2型猪链球菌病的初步研究

从广东某猪场断奶仔猪暴发败血症、脑膜炎及关节炎病例中分离到15株链球菌。分离菌能使猪、山羊、兔产生相同的临床症状,并能从致死动物中回收到接种菌;对小鼠、豚鼠、雏鸡及雏鸭不致病。经用琼脂扩散、毛细管沉淀及玻片凝集血清学试验进行鉴定,这15株均为2型猪链球菌。采用灭活菌苗及敏感药物等综合防治措施,基本上控制了本病。

2型猪链球菌的血清学鉴定

本试验首次证实了２型猪链球菌在我国的存在。采用玻片凝集、琼脂扩散及毛细管沉淀等３项试验，对１９９０年以来广东某猪场断奶仔猪暴发流行的败血症、脑膜炎及关节炎病猪中分离的１５株链球菌进行了血清学鉴定。结果表明：１５株链球菌均为２型猪链球菌；用高压法提取抗原进行沉淀反应，其结果比酸热法提取抗原具有简便、敏感、特异性强的特点。

猪O型口蹄疫病毒P1／3C基因共表达重组腺病毒的构建与鉴定

通过PCR和RT-PCR扩增出目的基因,将FMDV P1和3C基因通过IRES串联,构建出重组腺病毒穿梭质粒,在BJ5173细菌中同源重组获得同源重组腺病毒质粒,转化XL1-Gold超级感受态细胞以扩大培养,PacⅠ酶切后转染AD-293细胞,纯化获得了重组腺病毒。该重组腺病毒于AD-293细胞连续传代培养,初步浓缩后TCID50为1010.71/mL。应用O型口蹄疫病毒阳性血清进行间接荧光抗体试验,病毒感染的AD-293细胞可见清晰荧光,证明该重组腺病毒对目的基因进行了成功的表达,为FMDVP1/3C基因共表达腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。

伪狂犬病病毒Ma株基因组3.4kb及4.4kbBamHI片段的克隆与鉴定

本试验采用BamHI酶切伪狂犬病病毒 (PRV)Ma株基因组DNA ,电泳回收 3 4kb和4 4kb片段 ,快速克隆了伪狂犬病病毒Ma株BamHI 3 4kb和 4 4kb片段到质粒 pUC1 9中 ,对其进行部分序列测定并与Genebank序列进行同源性分析 ,结果表明BamHI 3 4kb片段包含UL50等基因 ,与Ka株UL50基因同源性为 87% ,BamHI 4 4kb片段包含RSP40及PK等基因片段 ,与Ka株RSP40基因同源性为 98%。Ka株BamHI 3 4kb片段包含TK基因 ,而包含UL50基因的BamHI片段为 7 4kb。结果表明 。

伪狂犬病病毒闽A株gE主要抗原表位基因在大肠杆菌中的克隆与表达

根据伪狂犬病病毒 Rise毒株 g E基因序列 ,设计合成 1对引物 ,采用 PCR方法 ,从伪狂犬病病毒闽 A株 DNA扩增出 5 5 8bp片段。将该片段克隆到 p UC19质粒中 ,测序正确后再将其克隆到表达质粒 p ET- 2 8a中 ,以 BL 2 1(DE3)为宿主菌 ,在 IPTG诱导下获得了高效表达。经 SDS- PAGE及 Western- blotting鉴定分析 ,表达蛋白大小约 2 30 0 0 ,蛋白薄层扫描分析表明 ,该蛋白约占菌体总蛋白的 30 %。

当前猪病毒性腹泻流行特点与防控建议

猪病毒性腹泻是指由猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和轮状病毒（RV）三种病原单独或混合感染引起的临床上只以急性水样腹泻为主要症状疾病的统称。

当前猪病的流行特点及其防控策略

消费行业永远是朝阳行业,而养猪行业作为关乎民生的朝阳行业,在2011年显得格外地生机勃勃。一方面多方面力量都向养猪行业进军,行业人士分析,未来3～5年将出现数家年出栏量50万～100万头生猪的大规模公司,中大型养猪企业可占市场的30%。

当前猪病毒性腹泻流行特点与防控建议

（一）流行特点近年来，严重的猪病毒性腹泻主要发生在泰国、日本、韩国及我国等亚洲养猪国家，主要病原为猪流行性腹泻病（PED），而猪传染性胃肠炎（TGE）和猪轮状病毒（RV）较少见。偶尔有三个病原同时出现，或两个组合，多以PED为主。该病主要发生于冬春寒冷潮湿季节，但近年来个别猪场处理不当时可一年四季反复发生。

集约化猪场病毒性腹泻综合防控措施

在畜牧业高速发展的今天,在集约化养殖中,对猪病的防控愈发重要。在诸多猪病中病毒性腹泻危害极大,一旦发病会给养殖者带来极大的经济损失。本文将对病毒性的病原、临床症状、诊断方法及综合防控措施进行详细介绍。

仔猪大肠杆菌性腹泻的病原分离鉴定及免疫效果观察

仔猪大肠杆菌性腹泻的病原分离鉴定及免疫效果观察余志东，李乃津，黄引贤，黄毓茂，李柠，袁少华，梁昭平，施均喻，陈连忠，蒋远云（华南农业大学广州５１０６４２）广东Ｊ、Ｙ两个猪场的哺乳仔猪发生严重的腹泻。７日龄内的仔猪拉黄色稀粪，仔猪迅速脱水消瘦和死亡；７...

抗菌肽LL-37在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性鉴定

为获得高效表达的抗菌肽LL-37,根据人源抗菌肽LL-37的氨基酸序列,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法改造合成LL-37基因片段,克隆到pGAPZαA质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA-LL-37。pGAPZαA-LL-37通过限制性内切酶AvrII酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168。经Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测表明LL-37基因与毕赤酵母染色体稳定结合。在GAP启动子调控下,LL-37蛋白获得分泌表达,其上清表达量约为237mg/L。表达产物耐热性强,在100℃条件下30min内仍保持一定的抗菌活性。表达产物对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌D31和猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。

猪流行性腹泻病毒重组腺病毒疫苗的构建及小鼠免疫试验

通过RT-PCR和重组PCR技术扩增出猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)疫苗株sM、M、S基因,构建重组腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与BJ5183细菌同源重组构建同源重组腺病毒质粒,同源重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切后转染AD-293细胞,获得3个含有目的基因的重组腺病毒。将3个具有感染能力的复制缺陷性重组腺病毒共同感染Vero细胞,细胞上清液进行小鼠免疫特性研究。结果表明,共同感染Vero细胞所得蛋白能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。

牛结核病荧光定量PCR快速检测方法的建立及初步应用

目的建立牛结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法根据分枝杆菌的插入序列IS1081设计引物和探针,优化反应条件,建立标准曲线,进行特异性、敏感性、重复性实验,并用所建立的方法对临床样品进行检测。结果该方法的敏感性达到了10个拷贝,且特异性高,重复性好。对30份PPD试验和巢式PCR检测都为阳性的临床样本进行荧光定量PCR检测的结果全部为阳性;而对PPD检测阳性,巢式PCR检测为阴性的15份临床样本进行检测时,2份为阳性;在对2份PPD检测阴性而巢式PCR检测阳性的临床样本的检测结果也为阳性。结论成功建立了牛结核病荧光定量PCR快速检测方法,对临床样品的快速检测和牛结核病的早期诊断具有重要意义。

抗菌肽Cecropin D基因在毕赤酵母中的表达与抗菌活性分析

为使抗菌肽Cecropin D在巴斯德毕赤酵母中高效表达,本研究根据Cecropin D全基因序列和毕赤酵母的偏嗜性设计合成4条寡聚西核苷酸,SOEing-PCR技术法合成Cecropin D基因序列,并克隆至酵母表达载体pGAPZαA中,构建重组表达质粒,将其线性化后电击转化毕赤酵母菌株SMD1168,经高浓度博莱霉素筛选,获得高拷贝转化子,菌液PCR鉴定表明Cecropin D基因已整合到酵母基因组中。在GAP强启动子调控下,重组Cecropin D高效分泌表达,产物耐高温耐酸碱,并对部分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑菌效果,对E.coliDH5α和S.aureus Cowan I株的MIC值分别为2.17μg/mL和4.55μg/mL。

O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆与表达

以O型口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株为研究对象,通过RT PCR扩增出VP1基因,克隆至表达载体pET 32a中,分析比较不同地区O型口蹄疫病毒VP1基因序列,为构建VP1重组基因工程苗奠定基础.经测序表明,目的基因VP1已以正确的阅读框架整合至表达质粒中,应用大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌,通过IPTG诱导方法,表达包含VP1基因产物的融合蛋白,经SDS PAGE和Western blotting分析,表明表达蛋白表达量高,反应原性良好.

牛结核病巢式PCR快速检测方法的建立

根据分枝杆菌(mycobacteria)保守的插入序列IS1081设计4条特异性引物,建立了快速检测牛结核病的巢式PCR方法。该方法一次扩增的敏感性是1.35 pg,二次扩增的敏感性是1.35 fg。在对95份PPD阳性牛临床病料组织和23份血液样本的PCR检测中,用引物TB-Q1和TB-Q2做一次扩增,阳性检出率分别为36/95(37.5%)和5/23(21.7%);用引物TB-B1和TB-B2做二次扩增,阳性检出率分别为81/95(85.3%)和14/23(60.9%)。该方法作为辅助PPD试验的快速检测方法用于牛结核病的流行病学调查,具有重要的实用价值和应用前景。

集约化猪场非典型猪瘟的诊断与防制

猪瘟是田猪瘟病毒引起的一种急性接触性传染病,是目前危害我国养猪业发展的主要疫病之一.集约化猪场均实施了以接种疫苗为主的综合性防制措施,有效地控制了猪瘟的发生和流行.但近年来,集约化猪场猪瘟流行特点发生了明显的变化,出现了非典型、温和型猪瘟.

仔猪暴发猪繁殖与呼吸道综合征

调查了１９９５年广东省３个猪场暴发的疫病，根据流行病学、临床症状、病理变化、人工感染试验，结合间接免疫荧光试验及电镜观察等实验室诊断，确诊为猪繁殖与呼吸道综合征。