环状RNA circ_0036176结合miR-218-5p发挥抑制心肌纤维化的作用

【目的】探究环形RNAcirc_0036176对心肌纤维化表型的调控作用。【方法】通过RT-qPCR检测人心肌组织(包括18例器官捐赠健康志愿者和28例心力衰竭患者)中circ_0036176及其宿主基因MYO9A的表达水平。利用血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)处理人心房肌成纤维细胞(HAFs),RT-qPCR检测circ_0036176和MYO9A的表达水平。放线菌素D和RNaseR处理,鉴定circ_0036176的典型环状结构。使用circ_0036176腺病毒在HAFs中实现充分过表达,mRNA及蛋白水平检测纤维化相关基团的表达差异。利用双萤光素酶报告基因实验和RNA反义纯化技术(RAP)筛选可与circ_0036176有效结合的miRNA。利用C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)研究miR-218-5p是否介导circ_0036176对心肌纤维化表型的调节作用。【结果】Circ_0036176在心衰心肌中表达增加(P<0.001),但在Ang-Ⅱ诱导的HAFs纤维化细胞模型中,宿主基因及该circRNA的表达一致下调(P<0.01)。放线菌素D和RNaseR实验证实circ_0036176具有典型的环形RNA稳定性。在HAFs中充分过表达circ_0036176后,纤维化相关基因表达均有所下降(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验与RAP实验证实miR-218-5p与circ_0036176间存在结合作用。mCFs中转染miR-218-5p促进了纤维化相关基团的表达,并可有效抵抗circ_0036176的纤维化抑制作用。【结论】Circ_0036176在心衰病人的心肌组织中表达上调,并可通过吸附miR-218-5p的方式来抑制心肌纤维化。

circRNA_100395通过结合miR-31-5p抑制心肌细胞肥大相关基因的表达

目的:探讨环状RNA(circRNA)_100395对心肌细胞肥大表型的影响及其作用机制。方法:通过RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=8)与心衰患者(n=14)心肌组织中circRNA_100395及其宿主基因Kelch蛋白样家族成员20(KLHL20)的表达水平。原代分离、培养乳小鼠心室肌细胞(NMVCs),分别感染对照病毒(rAd-GFP)和circRNA_100395重组腺病毒(rAd-circRNA_100395)24 h,探究circRNA_100395对心肌肥大相关的β-肌球蛋白重链(β-MHC)、骨骼肌α-肌动蛋白(ACTA1)及心房钠尿肽(ANP)表达的影响。采用鬼笔环肽染色检测circRNA_100395对血管紧张素II(AngII)处理的NMVCs肥大反应的影响。通过双萤光素酶报告基因实验及RNApull-down实验验证微小RNA-31-5p(miR-31-5p)与circRNA_100395的结合作用。通过转染miR-31-5p mimic至NMVCs中,检测miR-31-5p对circRNA_100395抑制心肌肥大相关基因表达的影响。结果:在心衰患者心肌组织中,circRNA_100395表达水平及其宿主基因KLHL20的mRNA表达水平显著增加(P<0.05)。过表达circRNA_100395可以降低NMVCs中心肌肥大相关基因Myh7(编码β-MHC蛋白)、Acta1及Anp的表达,抑制AngII的促NMVCs肥大反应(P<0.01)。双萤光素酶报告基因实验和RNApull-down实验结果表明miR-31-5p与circRNA_100395存在相互结合作用。过表达miR-31-5p可减弱circRNA_100395对心肌细胞肥大的抑制作用。结论:circRNA_100395通过结合miR-31-5p发挥抑制心肌细胞肥大的作用。

剪纸动画数字化创新发展路径探索

剪纸艺术作为中国民间传统文化特色的一部分,具有一定的延续性与民族性,应该得到重视与传承。剪纸艺术与数字技术结合是传统艺术数字化开发的典型。论文从分析剪纸艺术与剪纸动画的特点出发,阐述当前剪纸动画借助数字技术创新发展的途径和方法,以期为相关研究创作提供参考。

过表达甲基转移酶3发挥促进心肌纤维化的作用研究

目的研究过表达甲基转移酶3(METTL3)对小鼠心肌纤维化的影响。方法检测心衰患者和健康器官捐献者心肌METTL3表达水平。建立主动脉弓缩窄(TAC)手术诱导的C57BL/6小鼠心肌纤维化模型,检测TAC组与假手术组小鼠心肌METTL3表达水平。建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠心肌成纤维细胞(CF)的心肌纤维化细胞模型,并检测小鼠CF中METTL3的表达水平。利用腺病毒介导小鼠CF高表达METTL3,检测纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(COL1α1)、Ⅲ型胶原α1链(COL3α1)和肌动蛋白α2(ACTα2)的表达。通过流式细胞术、EdU和Transwell细胞迁移实验检测小鼠CF的增殖和迁移能力。在整体水平鉴定心肌特异过表达METTL3对TAC小鼠心功能和心肌纤维化的影响。结果心衰患者心肌中METTL3的表达显著升高(P<0.05)。TAC小鼠心肌与AngⅡ诱导的小鼠CF中METTL3的表达显著增加(P<0.05)。过表达METTL3可显著提高小鼠CF的增殖、迁移能力和纤维化相关基因的表达。与假手术组小鼠相比,TAC诱导心肌特异过表达METTL3小鼠心肌中纤维化相关基因表达显著增加,心肌纤维化和心功能损伤显著加重。结论过表达METTL3具有促进心肌纤维化的作用。

miR-25-3p通过BTG2/SOD2轴促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达

目的研究微小RNA(microRNA,miRNA)miR-25-3p对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控及机制。方法血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注小鼠构建心肌纤维化模型。用miRNA表达谱芯片检测纤维化的小鼠心肌中表达水平有差异的miRNA。原代分离法获得C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞(mCF),建立AngⅡ处理mCF的心肌纤维化细胞模型。mCF转染miR-25-3p mimic后检测纤维化相关基因的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-25-3p与B细胞易位基因2(BTG2)的3′端非翻译区(3′UTR)的结合作用。放线菌素D实验验证BTG2对超氧化物歧化酶2(SOD2)稳定性的作用。结果miR-25-3p在AngⅡ灌注诱导的小鼠心肌和AngⅡ处理的mCF中表达升高。转染miR-25-3p mimic可使mCF中的Ⅰ型胶原α1(COL1A1)、Ⅲ型胶原α1(COL3A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达显著增加。双荧光素酶报告基因实验和功能实验证实BTG2是miR-25-3p的下游靶基因,并参与介导miR-25-3p促进mCF中纤维化相关基因表达的作用。机制研究证实BTG2可通过增加SOD2 m RNA的稳定性而上调其表达。结论miR-25-3p通过抑制BTG2的表达来下调SOD2的水平进而增强纤维化相关基因的表达,发挥促进心肌纤维化的作用。

手工花盆

“哇,这个花盆真好看!”同学们在班级花架前不停地称赞我的手工花盆。那天,班级植物角需要盆栽,我决定用空洗衣液瓶做一个花盆。我把瓶子洗干净后在瓶身画出纹路,再请妈妈沿着纹路剪出花盆的造型,接着在花盆底部戳几个洞,这样,一个漂亮的花盆就完成了。我在花盆里面栽上了自己最爱的多肉,把它带到教室,摆在花架上。