细胞角蛋白8对丙型肝炎病毒复制的影响

细胞角蛋白8(KRT-8)水平在丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的肝癌患者体内及在HCV感染细胞培养中均明显上升,与肝病进展密切相关,但KRT-8是否对HCV复制产生影响并不清楚。本文利用KRT-8高表达质粒和特异性sh RNA分析其在细胞培养中对HCV复制的影响,并分析低沉默KRT-8后与已知抗HCV药物联合抑制HCV的作用及其对常见HCV耐药突变株的影响。结果显示,胞内KRT-8水平随HCV复制的增加而增加,其高表达能促进HCV的复制,而特异性干扰KRT-8基因表达后,HCV的复制受到抑制。低沉默KRT-8可以增强已知抗HCV药物特拉匹韦抑制HCV复制的作用,且对蛋白酶抑制剂常见耐药突变(A156T和D168V)HCV也具有抑制作用。这提示KRT-8可能是HCV复制的辅助因子,下调KRT-8具有抗HCV的作用及优势。因此,KRT-8有望成为抗HCV药物研发的一个新的宿主靶点。

新型糖原磷酸化酶抑制剂山楂酸对Ⅱ型糖尿病大鼠的神经保护作用(英文)

目的:探讨新型糖原磷酸化酶抑制剂山楂酸(MA)对高血糖大鼠脑缺血/再灌损伤的作用。方法:通过高脂饮食(HFD)合并低剂量链脲佐菌素(STZ)注射,制作II型糖尿病大鼠模型。不同剂量MA(10,5和2.5mg·kg?1·d?1)灌胃2周。双侧颈总结扎诱导建立大鼠脑缺血模型,评价MA对脑缺血/再灌II型糖尿病大鼠神经保护作用。结果:MA可显著降低II型糖尿病大鼠的空腹血糖(GLU)、血浆甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平。脑缺血II型糖尿病大鼠脑组织中丙二醛(MDA)含量显著增高,超氧化物歧化酶(SOD)活性显著下降;缺血3d后海马CA1区可观察到显著神经元损伤。MA显著减轻脑缺血损伤,并呈剂量依赖性。此外,MA可显著降低皮层和海马区MDA含量,减轻脑组织的脂质过氧化反应,提高缺血再灌大鼠脑组织的SOD活性。结论:MA预作用对II型糖尿病合并脑缺血诱导的损伤具有良好的保护作用。

蛋白免疫印迹半定量分析在药理学研究中的影响因素

目的探讨蛋白免疫印迹半定量分析的影响因素,为在蛋白水平上研究药物的药理作用提供指导。方法提取丙型肝炎病毒(HCV)感染的Huh7.5细胞内总蛋白,蛋白定量后,以丙型肝炎病毒编码的核心蛋白为目的蛋白,以管家基因编码的蛋白Tubulin或Gapdh为内参对照,分析蛋白上样量、抗体浓度及孵育时间、发光液浓度等可变因素对蛋白免疫印迹半定量分析结果的影响。结果蛋白免疫印迹半定量结果中目的蛋白相对强度与蛋白总上样量之间只在一定上样量范围内有线性关系,超出线性范围会导致相对蛋白强度变化幅度减少,甚至无变化;上样体积、内参的选择不影响实验结果;在条带质量较好的前提下,一抗浓度及其孵育时间和发光液浓度也不改变实验结果;但是半定量有一定的缺陷,实验结果有一定的误差,应在15%以内。结论影响蛋白免疫印迹半定量结果的主要因素为目的蛋白的上样量;在能获得条带质量较好的前提下,改变上样体积和抗体孵育时间、适当稀释抗体和发光液浓度有利于实验进展而不影响实验结果。