mGM-CSF-GnRH3与mGM-CSF-GRP6融合蛋白体外抗肿瘤作用及生物信息学预测

目的:制备鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse granulocyte-macrophage colony stimulating factor,m GM-CSF)与促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,Gn RH)的融合蛋白m GM-CSF-Gn RH3(m GGn)和m GM-CSF与胃泌素释放肽(gastrin-releasing peptide,GRP)的融合蛋白m GM-CSF-GRP6(m G6),探讨这两种融合蛋白在体外对黑色素瘤B16F10细胞的抑制效果,并对其等电点、相对分子质量、疏水性、稳定性、亚细胞定位、信号肽、空间结构、潜在抗原表位等进行初步预测。方法:m GGn与m G6融合蛋白制备成功后,通过显微观察、划痕实验、CCK-8法、流式细胞术分别检测不同浓度蛋白对B16F10细胞形态、细胞迁移、细胞增殖、细胞周期的影响,利用蛋白质在线分析系统EXPASY、GOR4、SWISS MODEL对重组融合蛋白进行基本属性、二三级结构分析预测,运用IEDB和ABCpred软件综合预测其B细胞抗原表位,采用SYFPEITHI、Bl MAS和Net CTL软件综合预测其CTL表位,利用Net MHCIIpan 3.1 Server和IEDB软件综合预测其Th表位。结果:m GGn和m G6融合蛋白均抑制肿瘤细胞的增殖和迁移;m GGn能使B16F10细胞周期阻滞于G1期,m G6能使B16F10细胞周期阻滞于S期,不能进入G2期,从而抑制瘤细胞的增殖。m GGn和m G6结构丰富,含有较多潜在的B细胞、CTL和Th表位。结论:m GGn与m G6融合蛋白在体外对黑色素瘤B16F10细胞具有抑制作用,其生物信息学预测为进一步研究两种融合蛋白的生物学功能和免疫活性奠定了基础。