高脂饮食诱导的2型糖尿病模型小鼠的生化及病理分析

目的分析高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）注射方法制备的2型糖尿病（T2DM）模型小鼠的生化及病理改变。方法将C57BL/6J实验小鼠随机分成3组：正常饮食组（NC组）,高脂饮食组（HC组）和高脂饮食加STZ组（HC＋STZ组）。HC＋STZ组高脂高糖饲料饲养1个月后,按40 mg/kg剂量腹腔注射STZ,24 h后再注射1次;HC组高脂高糖饲养,NC组一直用普通饲料饲养,两组注射等量的柠檬酸缓冲液作为对照。注射STZ后每周测定空腹血糖,持续4周;1个月后进行口服葡萄糖试验（OGTT）;然后处死小鼠,对血浆进行相关的生化检测,免疫组化检测胰岛形态结构,病理分析肝脏,肾脏的结构形态情况。结果 （1）注射STZ 1周后,有75%的小鼠空腹血糖超过阈值（13.89 mmol/L）;2周后除1只小鼠死亡外,其余小鼠空腹血糖均超过阈值,造模成功率为91.3%;HC组空腹血糖比NC组略有升高,但尚在正常值范围内;（2）高脂饮食的HC＋STZ组和HC组小鼠体质量均显著高于NC组（P〈0.01）,STZ注射后体质量增加不明显;（3）OGTT结果显示,HC＋STZ组口服葡萄糖后0.5~2 h的血糖都显著高于NC组和HC组（P〈0.01）;HC组0.5~2 h的血糖也高于NC组,但只有1.5 h血糖有显著差异;HC＋STZ组AUC（曲线下面积）显著高于NC组或HC组（P〈0.01）;HC组AUC略高于NC组（P〈0.05）;（4）生化检测显示,HC＋STZ组血浆中的肌酐（CR）含量显著高于NC组（P〈0.01）和HC组（P〈0.05）;（5）胰岛的免疫组化染色显示,HC组胰岛结构完整,细胞排列规整,胰岛素的分泌较NC组减少;HC＋STZ组胰岛萎缩,细胞排列紊乱,可见许多空泡状和纤维化结构,胰岛素的分泌明显减少。病理检测显示肝脏有轻度的脂肪肝,肾脏的形态结构未见明显改变。结论高脂饮食结合低剂量STZ多次注射制备的T2DM模型小鼠与人类T2DM有非常相似的病理结构和生化改变,伴有脂肪肝等并发症。

口服人α干扰素转化双歧杆菌促进小鼠淋巴细胞的增殖和成熟

目的探讨人α干扰素(IFN-α)基因转化双歧杆菌口服后对小鼠免疫功能的调节作用。方法构建含人IFN-α基因的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体p BADX-h IFNα2b,电转化获得IFN-α基因转化双歧杆菌,收集L-阿拉伯糖诱导h IFN-α2b表达后的菌体制备成活菌悬液,灌胃Balb/C小鼠。实验组(IFN)小鼠用0.2%L-阿拉伯糖诱导表达后的h IFN-α2b转化双歧杆菌处理,每只按0.1 ml 1010/ml活菌灌胃;阴性对照组(NC)用等量等体积空载体p BADX转化双歧杆菌活菌灌胃;空白对照组(BC)用等体积生理盐水灌胃。隔天灌胃1次,连续处理2周。流式细胞术检测小鼠胸腺、脾脏和血液中淋巴细胞亚群和比例,流式试剂盒检测IFN-γ、IL-4等免疫因子的含量。结果与NS组和BC组相比,IFN组小鼠胸腺CD3+CD8+、CD4+CD8+细胞的比例显著升高(P<0.01);脾脏CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD4+CD8+细胞的比例均显著升高(P<0.01);血液中只有CD3+CD8+细胞的比例显著升高(P<0.01)。血液中IFN组IFN-γ的含量比BC组和NS组显著升高(P<0.01);此外,NS组IFN-γ的含量比BC组显著升高(P<0.05);3组小鼠中血液h IFN-α2b和IL-4的浓度无显著性差异(P>0.05)。结论口服h IFN-α转化的双歧杆菌促进小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞增殖和成熟,增高血液Th1类细胞因子水平。

一种致心律失常性右心室心肌病PKP2基因检测片段分析方法的建立

目的建立一种人类致心律失常性右心室心肌病PKP2突变基因检测方法,为该遗传性基因疾病的临床诊断提供分子诊断依据。方法通过构建一种多重荧光复合扩增结合毛细管片段分析的方法对人类致心律失常性右心室心肌病的两个中国人群高突变基因位点Q211X和N852fsX930进行分子检测。结果构建一种同时检测两种突变基因及直观分析分型的基因分子诊断方法。结论运用多重荧光扩增结合片段分析方法,可在基因分子水平上,通过本实验室构建的分析方法,分析分型情况,从而直观判断被测者基因突变类型,为其该领域临床诊断提供参考。

遗传果糖不耐受症的检测方法建立

目的对罕见的人遗传性果糖不耐受症进行常规方法建立,为日后临床检验提供方法依据。方法运用基因合成的办法合成带有突变的基因片段,用诊断性PCR产物直接测序分析其基因组上的A149P,A174D和N334K的3个主要的基因突变位点。结果通过NCBI上的基因序列,合成出相应的突变基因片段为阳性对照,后连接到18T载体,挑菌并通过测序结果显示,确定其A149P、A174D序列正确。结论运用PCR结合DNA测序的分析方法,可在分子遗传水平上,从基因上直接判断是否存在患病的可能,如结合临床诊断,那将会大大提高该罕见病的流行调查效率。

新型遗传标记DIP-STR多重复合扩增体系的构建

目的建立一种同时检测人常染色体插入缺失多态性(Deletion/Insertion Polymorphisms,DIP)位点和短串联重复序列多态性(Short Tandem Repeat,STR)基因座的多重荧光标记复合扩增体系,为不均衡混合样本DNA检测提供有效的辅助方法。方法在多色荧光标记复合扩增和毛细管电泳技术的基础上,利用DIP和STR两种遗传标记串联组合成新型遗传标记DIP-STR,构建荧光标记复合扩增体系同步检测分析样本的8个DIP-STR基因座。结果建立了一种同时检测8个DIP-STR基因座分型的检测方法。结论本研究通过设计针对DIP位点插入或缺失的特异性引物,在现有法医物证常规检验设备和方法的基础上,可对现场物证中不均衡混合样本进行分型,为现场案件混合DNA检测提供有效辅助方法。

乙醇含量检测技术在司法鉴定中的应用研究

近几年,在交通事故案件中酒后驾驶的数量较多,酒后驾驶是导致交通事故发生的重要原因之一。酒驾认定需要看血液中酒精含量是否达到酒驾的认定标准,这是交通执法的重点和难点之一。乙醇含量鉴定方式按检材类型可分为四种,其在司法鉴定中也有相应法规要求。当前,随着科学技术的发展,出现了各种新的技术方法,为乙醇含量鉴定提供了新的可靠途径。

犬STR多态性基因座的检测鉴定

构建一套含有4个犬种多重扩增体系对在犬种的亲权鉴定及个体识别上应用;方法:通过自行建立的犬的STR多态性基因座多重扩增体系进行扩增应用,运用第一代毛细管测序仪对其产物进行检测;结果:通过鉴定两只犬样,该4个犬的STR基因座荧光混合扩增体系中各个基因座扩增平衡,出峰稳定。结论:本体系中4个犬种多重扩增体系能应用于犬类的亲权鉴定和个体识别,为犬类识别提供了一个DNA检验方案。