经泪小点泪道内窥镜治疗难治性泪道阻塞性疾病

目的:探讨经泪小点泪道内窥镜治疗难治性泪道阻塞性疾病的疗效,评价其临床应用价值。方法:难治性泪道阻塞患者29例(32眼)于局麻下使用经泪小点泪道内窥镜系统进行泪道检查,并针对阻塞部位进行激光或电钻处理,泪道冲洗通畅后,注入3g/L妥布霉素+1mg/g地塞米松眼膏,术后随访6mo观察疗效。结果:全部患眼泪道均能被有效观察,术中再通率100%,术后随访治愈20眼(62%),好转5眼(16%),无效7眼(22%)。结论:经泪小点泪道内窥镜能对难治性泪道阻塞性疾病进行有效观察,并能进行有效的针对性治疗。

p27Kip1基因shRNA表达质粒的构建鉴定及功能研究

目的构建细胞周期性激酶抑制剂p27Kip1的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对牛角膜内皮细胞增殖能力的影响。方法设计有发夹状结构的3条p27Kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照。转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGenSil-1质粒,构建重组质粒pGenSil-1/p27Kip1-1、pGenSil-1/p27Kip1-2、pGenSil-1/p27Kip1-3、pGenSil-1/HK。转化DH5α菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定。以脂质体法将4个重组质粒分别导入牛角膜内皮细胞。转染后48h以Western blot法检测p27Kip1蛋白水平及MTT法检测各实验组和对照组细胞增殖情况。结果酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功。3个实验组p27Kip1蛋白水平分别下降了66.41%、61.51%、71.32%,shRNA可显著促进牛角膜内皮细胞增殖。结论成功构建了针对p27Kip1的RNA干扰表达载体。

经泪小点泪管内镜操作技巧及治疗泪管阻塞疗效分析

目的探讨经泪小点泪管内镜治疗泪管阻塞的手术方法及疗效。方法121例(142眼)泪管阻塞患者于局部麻醉下使用经泪小点泪管内镜进行泪管检查,对阻塞部位进行激光或微型电钻处理,术后随访6个月观察疗效。结果术中检查成功率及再通率为100%,术后随访治愈114眼(80.28%)。其中上泪管阻塞、鼻泪管阻塞、上泪管并鼻泪管阻塞及慢性泪囊炎治愈率分别为80.36%、84.91%、57.14%及76.92%。结论经泪小点泪管内镜能对泪管阻塞性疾病进行有效观察及针对性治疗。

泪道内窥镜治疗泪道阻塞的初步应用体会

目的探讨泪道内窥镜系统检查治疗泪道阻塞性疾病的方法,评价其临床应用价值。方法47例(51眼)泪道阻塞于局麻下使用泪道内窥镜系统进行泪道检查,针对阻塞部位进行激光或钻孔处理,冲洗通畅后,泪道注入0.3%妥布霉素+0.1%地塞米松眼膏,术后随访观察疗效。结果全部患眼的泪道均能被有效观察,术中再通率100.00%,术后随访治愈率90.20%。结论泪道内窥镜系统能在直视下对泪道阻塞性疾病进行准确观察和针对性治疗,是一种治疗泪道阻塞的较有效方法。

卵磷脂络合碘对CSC激光治疗后黄斑水肿吸收的影响

目的观察卵磷脂络合碘片对中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)激光治疗后黄斑水肿吸收的影响。方法将确诊CSC并行氩激光光凝治疗的患者86例(86眼)分为碘剂组和对照组,给予碘剂组口服卵磷脂络合碘片,分别于1、2、3、4周观察治疗效果。结果光凝治疗后2周碘剂组患者视功能恢复正常为97·7%,对照组为34·9%。碘剂组患者黄斑水肿完全吸收为97·7%,对照组为39·5%。3周、4周时2个组均恢复良好,无统计学差异。结论激光光凝治疗CSC是安全有效的方法,口服碘剂对光凝后视力恢复及黄斑水肿吸收有明显的促进作用。

大鼠晶状体摘出术后LECs转分化观察

目的观察大鼠晶状体摘出术后晶状体上皮细胞（lens epithelial cells，LECs）的形态、分布改变及其转分化的动态过程。方法对50只SD大鼠左眼行晶状体囊外摘出术（extracapsular lens extraction，ECLE）。分别于术后0h、3d、7d、14d及28d对术眼进行裂隙灯检查并处死动物各10只，摘除眼球行光镜及免疫组化检测，Western Blot法检测各时间点后囊膜仅．平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）表达。结果术后0h于前囊下和赤道部的内表面观察到LECs，后囊膜无细胞分布。晶状体后囊膜混浊在术后3d出现，囊膜皱缩，整个晶状体囊袋内出现纺锤形细胞。7d时后囊膜明显混浊，囊袋内见较多纺锤形细胞分布。术后14d时出现明显后囊膜皱缩，见新生晶状体纤维，纺锤形细胞明显减少，后囊膜仍可见细胞。28d可见明显后囊膜增厚，新生晶状体纤维填充囊袋，后囊膜未见细胞。免疫组化检测见术后3d α-SMA阳性表达。Western Blot检测α-SMA于术后0h几乎检测不到，3d表达明显增强，7d达高峰，14d下降，28d明显下降。结论大鼠ECLE术后囊袋内LECs形态及分布呈动态变化，后囊膜α-SMA表达提示ECLE术后3～7d是LECs转分化的关键时期。

改良大鼠后囊膜混浊模型的建立及晶状体上皮细胞的变化

目的:改良法建立大鼠后发性白内障动物模型并观察LEC在PCO过程中的动态变化。方法:SD大鼠50只在连续环形撕囊、水分离后行晶状体囊外摘除术(ECLE),娩核后使用无菌空气恢复前房。分别于术后0,3,7,14及28d对术眼进行裂隙灯检查并处死动物,摘除眼球行光镜观察,免疫组化检测LEC的α-SMA表达。结果:100%术眼后囊膜存在,84%的鼠眼可用于检测。术后0h于前囊下和赤道部的内表面观察到LEC。PCO在术后3d出现,出现囊膜皱缩,整个晶体囊膜出现纺锤形细胞。术后7d时后囊膜明显混浊,见较多纺锤形细胞分布。所有动物于术后14d出现明显后囊膜皱缩,可见新生晶体纤维。术后28d见明显后囊膜增厚,新生晶体纤维填充囊袋,后囊膜未见细胞。LEC形态及分布恢复到术后0h状态。免疫组化检测见术后3d时α-SMA阳性表达。结论:改良法成功建立大鼠PCO模型,LEC在PCO形成中出现形态和分布上的动态变化。其将为在分子水平上探索PCO的发病机制及防治方法提供合适研究载体。

不同光凝接触镜填充液对中央角膜厚度的影响

目的 比较在行氩激光全视网膜光凝治疗中使用不同接触镜填充液对中央角膜厚度的影响 ,以寻找最适用于该治疗的填充液。方法 对 4 6例 (5 2眼 )患者进行氩激光全视网膜光凝治疗 ,每次分别随机使用 0 2 5 %氯霉素、1%羧甲基纤维素及医用透明质酸钠组作为安放全眼底激光角膜接触镜填充液 ,在治疗前及治疗后均用角膜测厚仪测量患者中央角膜厚度。结果 治疗后使用 0 2 5 %氯霉素组中央角膜平均增厚 (31 4± 10 2 ) μm ,1%羧甲基纤维素组中央角膜平均增厚 (10 6± 4 3) μm ,医用透明质酸钠组中央角膜平均增厚 (8 0± 3 5 ) μm。方差分析显示 :氯霉素组与另两组差异有极显著性意义 (P <0 0 1) ,羧甲基纤维素组与透明质酸钠组差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论 1%羧甲基纤维素及医用透明质酸钠作为安放全眼底激光角膜接触镜的填充液对角膜水肿程度的影响明显小于0 2 5 %氯霉素 。

压力对体外培养的牛角膜内皮细胞的影响

目的观察压力对体外培养的牛角膜内皮细胞形态结构及细胞活力的影响。方法对体外培养的牛眼角膜内皮细胞施以2.67kPa、5.33kPa及8.00kPa的压力各6、12、24、36、48h,以不加压组作为对照组。用倒置相差显微镜及电镜观察细胞形态结构,以台盼蓝染色观察比较48h时各组细胞活力的差别,用单因素方差分析比较不同压力下阳性细胞率。结果当作用于细胞的压力为2.67kPa(1kPa=7.5mmHg),作用时间为6、12、24、36、48h时,与对照组比较,细胞形态结构均无明显变化;48h时台盼蓝计数与对照组比较差异无统计学意义(P=0.776)。当压力为5.33kPa,作用时间为24h时,细胞形态结构出现轻度的损伤,在36、48h时加重;48h时台盼蓝计数与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.00)。当压力为8.00kPa时,6h时即出现明显细胞形态结构损害,随着压力和作用时间的进一步增加,细胞的损伤程度也进一步加重;48h时台盼蓝计数与对照组比较差异有统计学意义(P=0.000)。结论牛角膜内皮细胞在加压48h时只能承受2.67kPa的压力,当压力为5.33kPa及8.00kPa,施压48h时,将造成细胞损伤及细胞活力下降。

纯甘油保存人羊膜治疗翼状胬肉的临床研究

目的观察纯甘油保存的人羊膜用于原发性及复发性翼状胬肉治疗的临床疗效,并与细胞培养液(DMEM)加二甲亚砜(DMSO)保存的人羊膜进行比较,探讨简便实用的羊膜保存方法。方法对82例(90眼)翼状胬肉患者行翼状胬肉切除术联合羊膜移植术,随机对61例(65眼)联合使用纯甘油保存的羊膜(甘油组),包括45例(48眼)初发性翼状胬肉及16例(17眼)复发性翼状胬肉。21例(25眼)联合用细胞培养液加二甲亚砜保存的羊膜(DMEM+DMSO组),包括15例(18眼)初发性翼状胬肉及6例(7眼)复发性翼状胬肉。术后定期随访观察。结果术后随访7～29月,平均(16.2±6.3)月。共8眼复发,其中甘油组6眼复发,包括初发性翼状胬肉3眼和复发性翼状胬肉3眼。DMEM+DMSO组2眼复发,均为初发性翼状胬肉。2组复发率经χ2检验(χ2=0.061,P>0.05)差异无显著性,2组初发性翼状胬肉复发率(χ2=0.215,P>0.05)及复发性翼状胬肉复发率(Fisher’stest,P=0.333)均无统计学差异。结论纯甘油羊膜移植治疗初发性翼状胬肉及复发性翼状胬肉均取得满意疗效。纯甘油保存羊膜是一种安全、简便、有效的羊膜保存方法。

泪道探通配合插管留置术的疗效分析

目的:观察泪道探通配合插管留置术治疗泪道阻塞的手术疗效,分析影响疗效的因素。方法:采用泪道探通配合插管留置术治疗60例(90眼)泪道阻塞患者,术后3mo拔管,随访6mo,将阻塞部位不同和既往不同治疗史的疗效分别进行对比分析。结果:阻塞部位在泪小管,泪总管和鼻泪管的成功率分别为85.7%,75.8%,53.5%。经χ2检验,阻塞部位在泪小管与在泪总管的手术疗效相同(P>0.05),阻塞部位在鼻泪管的手术疗效均低于阻塞部位在泪小管或在泪总管的(P<0.05)。既往做过泪道激光手术疗效均低于未做过手术或曾做过泪道探通配合插管术(P<0.05)。曾做过泪道探通配合插管术再次手术不影响疗效(P>0.05)。结论:泪道探通配合插管留置术治疗泪道阻塞经济,简单,方便,治疗泪小管与泪总管阻塞效果好,手术失败再次手术仍有价值,但不适合治疗泪道激光手术失败后的病例。

KIF21A基因p.Arg954Trp突变引起先天性动眼神经麻痹

目的在先天性动眼神经麻痹家系中定位相关致病基因并克隆该基因。方法对1个先天性动眼神经麻痹家系(3代共16人)通过血液基因组提取和微卫星连锁分析寻找基因突变所在区域,计算有利连锁优势比的对数值(log-arithm of the odds of linkage,LOD),并对该区域内的可能致病基因进行突变筛选和突变验证。结果微卫星标记连锁分析发现位于12p11-12p12区域的D12S85和D12S345区域显示与该家系疾病紧密连锁,LOD值为2.4。对家系KIF21A基因全部外显子进行的突变检测分析显示21号外显子存在c.2680C>T(p.Arg954Trp)的碱基改变。结论 KIF21A基因c.2680C>T(p.Arg954Trp)突变是导致该先天性动眼神经麻痹的致病因素。

相干光断层扫描动态分析中心性浆液性脉络膜视网膜病变激光治疗后恢复情况

目的应用相干光断层扫描(OCT)动态观察氩激光治疗中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)后黄斑水肿吸收情况,探索其在CSC患者预后追踪中的优势。方法对经荧光素眼底血管造影(FFA)确诊的42例(42只眼)CSC患者进行氩激光光凝治疗,分别于治疗前、治疗后3d,1、2、4、6周行OCT及FFA检查。结果OCT适用面广,可清楚的发现神经上皮及色素上皮脱离情况,OCT动态随访观察显示激光光凝治疗3d时黄斑水肿无明显吸收,1周后,黄斑水肿开始明显吸收,2例患者(4.76%)水肿完全吸收;2周后5例患者(11.90%)水肿完全吸收;4周后17例患者(40.48%)水肿完全吸收;6周后34例(81.95%)水肿完全吸收。结论激光光凝治疗能缩短CSC病程,OCT为非侵入性,观察效果好,能定量分析黄斑水肿程度,比FFA更加直观、准确。更重要的是,OCT能对预后过程进行动态、精确、灵敏的追踪。

丙戊酸钠对体外培养的人晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对体外培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)增生和细胞周期的影响。方法采用不同浓度的VPA(0.5mmol·L-1、1mmol·L-1、2mmol·L-1、4mmol·L-1)作用于HLECs,四甲基偶氮唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测在不同时间点(24h、48h、72h)VPA对细胞增生的抑制作用;流式细胞仪测定VPA(1mmol·L-1、2mmol·L-1)作用于HLECs48h后细胞周期分布情况;Western blot测定在VPA(1mmol·L-1、2mmol·L-1)作用于HLECs48h后,细胞周期依赖性激酶抑制因子(p21)在蛋白质水平表达量的改变。结果MTT检测显示VPA浓度≥0.5mmol·L-1对体外HLECs增生的抑制作用呈时间和剂量依赖性。VPA作用48h后,各药物浓度组(0.5mmol·L-1、1mmol·L-1、2mmol·L-1、4mmol·L-1)细胞生长抑制率分别为11.05%、21.58%、26.67%和38.25%,流式细胞仪检测显示VPA可阻滞HLECs由G0/G1期向S期转换,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。经2mmol·L-1VPA作用48h,G0/G1期及S期细胞比例分别为(85.40±3.90)%和(7.35±1.47)%,与阴性对照组[(53.14±1.71)%和(35.31±1.14)%]比较差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测发现VPA可促进p21蛋白质水平的表达。VPA处理48h后,各组平均灰度比值分别为0.582±0.082(1mmol·L-1)和0.914±0.113(2mmol·L-1),与阴性对照组(0.303±0.029)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论VPA可以通过促进p21表达,使HLECs阻滞于G0/G1期,最终抑制HLECs增生。

转化生长因子β_2对牛角膜内皮细胞增生的影响

目的体外培养牛角膜内皮细胞(CECs),观察不同质量浓度的外源性转化生长因子β2(TGF-β2)对牛CECs的增生抑制作用。方法0.1、1、10、100μg/L的TGF-β2作用于体外培养的牛CECs,于24、48、72h观察不同质量浓度的TGF-β2对牛CECs的影响。采用CCK-8检测法测定各孔吸光度(A值),采用流式细胞检测仪对各组细胞周期进行检测。结果0.1、1、10μg/L的TGF-β2作用后各时间点,均能使牛CECs的吸光度发生改变。在同一时间点,0.1μg/L、1μg/L的TGF-β2抑制效果最为显著。各质量浓度的TGF-β2对牛CECs作用48h,其吸光度改变最明显。48h时,0.1μg/L、1μg/L的TGF-β2对牛CECs的增生抑制作用明显。各质量浓度组作用48h后,0.1μg/L、1μg/L组牛CECs的G0周期细胞所占比例与阴性对照组比较,差异均有统计学意义,而10μg/L、100μg/L组的牛CECs的G0期细胞百分比与阴性对照组比较,差异均无统计学意义。结论0.1μg/L、1μg/L的TGF-β2作用24、48、72h对牛CECs均具有明显的增生抑制作用。

眼部蠕形螨感染与睑板腺功能障碍的相关性分析

目的通过观察睑板腺功能障碍(meibomian gland dysfunction,MGD)患者的睑板腺形态和功能、眼表情况以及眼部蠕形螨感染情况,分析眼部蠕形螨感染与MGD的相关性。方法选取2017年9月至11月就诊于华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科门诊的患者83例,分为MGD组和非MGD组。依次行眼表疾病指数(ocular surface diseases index,OSDI)量表填写、泪膜脂质层厚度(tear film lipid layer thickness,LLT)测量、睑板腺缺失率检测、泪膜破裂时间(break-up time,BUT)检查、角膜荧光素染色(fluorescein staining,FL)、泪液分泌试验(SchirmerⅠtest,SⅠT)、睑缘及睑板腺开口状态的观察、活体共聚焦显微镜(in vivo confocal microscopy,IVCM)观察眼部蠕形螨感染情况。结果 MGD组BUT低于非MGD组,FL评分、睑缘及睑板腺评分、睑板腺缺失率均高于非MGD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。MGD组蠕形螨检出阳性率为89.32%,高于非MGD组的62.90%,差异有统计学意义(χ2=16.510,P<0.01)。MGD组蠕形螨感染阳性患者中有28.26%(26眼)为轻度感染,明显低于非MGD组的43.59%(17眼);MGD组有44.56%(41眼)为中度感染,稍低于非MGD组的53.85%(21眼);MGD组有19.57%(18眼)为重度感染,明显高于非MGD组的2.56%(1眼);MGD组有7.61%(7眼)为极重度感染,而非MGD组无极重度感染眼。蠕形螨感染数量与FL评分呈正相关(rs=0.299,P=0.004),与BUT呈负相关(rs=-0.281,P=0.007)。结论中重度特别是极重度蠕形螨感染可能是造成MGD的重要因素,且眼部损伤程度与蠕形螨的感染数量密切相关。

实测与理论瞳孔直径下全角膜与前角膜总高阶像差的比较

目的:观察不同年龄段人群在4.0mm与实测瞳孔直径下全角膜和前角膜总高阶像差(HOA)的差异。方法:横断面研究。检测2019-03-31/05-31于我院就诊的100例受试者在2.0~7.0mm瞳孔直径下全角膜和前角膜总HOA及拟明环境下瞳孔直径,通过数学拟合曲线计算出该直径下全角膜和前角膜的总HOA值(实测HOA),分别比较实测与4.0mm瞳孔直径下HOA(理论HOA)全角膜与前角膜HOA之间的差异。结果:实测瞳孔直径与年龄呈负相关(r=-0.587,P<0.001)。全角膜和前角膜实测HOA与年龄均呈负相关(r=-0.191,P=0.002;r=-0.181,P=0.004),全角膜理论HOA则与年龄呈正相关(r=0.282,P<0.001)。在40~49、60~69、70~79岁组,全角膜和前角膜实测HOA均小于对应理论HOA(P<0.05)。同样在以上年龄段,实测全角膜HOA显著高于实测前角膜HOA(P<0.05);在20~29岁理论全角膜HOA显著低于理论前角膜HOA(P=0.006),在60~69岁组,结果则相反(P=0.039)。老年人群(60~69,70~79岁组)中实测全角膜HOA≥0.3μm占比显著低于理论全角膜HOA(χ^2=4.300,P=0.038)。结论:老年人群实测全角膜和前角膜HOA均显著低于对应理论HOA,这与老年人群实际平均瞳孔直径偏小有关。所测前角膜HOA不能完全代替全角膜HOA。以实测全角膜HOA为依据将有更多老年患者在选择植入多焦点人工晶状体时符合入选条件。

活体共聚焦显微镜对睑板腺功能障碍患者眼部蠕形螨的定量检测

目的运用活体共聚焦显微镜(IVCM)定量检测睑板腺功能障碍(MGD)患者睫毛根部毛囊内的蠕形螨。方法选取2017年9~11月就诊于华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科门诊的连续性MGD患者52例(103只眼)为观察组,年龄与性别相匹配的非MGD患者31例(62只眼)为对照组。所有入组患者均进行裂隙灯检查、IVCM观察睫毛根部毛囊内蠕形螨感染情况,并记录毛囊内蠕形螨数量。运用SPSS23.0软件对两组间蠕形螨的数量进行独立样本t检验分析。结果MGD组蠕形螨阳性率为89.32%,对照组蠕形螨阳性率为62.90%。两组蠕形螨感染阳性率差异有明显统计学意义(P<0.001)。MGD组平均每个眼睑感染的蠕形螨数量(7.28±3.42)只显著高于对照组(4.49±2.43)只,差异有统计学意义(P<0.001)。MGD组平均每个毛囊感染的蠕形螨数量(0.81±0.38)只也显著高于对照组(0.50±0.27)只,差异有统计学意义(P<0.001)。结论IVCM可以有效的对睑板腺功能障碍患者睫毛根部毛囊内的蠕形螨进行无创、定量检测。