无血预充大鼠外周静脉-动脉体外膜氧合模型建立的初步探索

目的建立无血预充的大鼠静脉-动脉体外膜氧合(V-A ECMO)模型,为进一步探讨和研究ECMO期间的器官损伤机制及相应保护策略等问题奠定基础。方法随机选取5只成年SD雄性大鼠,七氟烷诱导麻醉,颈静脉置入自制多孔静脉引流管作为静脉引流端,左侧股动脉置入22 G一次性使用静脉留置针监测血压,右侧股动脉置入同款留置针为动脉灌注端。从监测端动脉通路给予肝素(500 U/kg)抗凝,活化凝血时间达400 s以上开始ECMO运转,2 h后停止运转。分别于术前,术中1 h,2 h三个时间点抽取动脉血气分析,记录各时间点血气值,并于术中实时监测记录动脉压及心率。结果所有大鼠均顺利完成实验,并在撤除ECMO后于麻醉状态下处死。各时间点血气结果平稳。术中心率在300次/min左右,无恶性心律失常,血压平稳,平均动脉压维持在70~90 mm Hg。结论本实验成功建立大鼠外周V-A ECMO模型,术前无需血液预充,术中麻醉深度精准可控、呼吸循环稳定、血气结果满意,操作简便易行,成功率高,可用于研究ECMO期间血流动力学改变,同时使脏器损伤的机制探讨及干预治疗的靶点研究成为可能。

荧光标记中性粒细胞特异性敲除膜结合型前列腺素E2合酶-1小鼠的构建及其在静脉血栓形成中的应用

膜结合型前列腺素E2合酶-1(mPGES-1)是一个新型抗炎药靶,全身敲除mPGES-1不影响动脉血栓形成,抑制血管病理性重构。目的构建荧光(tdTomato)标记的mPGES-1中性粒细胞特异性敲除小鼠并鉴定其在静脉血栓形成中的应用。方法与结果人工合成基因打靶序列,包括mPGES-1同源序列、LoxP序列、Lox2272序列和tdTomato表达序列,利用CRISPR/Cas9技术将这段合成序列同源置换C57BL/6N小鼠的mPGES-1基因序列,制备转基因小鼠(mPGES-1fl/fl),将其与中性粒细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠(Lyz-Cre+)杂交获得Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠。向小鼠腹腔注射脂多糖诱导炎症,半定量PCR结果显示Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠外周血白细胞mPGES-1表达缺失,荧光显微镜观察和流式细胞分析结果表明tdTomato成功标记Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠中性粒细胞。通过限制血流诱导小鼠下腔静脉血栓,荧光标记的中性粒细胞参与静脉血栓形成。敲除中性粒细胞mPGES-1不影响基础状态血液PGE2水平,但显著抑制诱导静脉血栓相关的PGE2水平上调。结论成功构建报告基因tdTomato特异性标记的mPGES-1组织特异性敲除的转基因小鼠,利用此工具鼠进一步发现中性粒细胞参与静脉血栓形成,中性粒细胞mPGES-1介导静脉血栓形成相关的PGE2合成。

一种合并高血脂和诱导型高血压的新型小鼠模型的构建与鉴定

目的构建一种合并高血脂和诱导型高血压的小鼠模型。方法利用CRISPR/Cas9技术,采用同源重组的方式,将一段由Tet-On操控并以高斯荧光素酶作为报告基因的血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)过表达序列替换内源性载脂蛋白E(ApoE)的编码区,从而抑制ApoE基因表达,获得转基因小鼠ApoE^A/A。通过荧光定量PCR检测小鼠ApoE基因的表达情况;通过饮用水添加强力霉素(doxycycline,Dox),诱导小鼠体内产生AngⅡ;并通过监测小鼠血液中高斯荧光素酶活性指示小鼠体内AngⅡ表达情况,同时采用无创鼠尾尾套法监测小鼠血压;利用全自动生化分析仪测定小鼠血浆中血脂的含量。结果ApoE^A/A小鼠中ApoE基因为全身缺陷;强力霉素能诱导必小鼠体内持续产生AngⅡ,继而引发小鼠发生高血压;给予强力霉素处理并不影响ApoE^A/A小鼠血脂含量。结论成功构建了一种高脂血症和诱导型高血压的小鼠模型,可应用于高血压、高血脂,特别是合并双因素的相关疾病机制与干预效果的研究。