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RECQL基因沉默对HCC细胞株体外增殖的抑制作用
1
作者
张静静
赵妍妍
+4 位作者
许雅思
黄海琇
朱鲁程
马胜林
张仕蓉
《浙江医学》
CAS
2017年第5期327-331,335,共6页
目的观察RECQL基因沉默表达对人肝细胞癌(human hepatocelullar carcinoma,HCC)细胞株体外增殖的影响,探讨RECQL作为肝癌治疗潜在靶向基因的可能性。方法以BEL7404、SK-HEP-1、Hep3B、SNU-761 HCC细胞为研究对象,采用Western blot和免...
目的观察RECQL基因沉默表达对人肝细胞癌(human hepatocelullar carcinoma,HCC)细胞株体外增殖的影响,探讨RECQL作为肝癌治疗潜在靶向基因的可能性。方法以BEL7404、SK-HEP-1、Hep3B、SNU-761 HCC细胞为研究对象,采用Western blot和免疫组化法观察解旋酶RECQL蛋白的表达情况,通过RNA干扰技术抑制RECQL表达,测定HCC细胞和正常肝细胞(THLE-2细胞)的存活率和死亡率,并采用Western blot法分析凋亡相关蛋白的变化,FACS法检测细胞周期分布。结果RECQL蛋白在BEL7404、SK-HEP-1、Hep3B中为阳性表达,SNU-761中为阴性表达。RECQL-si RNA在阳性表达组中抑制HCC细胞的增殖,引起细胞存活率降低和死亡率增加(均P<0.01),但对阴性表达组和THLE-2细胞存活率和死亡率无影响(均P>0.05)。RECQL-si RNA处理的SK-HEP-1细胞中,剪切型凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved PARP的表达变化不大,而G2/M期细胞的比例明显增加(P<0.05或0.01)。结论 RECQL基因沉默表达可以抑制HCC细胞的增殖,且这种抑制作用依赖于RECQL的高表达,并对正常肝细胞无影响,其可能机制是阻滞细胞G2/M期,可以作为治疗肝癌的潜在靶向基因。
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关键词
RECQL
人肝细胞癌
细胞凋亡
细胞周期
下载PDF
职称材料
细梗香草总皂苷联合5-氟尿嘧啶抗胆管癌作用及其机制研究
被引量:
2
2
作者
汪洋
张筱凤
+4 位作者
汪静
金杭斌
黄海琇
王雨承
杨建锋
《浙江中医药大学学报》
CAS
2018年第12期989-995,1005,共8页
[目的]研究细梗香草总皂苷(Lysimachia capilliposide,LC)单独使用及与5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)联用对胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响,并初步探究其机制。[方法]分别以0~32μg·mL-1的LC和0~1 000μg·mL-1的5-Fu...
[目的]研究细梗香草总皂苷(Lysimachia capilliposide,LC)单独使用及与5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)联用对胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响,并初步探究其机制。[方法]分别以0~32μg·mL-1的LC和0~1 000μg·mL-1的5-Fu培养QBC939细胞48h,以3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑内盐[3-(4,5-diethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-etrazolium inner salt,MTS]法检测细胞增殖抑制率,计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。根据所得IC50,在QBC939细胞中同时加入不同浓度5-Fu和LC,计算联合作用指数(combined index,CI),确定两药联用浓度,并将细胞分为空白对照组、5-Fu单药组、LC单药组和联合用药组。AnnexinⅤ/PI法检测各组细胞凋亡比例和周期分布。Western blot检测天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶-3 (cysteine aspartic acid specific protease-3,caspase-3)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase, PARP)的蛋白表达。[结果]与空白对照组比较,5-Fu和LC均抑制QBC939细胞增殖,并且两药联用有协同作用。5-Fu和LC可显著增加QBC939细胞凋亡比例(P<0.05),且联合用药组凋亡细胞比例高于LC或5-Fu单药组(P<0.01)。5-Fu增加G1期细胞比例,降低G2期细胞比例(P<0.05),而LC对细胞周期无明显影响。5-Fu、LC及两药联用可明显增加caspase-3表达,降低PARP表达(P<0.05,P<0.01)。[结论]LC可抑制胆管癌细胞增殖,与5-Fu有协同作用。LC诱导胆管癌细胞凋亡,但不影响细胞周期,其机制可能与上调caspase-3表达、下调PARP表达有关。
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关键词
胆管癌
细梗香草总皂苷
5-氟尿嘧啶
凋亡
细胞周期
PARP
CASPASE-3
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职称材料
慢病毒介导短发夹RNA特异性沉默黏蛋白3A表达对肝外胆管癌细胞生长增殖能力的影响
3
作者
刘成行
黄海琇
杨建锋
《中华肝胆外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期616-621,共6页
目的探索慢病毒介导短发夹RNA(shRNA)沉默黏蛋白3A(Muc3A)表达对肝外胆管癌QBC939细胞生长和增殖能力的影响。方法设计、合成针对Muc3A基因的shRNA干扰序列,重组慢病毒质粒进行包装产生病毒液,测定其滴度。转染肝外胆管癌QBC939细胞,采...
目的探索慢病毒介导短发夹RNA(shRNA)沉默黏蛋白3A(Muc3A)表达对肝外胆管癌QBC939细胞生长和增殖能力的影响。方法设计、合成针对Muc3A基因的shRNA干扰序列,重组慢病毒质粒进行包装产生病毒液,测定其滴度。转染肝外胆管癌QBC939细胞,采用最佳药物筛选浓度筛选获得稳定阳性细胞株。将肝外胆管癌QBC939细胞分为三组培养:慢病毒介导shRNA转染细胞(转染组)、空病毒转染细胞(阴性对照组)及未转染细胞(空白对照组)。蛋白印记(western blot)检测shRNA对Muc3A基因的沉默效率;MTS法检测细胞生长情况,平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功包装慢病毒,病毒悬液的滴度为1×10^8 TU/ml;病毒液感染EHCCQBC939细胞,Western blot证实shRNA序列定向插入慢病毒载体质粒中;选择3μg/ml嘌呤霉素最佳筛选浓度,获得稳定细胞株;Western blot结果分别显示转染组Muc3A表达明显低于阴性对照组与空白对照组(P<0.05)。MTS结果显示转染组细胞OD490nm值均明显低于阴性对照组与空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);平板克隆形成实验显示转染组平板克隆形成数目明显少于阴性对照组与空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术分析显示转染组细胞周期处于G2/M较多而S期较少,但与阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢病毒介导shRNA转染干扰Muc3A基因表达后可明显抑制肝外胆管癌QBC939细胞的生长增殖和克隆能力,提示Muc3A能促进肝外胆管癌细胞的生长与克隆增殖。
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关键词
胆管肿瘤
细胞增殖
胆管上皮癌
黏蛋白3A
短发夹RNA
慢病毒
原文传递
题名
RECQL基因沉默对HCC细胞株体外增殖的抑制作用
1
作者
张静静
赵妍妍
许雅思
黄海琇
朱鲁程
马胜林
张仕蓉
机构
南京医科大学附属杭州医院、杭州市第一人民医院转化医学研究中心
出处
《浙江医学》
CAS
2017年第5期327-331,335,共6页
基金
国家自然科学基金项目(81602671)
浙江省自然科学基金项目(LQ17H160003)
文摘
目的观察RECQL基因沉默表达对人肝细胞癌(human hepatocelullar carcinoma,HCC)细胞株体外增殖的影响,探讨RECQL作为肝癌治疗潜在靶向基因的可能性。方法以BEL7404、SK-HEP-1、Hep3B、SNU-761 HCC细胞为研究对象,采用Western blot和免疫组化法观察解旋酶RECQL蛋白的表达情况,通过RNA干扰技术抑制RECQL表达,测定HCC细胞和正常肝细胞(THLE-2细胞)的存活率和死亡率,并采用Western blot法分析凋亡相关蛋白的变化,FACS法检测细胞周期分布。结果RECQL蛋白在BEL7404、SK-HEP-1、Hep3B中为阳性表达,SNU-761中为阴性表达。RECQL-si RNA在阳性表达组中抑制HCC细胞的增殖,引起细胞存活率降低和死亡率增加(均P<0.01),但对阴性表达组和THLE-2细胞存活率和死亡率无影响(均P>0.05)。RECQL-si RNA处理的SK-HEP-1细胞中,剪切型凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved PARP的表达变化不大,而G2/M期细胞的比例明显增加(P<0.05或0.01)。结论 RECQL基因沉默表达可以抑制HCC细胞的增殖,且这种抑制作用依赖于RECQL的高表达,并对正常肝细胞无影响,其可能机制是阻滞细胞G2/M期,可以作为治疗肝癌的潜在靶向基因。
关键词
RECQL
人肝细胞癌
细胞凋亡
细胞周期
Keywords
RECQL
Human hepatocellular carcinoma
Cell apoptosis
Cell cycle
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
细梗香草总皂苷联合5-氟尿嘧啶抗胆管癌作用及其机制研究
被引量:
2
2
作者
汪洋
张筱凤
汪静
金杭斌
黄海琇
王雨承
杨建锋
机构
南京医科大学附属杭州医院
杭州市老年病医院
出处
《浙江中医药大学学报》
CAS
2018年第12期989-995,1005,共8页
基金
浙江省中医药科技计划项目(2015ZA129)~~
文摘
[目的]研究细梗香草总皂苷(Lysimachia capilliposide,LC)单独使用及与5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)联用对胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响,并初步探究其机制。[方法]分别以0~32μg·mL-1的LC和0~1 000μg·mL-1的5-Fu培养QBC939细胞48h,以3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑内盐[3-(4,5-diethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-etrazolium inner salt,MTS]法检测细胞增殖抑制率,计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。根据所得IC50,在QBC939细胞中同时加入不同浓度5-Fu和LC,计算联合作用指数(combined index,CI),确定两药联用浓度,并将细胞分为空白对照组、5-Fu单药组、LC单药组和联合用药组。AnnexinⅤ/PI法检测各组细胞凋亡比例和周期分布。Western blot检测天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶-3 (cysteine aspartic acid specific protease-3,caspase-3)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase, PARP)的蛋白表达。[结果]与空白对照组比较,5-Fu和LC均抑制QBC939细胞增殖,并且两药联用有协同作用。5-Fu和LC可显著增加QBC939细胞凋亡比例(P<0.05),且联合用药组凋亡细胞比例高于LC或5-Fu单药组(P<0.01)。5-Fu增加G1期细胞比例,降低G2期细胞比例(P<0.05),而LC对细胞周期无明显影响。5-Fu、LC及两药联用可明显增加caspase-3表达,降低PARP表达(P<0.05,P<0.01)。[结论]LC可抑制胆管癌细胞增殖,与5-Fu有协同作用。LC诱导胆管癌细胞凋亡,但不影响细胞周期,其机制可能与上调caspase-3表达、下调PARP表达有关。
关键词
胆管癌
细梗香草总皂苷
5-氟尿嘧啶
凋亡
细胞周期
PARP
CASPASE-3
Keywords
cholangiocarcinoma
lysimachia capilliposide
5-Fluorouracil
apoptosis
cell cycle
PARP
caspase-3
分类号
R331 [医药卫生—人体生理学]
下载PDF
职称材料
题名
慢病毒介导短发夹RNA特异性沉默黏蛋白3A表达对肝外胆管癌细胞生长增殖能力的影响
3
作者
刘成行
黄海琇
杨建锋
机构
浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院消化内科
浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院转化医学研究中心
江苏省昆山市中医院
出处
《中华肝胆外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期616-621,共6页
基金
浙江省科技项目(2015C33251)
浙江省卫生科技项目(2019ZD017)
杭州市卫生科技重大项目(2017ZD01)
文摘
目的探索慢病毒介导短发夹RNA(shRNA)沉默黏蛋白3A(Muc3A)表达对肝外胆管癌QBC939细胞生长和增殖能力的影响。方法设计、合成针对Muc3A基因的shRNA干扰序列,重组慢病毒质粒进行包装产生病毒液,测定其滴度。转染肝外胆管癌QBC939细胞,采用最佳药物筛选浓度筛选获得稳定阳性细胞株。将肝外胆管癌QBC939细胞分为三组培养:慢病毒介导shRNA转染细胞(转染组)、空病毒转染细胞(阴性对照组)及未转染细胞(空白对照组)。蛋白印记(western blot)检测shRNA对Muc3A基因的沉默效率;MTS法检测细胞生长情况,平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功包装慢病毒,病毒悬液的滴度为1×10^8 TU/ml;病毒液感染EHCCQBC939细胞,Western blot证实shRNA序列定向插入慢病毒载体质粒中;选择3μg/ml嘌呤霉素最佳筛选浓度,获得稳定细胞株;Western blot结果分别显示转染组Muc3A表达明显低于阴性对照组与空白对照组(P<0.05)。MTS结果显示转染组细胞OD490nm值均明显低于阴性对照组与空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);平板克隆形成实验显示转染组平板克隆形成数目明显少于阴性对照组与空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术分析显示转染组细胞周期处于G2/M较多而S期较少,但与阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢病毒介导shRNA转染干扰Muc3A基因表达后可明显抑制肝外胆管癌QBC939细胞的生长增殖和克隆能力,提示Muc3A能促进肝外胆管癌细胞的生长与克隆增殖。
关键词
胆管肿瘤
细胞增殖
胆管上皮癌
黏蛋白3A
短发夹RNA
慢病毒
Keywords
Bile duct neoplasms
Cell proliferation
Cholangiocarcinoma
Muc3A
shRNA
Lentivirus
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
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被引量
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1
RECQL基因沉默对HCC细胞株体外增殖的抑制作用
张静静
赵妍妍
许雅思
黄海琇
朱鲁程
马胜林
张仕蓉
《浙江医学》
CAS
2017
0
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职称材料
2
细梗香草总皂苷联合5-氟尿嘧啶抗胆管癌作用及其机制研究
汪洋
张筱凤
汪静
金杭斌
黄海琇
王雨承
杨建锋
《浙江中医药大学学报》
CAS
2018
2
下载PDF
职称材料
3
慢病毒介导短发夹RNA特异性沉默黏蛋白3A表达对肝外胆管癌细胞生长增殖能力的影响
刘成行
黄海琇
杨建锋
《中华肝胆外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
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