复方穿心莲片HPLC含量测定方法研究

目的:建立复方穿心莲片中穿心莲药材的含量测定方法及含量限度,更好地控制药品质量。方法:采用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(55∶45)为流动相;检测波长分别为225 nm和254 nm,测定穿心莲内酯含量和穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的总量。结果:经方法学考察,该方法具有较好的专属性、准确性、重现性和可行性。穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯分别在进样量为0.0506~4.0479μg范围内和0.1007~10.0692μg范围内与峰面积有良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为101.43%(RSD为2.33%)和97.12%(RSD为1.53%);经40批市售样品检测结果分析,本品含量限度除应制定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量外,亦需规定穿心莲内酯的限度。结论:本方法稳定可控,含量限定合理,能较好地控制复方穿心莲片的质量。

复方穿心莲片HPLC指纹图谱研究

目的:建立复方穿心莲片指纹图谱研究方法,为复方穿心莲片的质量标准提出修订建议。方法:采用Thermoscientific Syncronis aQ C_(18)(4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱;以270 nm为检测波长,柱温为30℃,流速为1.0 mL·min^(-1),建立复方穿心莲片指纹图谱,利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”对市售65批次复方穿心莲片进行相似度评价。结果:建立的复方穿心莲片指纹图谱共确定6个共有峰,65个批次相似度在0.449~0.994之间且差异较大,平均值为0.927,考虑到药材的来源及大生产带来的影响,认为供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度应不得低于0.90较为合理。结论:本方法稳定可控,可用于复方穿心莲片的质量控制。

咳特灵片HPLC指纹图谱研究

目的:建立咳特灵片的HPLC指纹图谱研究方法,为咳特灵片的质量标准提出修订建议。方法:采用Kromasil C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.05%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min^(-1),柱温35℃,检测波长270 nm,建立咳特灵片指纹图谱。以异牡荆苷为参照峰,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012A版)对市售55批咳特灵片进行相似度评价。结果:建立的咳特灵片指纹图谱共确定了11个共有峰,通过对照品指认了9个特征峰化学成分,55批次样品相似度在0.837~0.998之间,平均值为0.984,考虑到药材的来源及大生产带来的影响,认为供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度应不得低于0.90较为合理。结论:建立了咳特灵片的HPLC指纹图谱,该法简便、准确、重现性好,可用于咳特灵片的质量控制。

不同干燥方法下的穿心莲质量稳定性研究

目的比较不同干燥方法对穿心莲质量的影响,优选穿心莲最佳的干燥方法。同时考察穿心莲在长期试验与加速试验下质量的变化情况,为药材的贮存有效期的制定提供有效的参考。方法采用不同方法对新鲜采收的穿心莲进行干燥处理,测定各样品中穿心莲外观质量与内在质量,比较其差异;将样品在接近实际贮存条件下与在加速试验温度(40±2)℃,相对湿度75%±5%条件下贮藏,观察测试样品的外观质量和内在质量变化,根据考察结果,确定样品的有效期。结果采用50℃烘干法干燥的质量最好,其次为晒干、80℃烘干法,阴凉晾干的质量最低,而在长期试验与加速试验下,穿心莲的外观质量和内在质量较稳定,数据显示变化很小。结论综合实际生产情况,从成本、成分含量和实用性综合分析,可采用50℃烘干法代替自然晒干。另外根据稳定性试验结果,建议药材可在常温条件下储存6个月内使用。

一测多评分析方法下柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d含量测定研究

目的:用一测多评法对柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的含量进行测定研究。方法:采取一测多评分析方法,以柴胡皂苷a(SSa)做对照样品,并以此建立起药材中此成分与柴胡皂苷c(SSc)、d(SSd)的相对校正因子,由此计算出柴胡药材中柴胡皂苷c、d的含量,除此之外,采取外标法测定该药材中三种成分的绝对含量,通过统计学检验的方法对一测多评法的测量结果进行比较,并由此评价一测多评法测量柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d含量的科学性和准确性。结果:在一定范围内,柴胡药材中柴胡皂苷a与柴胡皂苷c、d的相对校正因子分别为0.747和0.955,且实验条件的改变对结果影响较小(RSD=0.75%,0.58%);经检验,外标法与一测多评法的测量结果差异并无统计学意义(P>0.05),即一测多评法所得到的校正因子符合真实情况。结论:用一测多评分析方法测定柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的含量所得的结果真实可信,为柴胡药材多指标质量控制及评价提供了科学依据。

穿心莲药渣有机肥在穿心莲种植中的应用研究

目的确定穿心莲药渣有机肥的制作工艺,并在规范化的基地进行应用技术的研究。方法穿心莲药渣采用堆卧进行发酵,与市售有机肥料,不使用有机肥在田间应用进行对比。结果使用穿心莲药渣有机肥可改善土壤酸化和板结问题,提高土壤肥力,并有助于穿心莲根系生长,增强生长能力;使用市售有机肥次之;不使用有机肥最差。结论穿心莲药渣有机肥能明显提高穿心莲种植的亩产量、根系生长、植株高度、茎叶比及穿心莲药材的浸出物和含量等质量指标。

不同产地柘木药材的重金属及有害元素的研究

目的:对比分析不同产地柘木药材的重金属及有害元素的水平。方法:参照中国药典(2015版)的检测方法,对不同产地的柘木药材进行铅、镉、砷、铜、汞、铬6个元素的检测。结果:江西、福建样品铅含量和铬含量超出限度,福建样品超标较为严重。结论:为确保患者用药安全,建议增加中药材的重金属及有害元素的限度指标,推动中药材的规范化种植。

肉桂油的化学成分分析及风险性研究

目的分析不同厂家肉桂油质量差异,并进行质量风险评估研究。方法分别对市售的不同厂家的肉桂油、自制肉桂油与肉桂油标准对照品,运用GC、GC-MS方法对其含量及化学成分进行分析,对比分析差异性。结果桂皮醛含量在75.12%~97.90%之间;各厂家肉桂油中所含化学成分种类差异较大,检出可能成分80种,其中反式桂皮醛、3-甲基-苯并呋喃酮为各厂家肉桂油的主要共有成分。结论市售的肉桂油在有效成分含量及化学成分组成上存在较大差异,质量可控性较差。

大青转录组测序及生物信息学分析

【目的】利用高通量测序技术获得大青的转录组信息特征。【方法】通过高通量测序平台Illumina HiSeq;2500对大青进行转录组测序,采用Trinity软件de novo组装获得Unigene,并基于序列同源性对Unigene进行功能注释,得到大青转录组的遗传信息。【结果】测序数据经过质控后共获得26 394 223个高质量的Reads,通过de novo组装获得100 191个Unigene,N50长度为1 055 bp,平均长度724.4 bp。其中59 690个(59.58%)Unigene在NR、SwissProt、KOG、GO、KEGG数据库中均得到注释。其中KEGG数据库注释到38 260个Unigene,涉及136条代谢通路。在大青转录组中共鉴定到407个Unigene参与萜类化合物的生物合成,165个Unigene涉及类黄酮生物合成,29个Unigene参与黄酮和黄酮醇生物合成,37个Unigene参与异黄酮生物合成,同时,还鉴定到210类转录因子。MISA分析发现6 680个Unigene包含8 640个简单重复序列。【结论】利用高通量测序技术和生物信息分析获得了大青的转录组信息特征,这些数据可为后期开展功能基因鉴定、解析黄酮类化合物次生代谢途径及其调控机制奠定研究基础。

复方风湿宁注射液质量稳定性研究

目的研究复方风湿宁注射液的质量稳定性。方法本研究通过在特殊条件(-35℃;25±2℃,相对湿度60±5%;40℃±2℃,相对湿度75%±5%;60℃±2℃,相对湿度75%±5%)及常温条件下放置三批复方风湿宁注射液,按计划取样进行全检,项目包括:性状、p H、含量测定等。结果在上述四种贮存条件下,各项考察内容均符合规定。结论结果表明复方风湿宁注射液在高温、高湿或低温等条件下贮存,质量稳定。

罗浮山百草油体外抗腺病毒研究

目的:研究罗浮山百草油(LHO)体外抗腺病毒感染的作用。方法:采用细胞病变CPE法及噻唑蓝(MTT)法检测LHO对于Hep-2细胞的安全剂量,同法检测腺病毒感染及LHO给药前后对腺病毒体外感染的抑制作用。结果:MTT法测得LHO对Hep-2细胞的半数细胞毒性浓度(CC_(50))为92.41μg·ml^(-1);腺病毒感染Hep-2细胞后7 d,细胞产生明显病变,LHO给药后能够明显抑制腺病毒感染引起的细胞病变;MTT法测得LHO对腺病毒半数抑制率(EC_(50))为55.18μg·ml^(-1),选择指数(SI)为1.67。结论:LHO可以抑制腺病毒的体外感染引起的细胞活性降低及细胞病变。

HPLC法同时测定小叶榕中4种成分

目的建立HPLC法同时测定小叶榕Ficus miconcinna MiqLf.肉桂酸、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷的含量。方法采用UPLC⁃ESI⁃Orbitrap⁃MS对其主要成分进行鉴定分析;小叶榕甲醇溶液的分析采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相甲醇⁃0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长340 nm;柱温35℃。结果小叶榕的主要成分有10种。4种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9990);平均加样回收率为97.6%~99.9%,RSD为1.60%~1.94%。结论小叶榕主要含有黄酮类化合物。该方法简单,准确,重复性好,可用于小叶榕药材的质量控制。

金钱白花蛇的考证

金钱白花蛇是中医临床应用的贵细动物类药材,现代文献一般认为其始载于民国时期(1936年)出版的广东地方炮制专书《饮片新参》。该文通过查阅历代典籍、地方志,并结合历版《中国药典》、各地炮制规范及现代科学研究报道,对金钱白花蛇的名称、地理分布、形态特征、生态习性、毒性及药用部位等进行系统的考证,结果表明光绪二十年(1894年)已有金钱白花蛇的药用记载,民国十九年(1930年)更将其用于安脑丸组方中。其基原动物银环蛇在明代正德年间(1521年)始有记载,多称为簸箕甲。其形态特征、生态习性、毒性古今记载一致,地理分布与现代动物志等文献记载基本相似。应用幼蛇干燥体作为药用部位,并无本草及现代科学明确依据。事实上,关于幼蛇与成蛇的药效物质基础、药理药效及临床应用是否存在显著差异,尚无定论,有待进一步深入研究。该考证结果厘清了金钱白花蛇的药用历史及现状,由此建议开展银环蛇幼蛇及成蛇的系统比较研究,为金钱白花蛇药用部位的修订提供科学依据。

紫外分光光度法测定注射剂溶血的方法研究

目的建立一种紫外分光光度法检测注射剂溶血的方法。方法通过对多种注射剂的溶血值测定,比较肉眼观察法与紫外分光光度法的检测效果。结果肉眼观察法可检测到溶血率为5%及以上的样品,而紫外分光光度法可直接准确地判定溶血的程度。结论紫外分光光度法可替代肉眼观察法,准确地判定注射剂的溶血。

复方风湿宁注射液与低硼硅玻璃安瓿的相容性研究

目的对复方风湿宁注射液与低硼硅玻璃安瓿的相容性进行具体的研究和分析。方法在研究中采用加速试验对不同厂家生产出来的低硼硅玻璃安瓿与复方风湿宁注射液的相容性进行分析。结果 3个不同厂家生产的安瓿,相容性试验情况接近,无明显差异。结论结果表明不同厂家生产出来的低硼硅玻璃安瓿都可以保证复方风湿宁注射液的质量及有效性。

罗浮山百草油大鼠雾化吸入毒性研究

目的观察罗浮山百草油(LHO)单次雾化吸入可能引起的毒性反应。方法选用SD大鼠,通过压缩空气雾化器将LHO雾化后吸入给药,溶媒对照组雾化给予茶油;单次给药后观察动物体质量和摄食量,并进行大体解剖观察。结果LHO高剂量可致动物出现竖毛或打喷嚏或自主活动减少或间歇性颤抖或闭眼等现象,个别动物出现精神萎靡,呼吸减慢/困难、加深等症状,但症状在停药后可恢复;动物体质量、摄食、大体解剖观察和组织病理学检查未见明显异常。结论LHO对大鼠雾化吸入单次给药的最大耐受量(M TD)>1280 mg·kg^(-1)(以水杨酸甲酯计),相当于临床人拟用剂量(0.5 mL)的108.8倍。

小容量注射剂亮蓝溶液检漏法灵敏度与风险性研究

目的研究小容量注射剂亮蓝溶液检漏法灵敏度与风险性,掌握风险程度,寻找风险降低的方式,保证产品质量。方法对亮蓝溶液检漏法的肉眼识别浓度和分光光度法检测灵敏度进行测定,并对不同颜色的小容量注射液进行灵敏度测定,确定质量风险。结果亮蓝溶液肉眼可识别的浓度为0.03×10^(-6)g/g,在(629±2)nm有最大吸收,分光光度法检测的灵敏度为0.01×10^(-6)g/g;无色注射液肉眼可识别浓度为0.15~0.25×10^(-6)g/g,分光光度法检测的灵敏度为0.015×10^(-6)g/g;有色注射液肉眼可识别的浓度为0.25~2.5×10^(-6)g/g,分光光度法检测的灵敏度为0.015×10^(-6)g/g。结论小容量注射液采用亮蓝溶液进行检漏存在质量风险,可对不足之处进行适当补救,提高不良品的剔除率。

罗浮山百草油小鼠灌胃给药急性毒性研究

目的 观察罗浮山百草油(LHO)单次灌胃给药可能引起的毒性反应。方法 选用KM小鼠,将LHO使用茶油稀释后(3.4~20.0 mL·kg^(-1))灌胃给药,溶媒对照组灌胃给予茶油;单次给药后观察动物临床症状,行为变化、死亡情况,并进行大体解剖观察。结果 LHO给药后出现不同程度的活动增加、步态不稳、呼吸困难、阵挛性抽搐等毒性症状。给药后24 h,高剂量组(4.8~20.0 mL·kg^(-1))小鼠出现死亡,各给药组存活小鼠毒性症状均消失;给药后14 d内,存活小鼠精神状态较好,外观未见异常表现,行为活动正常,9.8 mL·kg^(-1)及以上剂量小鼠体质量增长缓慢。死亡小鼠以及试验结束时仍存活的小鼠,大体解剖肉眼观察未见明显病变及异常。结论 LHO单次灌胃给药对小鼠的半数致死量LD_(50)=5.819 mL·kg^(-1),相当于人的LD_(50)为0.924 mL·kg^(-1)。

宫炎平对子代雄性大鼠生殖发育的影响

目的研究宫炎平对子代雄性大鼠生殖发育的影响。方法选取100只妊娠大鼠,随机分为溶媒对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组共4组。各组妊娠大鼠于妊娠15 d至离乳,每日给予雌性大鼠不同剂量的宫炎平片。子代雄性大鼠出生后正常喂养至出生后第43 d。测定子代雄性大鼠的体重,测量脏器系数,检测精子数、精子活动百分数等指标。结果中剂量组脾脏重量、脾脏系数高于溶媒对照组,存在显著性差异(P<0.05),低剂量组及高剂量组胸腺系数存在显著性差异(P<0.01),其余脏器重量及脏器重量系数统计未见异常;各剂量组雄性大鼠睾丸重、附睾重、睾丸重量系数、附睾重量系数无统计学意义(P>0.05)。检查精子活力及精子畸形情况,各剂量组与溶媒对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。结论宫炎平对子代雄性大鼠生殖发育无毒性影响。

罗浮山百草油抗炎作用机制及活性组分筛选研究

目的:研究罗浮山百草油体内及体外抗炎作用的药效及作用机制并初步筛选其活性组分。方法:分别使用二甲苯致小鼠耳肿胀法及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性模型检测罗浮山百草油的体内及体外抗炎作用,使用RT-PCR法及ELISA法检测细胞内炎性因子变化;通过脂多糖LPS诱导人急性单核细胞白血病细胞THP1炎性模型,使用Western blot法检测核因子-κB p65(nuclear factorκB p65,NF-κB p65)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的磷酸化水平。将罗浮山百草油分为13个组分,使用LPS诱导RAW264.7细胞炎性模型初步筛选其活性组分。结果:罗浮山百草油可剂量依赖性地抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀及LPS诱导RAW264.7细胞一氧化氮(nitric oxide,NO)的产生,抑制细胞内白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA和IL-1β、IL-6蛋白的表达;罗浮山百草油可抑制LPS诱导THP1细胞NF-κB p65及p38 MAPK的磷酸化。活性组分初步筛选发现,13个组分中,百草精(68种药材的茶油提取物)、丁香罗勒油、肉桂油以及八角茴香油具有较强的抗炎活性,是罗浮山百草油抗炎活性的主要贡献者。结论:本研究证实了罗浮山百草油抗炎活性的有效性,并筛选出了相应活性组分,可为临床应用及质量控制提供依据。