小胶质细胞在缺血性脑卒中的作用及针刺对其调控研究进展

缺血性脑卒中是最常见的脑卒中类型,发病率、致残率、死亡率均处在较高水平。小胶质细胞作为脑内常驻免疫细胞,是抵御中枢神经系统病理损伤的首道防线,在病理刺激下诱导为M1、M2不同表型,发挥积极消极双重作用。针刺治疗缺血性脑卒中的作用与调控小胶质细胞密切相关,通过改变小胶质细胞数量和形态结构、下调炎症因子、抗细胞凋亡、促进突触重塑、激活星形胶质细胞等方面多水平发挥综合效应,保护受损脑组织。该文对小胶质细胞在缺血性脑卒中内的双重功能及针刺对其调控作用进行梳理,以期为实现精准靶向小胶质细胞治疗缺血性脑卒中提供新思路。

不同灸法治疗原发性痛经的随机对照试验

目的观察采用智能中医灸疗床进行灸法治疗寒凝血瘀型原发性痛经的临床疗效。方法将60例寒凝血瘀型原发性痛经患者随机分为灸疗床组和局部灸组,每组30例。观察两组治疗前后血清环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)水平、疼痛视觉模拟量表(visual analog scale,VAS)评分、中医证候积分、焦虑自测量表(self anxious scale,SAS)评分及抑郁自测量表(self depression scale,SDS)评分的变化。比较两组临床疗效。结果灸疗床组总有效率为96.7%,局部灸组总有效率为86.7%,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后及3次随访时,两组VAS评分均较治疗前降低(P<0.05);第2次和第3次随访时,灸疗床组VAS评分均低于局部灸组(P<0.05);第3次随访时,局部灸组VAS评分高于同组治疗后。治疗后及3次随访时,两组中医证候积分均低于同组治疗前(P<0.05)。治疗后,两组血清COX-2水平均低于同组治疗前(P<0.05)。治疗后及3次随访时,两组SAS和SDS评分均低于同组治疗前(P<0.05);治疗后及第2次随访时,灸疗床组SAS评分低于局部灸组(P<0.05);第2次和第3次随访时,灸疗床组SDS评分低于局部灸组(P<0.05)。结论采用智能中医灸疗床进行灸法治疗寒凝血瘀型原发性痛经的临床疗效优于局部灸,可缓解疼痛,改善临床症状。

电针调控小胶质细胞极化对脑卒中肢体痉挛大鼠的影响

目的观察电针对脑卒中肢体痉挛(PSS)大鼠的影响及小胶质细胞极化介导的神经炎症与大脑皮层神经递质谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)的关系,研究其缓解PSS的可能机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组10只。采用线栓法联合内囊注射N-甲基-D-天冬氨酸受体制备PSS大鼠模型。电针组选取“曲池”“阳陵泉”电针,30 min/d,连续7 d。模型组与假手术组进行同期固定,不予干预。对大鼠进行Zea Longa神经功能评分、改良Ashworth肌张力评分、电生理检测,试剂盒检测缺血侧皮质GABA、Glu、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)含量,Western blot检测缺血侧皮质γ-氨基丁酸A受体α1(GABRA1)、谷氨酸脱羧酶67(GAD67)蛋白表达,免疫荧光染色检测缺血侧皮质离子化钙结合适配分子1(Iba-1)与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg-1)共表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分、肌张力评分均显著升高(P<0.01),肌张力显著增加(P<0.01);缺血侧皮质GABA、IL-10含量显著减少(P<0.01),TNF-α、Glu含量显著增加(P<0.01),Glu/GABA比值增加(P<0.01),GABRA1、GAD67蛋白表达显著降低(P<0.01),Iba-1与iNOS共表达显著增强(P<0.01),Iba-1与Arg-1共表达显著减弱(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠神经功能评分、肌张力评分均显著降低(P<0.05),肌张力显著减小(P<0.01);缺血侧皮质GABA、IL-10含量显著增加(P<0.01),TNF-α、Glu含量显著减少(P<0.01),Glu/GABA比值减少(P<0.01),GABRA1、GAD67蛋白表达显著升高(P<0.01),Iba-1和iNOS共表达显著减弱(P<0.01),Iba-1与Arg-1共表达显著增强(P<0.05)。结论电针能有效缓解PSS,其作用机制可能与调控小胶质细胞极化、减轻神经炎症有关。

基于IL-6/JAK2/STAT3信号通路探讨电针对脑卒中肢体痉挛大鼠的影响

目的观察电针对脑卒中肢体痉挛(PSS)大鼠中枢炎症反应及神经递质释放的影响,基于IL-6/JAK2/STAT3信号通路探讨其治疗PSS的作用机制。方法30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组10只。采用线栓+内囊注射N-甲基-D-天冬氨酸受体法制备PSS大鼠模型,电针组电针患侧“曲池”“阳陵泉”,30 min/d,连续7 d。假手术组、模型组仅固定不干预。治疗前后进行Zea Longa神经功能评分和改良Ashworth肌张力评分,HE染色观察缺血侧大脑皮质病理变化,ELISA检测缺血侧皮质白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-氨基丁酸(GABA)含量,生化试剂盒检测缺血侧皮质谷氨酸(Glu)含量,Western blot检测缺血侧皮质酪氨酸激酶2(JAK2)、p-JAK2、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3蛋白表达,RT-PCR检测缺血侧皮质JAK2、STAT3 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分、肌张力评分明显升高(P<0.01),大脑皮质神经元紊乱、细胞核固缩,IL-6、TNF-α、Glu含量明显增加,GABA含量明显减少(P<0.01),p-JAK2、p-STAT3蛋白及JAK2、STAT3 mRNA表达均明显升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠神经功能评分、肌张力评分明显降低(P<0.05),大脑皮质神经元损伤程度减轻,细胞轮廓清晰,IL-6、TNF-α、Glu含量明显减少,GABA含量明显增加(P<0.05,P<0.01),p-JAK2、p-STAT3蛋白及JAK2、STAT3 mRNA表达均明显降低(P<0.01)。结论电针可能通过抑制IL-6/JAK2/STAT3信号通路减轻PSS模型大鼠中枢炎症反应,改善肢体痉挛状态。

电针患侧曲池、阳陵泉穴对脑梗死后肢体痉挛大鼠的影响与机制研究

目的 观察电针患侧曲池、阳陵泉穴对脑梗死后肢体痉挛(PSS)大鼠皮质损伤及血清炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、谷氨酸(Glu)、丙二醛(MDA)、核黄素激酶(RFK)和还原性辅酶氧化酶2(NOX2)表达的影响,探讨电针治疗缺血性脑卒中后脑损伤的机制。方法 选择SPF级健康成年SD雄性大鼠30只,采用随机数字表法分为假手术组与造模组,每组10、20只。造模组采用Zea-Longa线栓法联合内囊注射N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)制备PSS大鼠模型。造模成功后,造模组按随机数字表法分为模型组、电针组,每组10只。模型组采用鼠板固定大鼠,但不进行干预;电针组接受电针干预,穴位选择患侧阳陵泉穴(左)、曲池穴(左),每穴直刺1针,电针波型:密波;频率:100 Hz,强度以大鼠肢体轻微抖动为度,30 min/次,1次/d,连续治疗7 d。分别于造模第1天和治疗第7天采用Zea-Longa神经功能评分评估大鼠神经功能受损程度;分别于造模第2天和治疗第7天采用改良Ashworth量表(MAS)评分评估大鼠患侧肢体肌张力;采用HE染色观察大脑皮质的病理学改变;行为学测试完毕后,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测MDA、Glu含量和大脑皮质中IL-6、TNF-α含量;采用Western blot法分析RFK、NOX2蛋白表达水平;采用RT-PCR法分析RFK、NOX2 mRNA转录水平。结果 (1) Zea-Longa神经功能、MAS评分:与治疗前比较,电针组治疗后Zea-Longa神经功能、MAS评分均明显降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组、电针组治疗前Zea-Longa神经功能、MAS评分均明显升高(P<0.05);与模型组比较,电针组治疗后Zea-longa神经功能、MAS评分均明显降低(P<0.05)。(2)脑组织病理学改变:模型组可见脑组织水肿,胞核深染,形态不规则、固缩、空泡变性,炎性细胞浸润等病理学改变;与模型组比较,电针组脑组织病变改善,神经元损伤程度减轻,可见较多正常细胞,细胞轮廓清晰,炎性细胞数量减少。(3)缺血侧皮质TNF-α、IL-6、Glu、MDA含量:与假手术组比较,模型组、电针组TNF-α、IL-6、Glu、MDA含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,电针组TNF-α、IL-6、Glu、MDA含量明显降低(P<0.05)。(4) RFK、NOX2蛋白表达水平和RFK、NOX2 mRNA转录水平:与假手术组比较,模型组RFK、NOX2蛋白表达水平和RFK、NOX2 mRNA转录水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,电针组干预后RFK、NOX2蛋白表达水平和RFK、NOX2mRNA转录水平明显降低(P<0.05)。结论 电针可以改善PSS大鼠神经功能损伤和肢体痉挛状态,其作用机制可能与下调皮质Glu含量,减少炎症因子TNF-α、IL-6分泌,抑制RFK、NOX2表达,降低氧化应激水平有关。

电针“阳陵泉”“曲池”对脑卒中肢体痉挛大鼠大脑皮质γ-氨基丁酸能系统的影响

目的观察电针“阳陵泉”“曲池”对脑卒中肢体痉挛(PSS)大鼠大脑皮质γ-氨基丁酸(GABA)能系统相关因子的影响,探讨其治疗PSS的可能机制。方法采用右侧大脑中动脉线栓+内囊注射N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体法制备PSS模型。将大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组10只。电针组选取患侧“阳陵泉”“曲池”电针干预,30 min/次,1次/d,连续7 d。假手术组和模型组仅抓取固定、不进行干预。对大鼠进行神经功能缺损评分和肌张力评分,电生理描记法测定大鼠肌张力,Western blot和RT-qPCR检测缺血侧大脑皮质GABA能系统合成因子谷氨酸脱羧酶65(GAD65)、重摄因子GABA转运蛋白-3(GAT-3)、传导因子钠-钾-氯协同转运蛋白1(NKCC1)蛋白及mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、肌张力评分明显升高(P<0.01),肌张力明显增加(P<0.01),缺血侧大脑皮质GAD65、GAT-3蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.01),NKCC1蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠神经功能缺损评分、肌张力评分明显降低(P<0.05),肌张力明显减小(P<0.01),缺血侧大脑皮质GAD65、GAT-3蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.01,P<0.05),NKCC1蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论电针“阳陵泉”“曲池”能改善PSS大鼠神经功能缺损症状,降低肌张力,缓解卒中后肢体痉挛。其机制可能是通过促进模型大鼠大脑皮质GABA合成酶GAD65、转运体GAT-3表达,抑制转运蛋白NKCC1表达,从而维持GABA能系统稳态。

电针调控小胶质细胞极化抑制脑卒中肢体痉挛大鼠脑皮质炎症反应的研究

目的观察电针阳陵泉、曲池对脑卒中肢体痉挛(post-stroke spasticity,PSS)大鼠脑皮质中小胶质细胞极化及炎症因子的影响,探讨电针缓解PSS的可能机制。方法采用改良大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)线栓法+内囊注射N-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体法制备PSS模型。随机抽取10只大鼠作为假手术组,剩余大鼠造模成功后选20只再随机分为模型组和电针组,每组10只。电针组干预患侧阳陵泉、曲池,每天治疗1次,每次30 min,连续治疗7 d;假手术组和模型组仅进行同条件固定,不作其他干预。通过神经功能缺损评分、电生理描记法评估电针对PSS大鼠的治疗效果;免疫荧光染色法观察大鼠缺血侧脑皮质小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子-1(ionized calcium binding adapter molecule-1,Iba-1)、M1型标志物白细胞分化抗原16(cluster of differentiation 16,CD16)、M2型标志物白细胞分化抗原206(cluster of differentiation 206,CD206)的阳性表达;ELISA法和qPCR法检测大鼠缺血侧脑皮质中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的含量和mRNA表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高(P<0.01),间接肌张力明显下降(P<0.01),Iba-1和CD16阳性荧光强度表达显著增加(P<0.01),CD206阳性荧光强度表达显著下降(P<0.01),IL-6、IL-1β含量及mRNA表达明显上升(P<0.01),TGF-β含量和mRNA表达明显下降(P<0.01)。治疗后与模型组比较,电针组大鼠神经功能缺损评分降低(P<0.05),间接肌张力明显上升(P<0.01),Iba-1阳性荧光强度表达减少(P<0.05),CD16阳性荧光强度表达明显下降(P<0.01),CD206阳性荧光强度表达显著上升(P<0.01),IL-6含量及mRNA的表达下降(P<0.05),IL-1β含量及mRNA表达明显下降(P<0.01),TGF-β含量和mRNA表达明显上升(P<0.01)。结论电针阳陵泉、曲池能够有效改善PSS大鼠神经功能损伤、降低肌张力、缓解痉挛症状,其机制可能与抑制小胶质细胞激活、调控小胶质细胞由M1向M2极化、缓解神经炎症有关。

电针对脑卒中肢体痉挛大鼠大脑皮质SLC7A11和GPX4表达的影响

目的:观察电针对脑卒中肢体痉挛(PSS)大鼠大脑皮质溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽(GSH)及谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达的影响,探讨电针治疗PSS中铁死亡的机制。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为假手术组,模型组及电针组。采用改良Zea-Longa线栓+内囊注射NMDA法制作PSS大鼠模型。电针组针刺患侧“阳陵泉”、“曲池”穴,1次/d, 30 min/次,连续7 d;假手术组及模型组同期仅固定不干预。采用Zea-Longa神经功能评分检测大鼠神经功能,电生理描记法检测大鼠股四头肌肌张力,Western Blot检测大脑皮质SLC7A11和GPX4蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大脑皮质GSH含量,real time RT-PCR检测大脑皮质SLC7A11和GPX4 mRNA表达。结果:造模后的大鼠神经功能评分升高,股四头肌肌张力增高,大脑皮质中GSH含量降低,SLC7A11和GPX4蛋白表达及SLC7A11和GPX4 mRNA表达显著下调。电针治疗使得大鼠神经功能评分降低,股四头肌肌张力降低,增加了大鼠皮质中GSH含量,显著上调了SLC7A11和GPX4蛋白表达及SLC7A11和GPX4 mRNA表达。结论:电针“阳陵泉”、“曲池”可改善PSS大鼠肢体痉挛状态,促进神经功能恢复,其作用机制可能与电针调控SLC7A11和GPX4表达抑制大脑皮质细胞铁死亡有关。

电针对脑卒中肢体痉挛大鼠皮质神经细胞铁死亡的影响

目的观察电针对脑卒中肢体痉挛(PSS)大鼠皮质神经细胞超微结构、亚铁离子(Fe^(2+))、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)表达的影响,探讨电针治疗脑卒中肢体痉挛中铁死亡的机制。方法采用改良ZeaLonga线栓+内囊注射NMDA法制作脑PSS大鼠模型。将30只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组及电针组。电针组取穴患侧“阳陵泉、曲池”,1次/日,30min/次,连续7d。记录Zea-longa神经功能评分、改良Ashworth肌张力评分,透射电镜观察线粒体变化,普鲁士蓝染色观察皮质铁离子聚集情况,生化试剂盒检测大鼠皮质Fe^(2+)、MDA含量,ELISA检测大鼠皮质GSH含量。结果Zea-longa神经功能评分:与模型组相比,电针组评分降低(P<0.05);改良Ashworth肌张力评分:与模型组相比,电针组评分降低(P<0.05);透射电镜:与模型组相比,电针组皮质神经细胞损伤减轻,线粒体萎缩程度降低,线粒体嵴更为明显。普鲁士蓝染色:与模型组相比,电针组皮质铁聚集明显减少。实验室检测结果:与模型组相比,电针组Fe^(2+)、MDA含量降低(P<0.01),GSH含量升高(P<0.01)。结论电针可改善脑卒中肢体痉挛,其作用机制可能与电针抑制皮质神经细胞铁死亡,发挥脑保护作用,促进神经功能恢复有关。

脑卒中铁死亡发生机制及针刺干预研究进展

脑卒中发病过程中铁死亡的发生机制主要与铁超载、脂质过氧化、兴奋性毒性、抗氧化酶失活及系统受损等有关。缺血性脑卒中和出血性脑卒中发病过程中铁死亡的发生机制还存在某些差异,例如脂氧合酶类表达的亚型不同:缺血性脑卒中12/15-LOX高表达,而出血性脑卒中ALOX5的表达明显增高。且铁过载产生的机制亦有区别。因此在不同情况下,针刺治疗方案的选择需有所不同,常见的针刺治疗方式主要有电针、头皮针、针刺及针药结合等。目前针刺直接调控脑卒中相关铁死亡机制的研究较少,针刺调控脑内铁代谢、抗氧化相关指标的研究较为常见。脑内的铁代谢异常、过氧化都与铁死亡发生息息相关,因此针刺对铁代谢、过氧化的调控机制,对针刺调控铁死亡的机制研究有重要意义。