位点(引物L7/L8扩增区段)呈现高度多态,BsuRⅠ酶切位点呈现中度多态,这2个酶切位点在不同品种中的基因型分布与品种的遗传背景有直接的关联,可作为遗传标记应用于茶树品种遗传亲源关系分析与亲子鉴定。HpaⅡ酶切位点在引物L7/L8扩增区段存在丰富的多态性,且与品种适制性具有明显关联,适制红茶的品种多为AA基因型,此位点能被HpaⅡ内切酶完全酶切;适制绿茶与乌龙茶的品种多为BB型或AB型,此位点不能被酶切或不能完全被酶切,该HpaⅡ酶切位点可作为茶树品种适制性早期鉴定的遗传标记。对引物L7/L8扩增区域的HpaⅡ酶切位点在祁门4号×潮安大乌叶F1代群体进行分型检测的结果表明,该位点在F1代的分离符合孟德尔遗传规律(x2=0.23)。