2016年~2022年福建地区猪流行性腹泻病毒S基因的遗传变异分析

为了解2016年~2022年福建地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行现状及遗传变异情况,本研究对从福建地区采集的231份疑似猪流行性腹泻(PED)发病仔猪病料样品经RT-PCR进行PEDV的检测,选取不同地区22份PEDV阳性样品经PCR扩增S基因并测序,采用MegAlign分析PEDV S基因及其编码氨基酸序列的相似性,采用MEGA7.0软件构建其系统发育树,采用MegAlign分析S基因编码氨基酸序列的分子特征,分别利用RDP4、SimPlot、MEGA7.0软件进行S基因的重组分析,并利用BEAST软件进行该基因分歧时间估算。结果显示,福建地区PEDV总阳性率为51.51%(119/231),福建5个不同地区PEDV阳性率为40.00%~63.16%。从22份PEDV阳性样品中获得19条PEDV S基因序列,全长4149 bp~4161 bp,共编码1382 aa~1386 aa,19株PEDV S基因序列及其编码氨基酸序列之间相似性分别为94.4%~100%和93.8%~100%。19株PEDV S基因系统发育分析结果显示,其中18株PEDV属于GIIb亚型,1株属于GIb亚型。S蛋白氨基酸序列分析结果显示,与经典疫苗株CV777相比,18株GIIb亚型PEDV S蛋白的氨基酸序列在aa55~aa56、aa135~aa136和aa155~aa156处存在插入与缺失,具有典型的PEDV变异株的分子特征;其中14株还出现了独特的aa1193缺失。与GII型疫苗株AJ1102相比,19株PEDV S1区氨基酸突变率为60.00%~83.82%,其中18株GIIb亚型PEDV S1区氨基酸突变位点中有10个位于S蛋白重要结构域;基因重组分析结果显示,有3株PEDV S基因存在重组事件,其中FJLY01-2018株由GD-B株和CH-S株重组而来,FJLY02-2018株由CH/HNPJ/2017株和PEDV4-S-3株重组而来,FJLY03-2022株由PEDV-1931-1-Valladolid-Molpeceres株和HUA-M17株重组而来;S基因分歧时间估算结果显示,福建地区GIIa亚型、GIIb亚型、GIa亚型及GIb亚型PEDV的最早分歧时间约为1995年、2009年、2010年和2011年。上述结果表明福建地区PEDV流行率较高,田间流行株基因型具有多样性,且存在重组现象,临床上应予以高度重视。本研究为福建地区PED的流行病学调查及免疫防控提供了参考。

木村病13例临床分析

目的:提高对木村病的认识。方法:回顾性分析本院2003年1月至2008年10月13例木村病的临床资料。结果:木村病的主要表现为头颈部肿物(11例)、头颈部淋巴结肿大(11例)、腮腺侵犯(4例)、外耳道侵犯(2例)、压迫症状(2例),合并肾病综合征(1例),外周血嗜酸性粒细胞计数增多(7例),治疗后复发(4例)。结论:中青年男性、头颈部慢性无痛性肿块、局部淋巴结肿大、血嗜酸性粒细胞计数升高、血清IgE水平升高提示木村病可能,确诊依赖病理学检查。

咳嗽变异性哮喘易被误诊

哮喘是一种异质性疾病,通常以慢性气道炎症为特征,具有反复发作的喘息、气促、胸闷和咳嗽等呼吸道症状,症状发作的持续时间及严重程度有所不同,同时伴有可变的气流受限、气道高反应性,病情迁延不愈可出现气道重构.

镁对哮喘患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞凋亡及Foxp3表达的影响

目的:观察镁对分离培养的健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞凋亡及叉头框蛋白3(Foxp3)表达的影响。方法:经磁珠分离法分离出健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+T细胞,分镁剂干预组(10 mmol/L)及空白组培养72 h后,用流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞的凋亡率及Foxp3表达情况。结果:(1)健康人外周血CD4+CD25+T细胞的纯度为77.4%～92.3%,哮喘患者CD4+CD25+T细胞的纯度为75.2%～93.8%。(2)CD4+CD25+T细胞占外周血CD4+T细胞的比例在健康组为4.12%～7.98%,在哮喘组为4.51%～8.68%,两者没有显著差异(P>0.05)。(3)镁(10 mmol/L)可以诱导健康组及哮喘组外周血CD4+CD25+T细胞凋亡率增加(P<0.05),但对Foxp3的表达无影响(P>0.05)。结论:镁促进CD4+CD25+T调节细胞凋亡增加可能为其治疗支气管哮喘的作用机制之一。

反转录病毒介导靶向瞬时感受器电位M7基因siRNA抑制RBL-2H3细胞的活化

背景:钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用。瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道。目的:构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗原活化的影响。方法:实验设计3个TRPM7-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反转录病毒载体,用重组质粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1,2,3)采用脂质体Lipofectamine 2000转染RBL-2H3细胞,采用Western blot检测干扰效率。筛选出最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7与包装质粒共转染293FT细胞生成反转录病毒并感染RBL-2H3细胞,荧光实时定量PCR及Western blot检测TRPM7-siRNA的沉默效果。检测β-氨基已糖苷酶活性探讨RBL-2H3细胞抗原活化程度的改变。结果与结论:转染后的各组细胞中siTRPM7-3转染组的沉默效率最高(P<0.05)。pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3干扰组的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平显著下调,致敏后其β-氨基已糖苷酶活性明显降低(P<0.05)。结果提示,降低TRPM7基因的表达可抑制RBL-2H3细胞的抗原活化。

腹腔镜胆囊手术后医院获得性肺炎的危险因素分析

目的探讨腹腔镜胆囊手术后患者发生医院获得性肺炎的危险因素。方法收集2007年1月至2016年12月行腹腔镜胆囊切除术的患者3 487例,评价肺部感染的情况,分为HAP组与非HAP组,对两组患者围手术期的14个相关因素进行Logistic单因素和多因素回归分析。结果 197例(5.65%)患者医院获得性肺炎。对上述因素进行的单因素Logistic回归分析显示吸烟、糖尿病史、COPD病史、急诊手术、ASA分级、术中出血量等因素差异有统计学意义(P <0.05)。多因素分析发现吸烟、糖尿病史、COPD病史、急诊手术、术中出血量与患者手术发生医院获得性肺炎相关。结论吸烟、糖尿病史、COPD病史、急诊手术、术中出血量大是腹腔镜胆囊切除手术后患者发生医院获得性肺炎的独立危险因素。

复方血栓通胶囊对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠低氧性肺动脉高压的干预作用

目的:了解复方血栓通胶囊对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠低氧性肺动脉高压的干预作用。方法:将实验大鼠随机分为实验组、肝素对照组、空白对照组和正常组各12只,前3组建立COPD大鼠模型,经反复低氧处理形成肺动脉高压,实验组使用复方血栓通胶囊干预,肝素对照组使用低分子肝素治疗,空白对照组仅建立模型,不给予药物干预,正常组为正常饲养大鼠,对比4组大鼠肺动脉压力的差异。结果:实验组大鼠肺动脉压力明显高于正常组(P<0.001)而低于空白对照组(P=0.026),但稍高于肝素对照组(P=0.039)。结论:复方血栓通胶囊可降低COPD模型大鼠因低氧而升高的肺动脉压力。

成人膈疝18例诊断分析

目的：探讨成人膈疝的临床特点。方法：结合文献对1992年-2012年中山大学孙逸仙纪念医院收治18例成人膈疝的临床表现、影像学特点、诊断、误诊情况及医源性损伤进行分析。结果：14例行胸部x线检查的患者中仅1例提示膈疝，其余均出现类似其他疾病的表现，未能正确诊断。通过特异性体征、上消化道造影和／或胸部CT及MR检查术前提示膈疝诊断17例，均经手术证实诊断。1例以肿块为表现的患者须经手术明确诊断。5例在诊治过程早期出现误诊。1例经皮肺穿刺检查，但未能明确。结论：影像学中位于膈上、膈旁及涉及膈肌的病变应警惕膈疝，钡剂或其替代物检查、胸部CT及MR可为膈疝的及早诊断提供有效的帮助，对疑为膈疝的患者应避免有创性穿刺检查。

血嗜酸性粒细胞计数与冠状动脉旁路移植手术后肺炎风险（英文）

目的:研究血嗜酸性粒细胞计数与冠状动脉旁路移植手术患者术后肺炎风险的关系。方法:收集2008年~2017年在我院进行冠状动脉旁路移植手术的613例患者资料进行分析,比较不同血嗜酸性粒细胞计数患者术后肺炎发生率及住院死亡率,采用多因素回归分析明确患者术后肺炎的危险因素。结果:研究共纳入582例患者,其中220例患者血嗜酸性粒细胞比例<2%(低血嗜酸性粒细胞组),362例患者血嗜酸性粒细胞比例≥2%(高血嗜酸性粒细胞组)。低血嗜酸性粒细胞组术后肺炎发生率(14.1%,31/220)明显高于高血嗜酸性粒细胞组(6.4%,23/362,P=0.002),而2组患者住院死亡率无明显差异。多因素回归分析结果显示低血嗜酸性粒细胞计数(OR=3.521,95%CI:1.213~10.223,P=0.021)、鼻胃管(OR=6.490,95%CI:2.757~15.280,P<0.001)和机械通气时间≥24 h(OR=3.496,95%CI:1.156~10.178,P=0.035)为术后发生肺炎的独立危险因素。结论:低血嗜酸性粒细胞计数患者冠状动脉旁路移植手术后发生肺炎的风险升高。

大鼠RBL-2H3细胞瞬时感受器电位M7通道参与细胞存活及凋亡

背景:瞬时感受器电位M7是肥大细胞上重要的钙离子通道,但其在肥大细胞存活及凋亡过程中的作用仍未明确。目的:观察瞬时感受器电位M7通道对大鼠RBL-2H3细胞存活及凋亡的影响。方法:取对数生长期RBL-2H3细胞,①分别以50,100,200μmol/L瞬时感受器电位通道阻断剂2-APB进行干预,并以0.1%DMSO干预的细胞及正常培养的细胞作对照。②以瞬时感受器电位M7-siRNA反转录病毒载体转染RBL-2H3细胞,并设立空载体组和正常对照组。结果与结论:经过100,200μmol/L的2-APB作用72h后,RBL-2H3细胞数减少,吸光度值降低(P<0.05),细胞凋亡增多,早期凋亡率和总凋亡率增加(P<0.05);RBL-2H3细胞转染si-瞬时感受器电位M772h后,吸光度值降低(P<0.05),细胞凋亡增多,早期凋亡率和总凋亡率增加(P<0.05)。说明瞬时感受器电位M7通道参与了RBL-2H3细胞存活和凋亡过程。

三种方法培养慢性阻塞性肺疾病大鼠气道平滑肌细胞的比较

背景:原代培养方法被广泛应用于正常和哮喘大鼠气道平滑肌细胞的培养,但少见用于慢性阻塞性肺疾病大鼠气道平滑肌细胞培养的报道。目的:建立大鼠慢性阻塞性肺疾病模型,比较组织块法、酶消化法和改良组织块消化法原代培养模型大鼠气道平滑肌细胞生长情况的差异。方法:将16只清洁级雄性健康SD大鼠随机分成2组,对照组正常饲养,慢性阻塞性肺疾病组用熏烟法建立大鼠慢性阻塞性肺疾病模型,显微镜下观察大鼠肺组织病理学特点。分别应用上述3种方法原代培养慢性阻塞性肺疾病大鼠气道平滑肌细胞,相差显微镜下观察细胞形态,用α-平滑肌肌动蛋白免疫组织化学染色鉴定细胞类型。结果与结论:经病理学证实成功构建慢性阻塞性肺疾病大鼠模型。在倒置相差显微镜下见培养的细胞表现为典型的"谷-峰状"生长。经免疫细胞化学染色后,可见胞质呈棕色阳性反应,所培养的细胞有94%以上为气道平滑肌细胞。3种方法在耗时和细胞质量方面均无明显差别,但组织块法更经济、稳定可靠和简单。

雷公藤甲素对哮喘小鼠气道重塑及对STAT6、eotaxin的影响

目的:探讨雷公藤甲素对哮喘小鼠气道重塑及对信号转导子及转录激活因子6(STAT6)、酸粒细胞趋化因子(eotaxin)的影响。方法:建立小鼠卵蛋白(OVA)哮喘模型,30只随机分3组:对照组、哮喘组及雷公藤甲素组,在末次激发24 h后对肺组织染色处理,采用半定量法对支气管周围炎症细胞浸润进行判定,计算气道上皮细胞中杯状细胞的比例,采用McMillan方法对气道黏液进行评分,并测定羟脯氨酸的含量。通过免疫组化、逆转录一聚合酶链反应检测肺组织与气道上皮中的STAT6、eotaxin mRNA及STAT6、eotaxin的蛋白表达。结果:与哮喘组相比,雷公藤甲素组的支气管周围炎症细胞浸润减轻,黏液指数为(1.31±0.23)分,羟脯氨酸为(284±13)μmg/100 mg,与哮喘组比较差异有显著性(P<0.05);同时STAT6、eotaxin mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.05);经直线相关分析发现,气道上皮STAT6蛋白表达与eotaxin蛋白表达呈正相关(r=0.668,P<0.05)。结论 :雷公藤甲素可抑制哮喘气道重塑,可能是通过下调STAT6、eotaxin表达实现的。

miR-23b在哮喘小鼠气道平滑肌中的表达及其功能探讨

目的:观察miR-23b在哮喘小鼠气道平滑肌组织中的表达情况,并探讨miR-23b对体外气道平滑肌细胞(ASMCs)生物学功能的影响及其机制。方法:将16只BALB/c小鼠随机分为哮喘模型组和正常对照组,每组8只。以卵蛋白(OVA)致敏、激发,构建哮喘小鼠模型。在末次激发后24~48h内取小鼠气道平滑肌组织,荧光定量PCR(q-PCR)法检测两组小鼠气道平滑肌组织中miR-23b的表达。采用组织块贴壁法分离两组小鼠ASMCs并分别将其作为正常对照组和哮喘模型组。对哮喘模型组ASMCs分别转染miR-23bmimics和mimics NC。采用CCK8、流式细胞术和western blotting法分别检测4组ASMCs的增殖、凋亡和细胞转化生长因子受体2(TGFβR2)蛋白的表达情况。结果:与正常对照组相比,哮喘模型组小鼠气道平滑肌组织中miR-23bmRNA相对表达量明显减少(P<0.05)。哮喘模型组ASMCs增殖速度明显增加(P<0.05);经miR-23b mimics转染后,与哮喘模型组相比,miR-23bmimics组ASMCs的增殖速度减慢,同时细胞凋亡率升高,TGFβR2蛋白表达量降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:哮喘小鼠气道平滑肌组织中miR-23b表达降低,可导致AMSCs过度增殖,细胞凋亡减少,该作用机制可能与miR-23b下调哮喘小鼠AMSCs中TGFβR2的表达有关。

瞬时感受器电位M7在慢性阻塞性肺疾病大鼠模型体内的表达与淋巴细胞的相关性分析

目的:探讨瞬时感受器电位M7(TRPM7)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺、脾组织内的表达及其与淋巴细胞亚群的相关性并探究TRPM7对脾淋巴细胞增殖、凋亡及分化的影响。方法:选用20只雄性SD大鼠,采用气管内滴注脂多糖(LPS)联合烟熏的方法构建大鼠COPD模型,肺组织HE染色鉴定造模成功;RTqPCR检测肺、脾组织中TRPM7、CD4、CD8、TGF-β1、TGF-βR1及TGF-βR2 mRNA的表达并进行相关性分析。2-APB干预脾淋巴细胞TRPM7功能,流式及CCK-8检测脾淋巴细胞的增殖凋亡和分化情况。结果:HE染色示COPD组大鼠肺组织炎性细胞浸润,肺泡结构紊乱,肺泡腔扩大;脾组织淋巴滤泡萎缩,结缔组织增生。COPD组大鼠肺、脾组织中TRPM7及CD8 mRNA表达减少且TPPM7与CD8 mRNA的表达呈正相关关系(P<0.05);COPD组大鼠肺、脾组织中CD4、TGF-β1及TGF-βR2表达增加(P<0.05)但与TRPM7无相关关系(P>0.05)。2-APB体外干预脾淋巴细胞TRPM7功能后,可促进脾淋巴细胞凋亡,抑制脾淋巴细胞增殖,减少CD3+CD8+T淋巴细胞的比例(P<0.05)。结论:TRPM7在LPS联合烟熏诱导COPD模型大鼠体内表达减少,与CD8+T淋巴细胞表达减少存在相关性。2-APB体外干预TRPM7功能影响脾淋巴细胞增殖、凋亡及分化,减少CD8+T淋巴细胞比例。

基于汽车产品研发数据的管控策略探讨

面对日趋激烈的市场竞争,如何高效低成本地研发出高质量的产品,成为企业生存的关键。汽车产品研发数据是根据企业研发、供应、销售和售后服务的需要,在产品研发过程中产生的各种零部件状态、物料清单、技术文件、设计变更等数据,是整车技术参数、零部件状态满足设计目标的实物体现。汽车产品研发数据管理方式决定产品生产链的上下游活动能否有序进行,是产品质量的保证。论文通过分析产品数据管控的目的与作用,充分考虑产品数据的灵活性和扩展性,避免产品数据信息之间缺少互补,信息不能有效共享,以至于出现信息孤岛问题。重点阐述了企业务必搭载着数据管理的平台,形成产品研发数据的分类管控策略,探索科学合理的管控方法,有效提高企业研发效率。

免疫正常宿主肺镰刀菌病的临床分析

目的:探讨免疫正常宿主肺镰刀菌病的临床特征。方法:回顾我院1例免疫正常宿主肺镰刀菌病患者的临床资料,并复习国内外文献报告病例,总结该病的临床特征及预后。结果:通过PubMed数据库共检索到3篇免疫正常宿主肺镰刀菌病的英文个案报告,中文文献尚无相关报告。包含我院病例在内的4例患者均表现为咳嗽、咳痰,2例表现为发热,1例表现为咯血,1例表现为胸痛。HRCT均有肺浸润,表现为结节影(3/4例)、肿块影(2/4例)、空洞样改变(1/4例)、磨玻璃样阴影(1/4例)、间质增厚(1/4例)、支气管扩张(1/4例)、纵膈淋巴结肿大(2/4例)。抗真菌治疗后均好转。结论:免疫正常宿主肺镰刀菌病预后良好。

可视化微观显影对二氧化碳膨胀乙醇提取葡萄籽油的过程分析

葡萄籽油是一种富含亚油酸的食用油脂资源,研究构建了一整套可视化微观显影技术,研究了新型加压溶剂二氧化碳膨胀乙醇(CO_(2)-Expanded Ethanol,CXE)提取葡萄籽油的机制。首先,利用扫描电镜解析了葡萄籽粉物料颗粒内部的微观结构,采用尼罗红对葡萄籽油脂进行了特异性染色,构建了荧光定量油脂的方法,直观地分析了CXE提取葡萄籽油的三阶段过程。进一步通过激光共聚焦技术考察了提取过程中,各阶段油脂在颗粒内部的空间分布变化,对油释放过程进行了动态分析,并从微观角度上比较了不同方法的提取能力。由此可知,构建可视化微观显影技术可以直观准确地反映CXE提取中的油脂传质过程,进而阐明复杂流体提取操作的作用机制。

抗肿瘤药物联合磁场在抑制肿瘤细胞增殖中的应用研究

在针对目前临床治疗恶性肿瘤存在种种不足的基础上,介绍了抗肿瘤药物联合磁场后在肿瘤治疗研究中的应用.通过查阅国内外相关抗肿瘤药物联合磁场的相关文献,并分析、归纳后,综述了抗肿瘤药物的分类及其优缺点,以及近年来磁场作用于肿瘤细胞的各种生物学效应等,详细阐述了抗肿瘤药物联合磁场在肿瘤治疗中的应用.随着生物磁学的发展,抗肿瘤药物联合磁场的方法在肿瘤治疗研究中因其独特的高效性和靶向性等优势,将为今后临床治疗肿瘤提供新的治疗手段.

米曲霉脂肪酶富集浓缩裂殖壶藻油脂中DHA的机理研究

采用米曲霉(Aspergillus oryzae,AO)脂肪酶水解法对裂殖壶藻油脂中的二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)进行了浓缩。在AO脂肪酶最适反应条件下,水解12 h后,反应达到了平衡,产物中甘三酯含量降至40.2%,DHA含量升至55.43%,浓缩了1.58倍,回收率高达68.2%。通过气相色谱结合核磁共振碳谱(^(13)C-NMR)对产物中甘油三酯脂肪酸组成及含量进行了分析,结果显示在酶解反应过程中,DHA倾向于留在甘三酯甘油骨架上,且sn-1,3位上的饱和脂肪酸易被水解而含量下降,表明AO脂肪酶水解反应对甘油骨架上的脂肪酸具有选择性,可将DHA富集在甘油三酯中。AO脂肪酶价格低廉,基于酶解反应的DHA富集工艺简单,深入了解反应的作用机制,将为后续的理论研究和实际应用提供依据。

miR-23b通过Smad3信号通路抑制TGF-β1诱导的气道平滑肌细胞增殖的研究

目的探究miR-23b对气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的作用及其分子机制。方法组织块贴壁法分离培养BALB/c小鼠原代ASMCs,并进行传代。对ASMCs转染miR-23b mimic和inhibitor后,转化生长因子-β1(TGF-β1)以10μg/L的浓度干预处理各组转染细胞,评估miR-23b与TGF-β1对ASMCs增殖和凋亡的影响。采用生物信息学方法预测miR-23b靶基因,同时通过RT-PCR和Western blot分析检测miR-23b靶基因Smad3在ASMCs中的表达水平。结果 miR-23b的过表达能够显著抑制TGF-β1诱导的ASMCs增殖,促进细胞凋亡。RT-PCR和Western blot检测显示miR-23b负调控Smad3蛋白在ASMCs中的表达。结论 miR-23b可以通过Smad3信号通路抑制TGF-β1诱导的ASMCs增殖。