新型蒽醌衍生物的合成

研究了N (1 1 溴十一烷基酰基 )氨基蒽醌和N (4 溴丁基酰基 )氨基蒽醌两种新型蒽醌衍生物的合成方法 。

腹水型单克隆抗体纯化方法的研究

目的比较不同纯化方法对腹水型抗体的纯化效果,探索出最适合实验室抗体生产的纯化方法。方法制备的IgG1单克隆抗体腹水(4-D10)分别利用两步硫酸铵沉淀法(AS法)、辛酸-硫酸铵沉淀法(CA-AS法)、辛酸-硫酸铵沉淀法联合DEAE阴离子交换层析法与辛酸-硫酸铵沉淀法联合蛋白G亲和层析法纯化处理后,经蛋白纯度、回收率、抗体免疫活性鉴定分析后,比较不同的纯化方法对腹水型抗体的纯化效果。结果①AS法的蛋白纯度为25%,低于CA-AS法(44%);AS法回收率为63%,高于CA-AS法(41.8%);比较抗体效价表明,AS法(1.024×106)与CA-AS法(1.024×106)两者相当。②粗提后纯化效果表明,蛋白G亲和层析法回收率明显降低,DEAE纯品虽纯度略低,但回收率较高,且效价(5.12×105)高于蛋白G亲和层析法(1.28×105)。结论 CA-AS联合DEAE离子交换法是适合实验室生产单抗的低成本、纯化效果和回收效果较佳的方法。

阻断白介素12p40功能的新型治疗性单克隆抗体的开发

目的设计并利用抗体工程方法构建并制备全新序列的阻断白介素12(IL-12)p40功能的单克隆抗体MAB1,并对其生物学活性进行鉴定,以制备可应用于治疗多种自身免疫病的IL-12通路的阻断剂。方法根据已有的IL-12 p40蛋白序列,设计、构建并制备了全新的单克隆抗体MAB1,利用间接ELISA测定其与抗原结合的亲和力,并用细胞学方法鉴定它的生物学活性。结果抗体MAB1与p40抗原的结合亲和力为0.0399 nmol/L,并能明显抑制IL-12诱导的人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)水平上调。其抗原结合能力以及抑制IL-12生物学活性能力与美国强生公司抗体药Stelara(ustekinumab)相当或更优。结论全新构建的单克隆抗体MAB1可作为IL-12通路的高亲和力阻断剂,从而成为自身免疫疾病(例如斑块型银屑病)治疗用新药的临床候选药物。

HLA-A2限制性Survivin点突变肽诱导特异性抗肝癌CTL反应

目的探讨HLA—A2限制性Survivin点突变抗原肽体外诱导CTLs的抗肝癌作用。方法生物信息学软件BIMAS和SYFPEITHI用来鉴定点突变的HLA-A2限制性Survivin抗原九肽；流式细胞术检测突变肽与HLA-A2分子结合效率；肽体外刺激肝癌患者腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）诱导反应性CTLs，用流式细胞术及ELISA检测反应性CTLs释放IFN-γ情况；肽诱导的CTLs与肝癌细胞系HepG2及BEL-7402共孵育，CytoTox96@非放射性细胞毒性检测法检测对肿瘤细胞的裂解情况，倒置相差显微镜观察肝癌细胞形态学变化。结果生物信息学分析筛选出与MHC分子结合效率评分显著提高的点突变Survivin抗原九肽Sur79M2（KMSSGCAFL），流式细胞术检测证实负载Sur79M2的T2细胞，HLA-A2表达率显著提高，经Sur79M2体外刺激诱导的CTLs与靶细胞共孵育后能释放较高水平的IFN-γ，Sur79M2诱导的CTLs能通过HIA．A2限制性机制有效杀伤肝癌细胞系HepG2，对HLA—A2阴性的BEL-7402细胞无明显杀伤作用。结论点突变肽Sur79M2能在体外诱导反应性CTLs产生，该CTLs能以HLA-A2限制性方式有效杀伤肝癌细胞系。