小果型非转基因番木瓜新品种黄花佑的选育

黄花佑番木瓜是以泰国红为母本、GZ201301301为父本杂交育成的鲜食番木瓜新品种。该品种植株生长旺盛,结果性状优良,受高温影响小,间断结果现象轻,连续坐果率94.3%,平均单株商品果为71.8个,平均单果质量为790.3 g,果实呈梨形,整齐度高,商品性状优良,平均纵径17.3 cm,横径10.3 cm。果实果皮光滑,果肉较厚呈橙红色,口感柔嫩多汁、无渣,风味清香。可溶性固形物含量(w,后同)为13.5%,还原糖含量为10.5 g·100 g^(-1),总糖含量为12.8 g·100 g^(-1),总酸含量为0.16 g·100 g^(-1),维生素C含量为84.7 mg·100 g^(-1),粗纤维含量为0.5 g·100 g^(-1)。在珠三角地区,组培苗春季定植至始花时间约59 d,定植至始采收时间约177 d,丰产性强,当年平均株产量约56.8 kg,每666.7 m2产量为6816 kg。果实在常温条件下保鲜贮藏期为7 d。适应性较强,适宜在我国番木瓜产区种植。感环斑花叶病毒病和畸叶病毒病,建议采用轮作方式种植,重点防控病毒病。

水肥耦合对香蕉和番木瓜幼苗生长的影响

分析不同氮、磷、钾含量配比与基质相对含水率的耦合对香蕉和番木瓜幼苗生长的影响,为节约型精准化苗木培育提供理论依据。以‘巴西蕉’和‘紫晖’番木瓜假植苗为材料,采用双因素随机区组设计4个水平氮、磷、钾含量配比和3个水平基质相对含水率的交互组合,共12个处理(T1~T12),以传统水肥处理为对照(CK),测定不同处理的香蕉和番木瓜幼苗株高、茎粗、叶片数、叶片SPAD值、叶面积、地上部干重及根系总长度、表面积、平均直径、根尖数等生长形态指标,并对地上部生长指标进行PCA综合评价。在香蕉幼苗试验中,T6处理对株高、叶面积、地上部干重及根系总长度、表面积、平均直径影响最大,T1处理的茎粗最大,T1、T5和T6处理叶片数最多,均为7.60片,T5处理的叶片SPAD值最高,T7处理的根尖数最多,地上部生长指标PCA综合评价得分为T6>T5>T1>T2>T10>T3>T9>T7>T11>T12>T4>T8>CK。在番木瓜幼苗试验中,T10处理对株高、叶面积、叶片数、地上部干重影响最明显,T9处理的叶片数、地上部干重与T10处理一致,并显著增加根系总长度、表面积、根尖数,T11处理的叶片SPAD值最高,T2处理的根系平均直径最大,地上部生长指标PCA综合评价得分为T10>T9>T1>T11>T6>T3>T2>T5>T7>CK>T12>T8>T4。培育香蕉和番木瓜幼苗的最佳氮、磷、钾含量配比均为20:10:20,最佳基质相对含水率分别为80%和70%。

番木瓜均质胚性细胞悬浮系的建立和高效植株再生

【目的】提高番木瓜体细胞胚发生的同步性及其植株再生率,为番木瓜大量快繁、细胞工程和分子育种技术研发提供技术基础。【方法】以紫晖110~120 d果实的未成熟合子胚为外植体,经胚性愈伤组织诱导、液体悬浮培养和体细胞胚发生过程,建立均质胚性细胞悬浮系和高效植株再生技术体系,重点比较了不同质量浓度2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)对胚性愈伤组织诱导、不同质量浓度6-苄基氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine,6-BA)+萘乙酸(1-naphthlcetic acid,NAA)组合和活性炭(activated carbon,AC)对子叶期体细胞胚萌发与生根的影响。【结果】4 mg·L^(-1)2,4-D可诱导62.86%未成熟合子胚形成胚性愈伤组织。经5个继代周期的筛选培养,可建立由单细胞和小细胞团组成的均质胚性细胞悬浮系。采用液体培养方式能诱导大量球形胚的形成,被转移至含5 g·L^(-1)AC的半固定培养基成熟培养30 d后,可获得大量子叶期体细胞胚。在含0.4 mg·L^(-1)6-BA+0.02 mg·L^(-1)NAA的萌发培养基中体细胞胚萌发率为97.58%,胚根端愈伤化比率为95.48%,补充5 g·L^(-1)AC后可获得92.62%体细胞胚同步萌发和生根,并显著降低愈伤化比率至33.10%;在不添加任何植物生长调节剂、仅含5 g·L^(-1)AC的成熟培养基中,体细胞胚同步萌发和生根率为88.33%,愈伤化比率降低至11.67%。正常萌发生根的体细胞胚在含0.1 mg·L^(-1)6-BA+2 mg·L^(-1)吲哚丁酸(3-Indolebutyric acid,IBA)+10 g·L^(-1)AC的再生培养基中可获得81.36%的植株再生率。【结论】以紫晖110~120 d未成熟合子胚为外植体,最佳的胚性愈伤组织诱导培养基为1/2 MS培养基+4 mg·L^(-1)2,4-D+400 mg·L^(-1)谷氨酰胺+60 g·L^(-1)蔗糖。最优体细胞胚发生方案为胚性细胞悬浮系(embryogenic cell system,ECS)经液体培养方式诱导球形胚形成,在含1/2 MS盐+MS维生素+50 mg·L^(-1)肌醇+400 mg·L^(-1)谷氨酰胺+30 g·L^(-1)蔗糖+5 g·L^(-1)AC的培养基中促进体细胞胚的成熟及后续的同步萌发和生根,可有效缓解胚根端愈伤化现象。

番木瓜WRKY转录因子CpWRKY11的克隆和表达

【目的】克隆番木瓜炭疽菌诱导的WRKY转录因子CpWRKY11,研究其在生物胁迫、外源激素处理及非生物胁迫条件下的表达特征,为CpWRKY11基因在后续番木瓜分子育种中的应用提供理论支持。【方法】从自主选育的炭疽病抗性品种中克隆WRKY转录因子CpWRKY11,采用SMART、ExPaSy、NetPhos和DNAMAN软件对该基因及其编码的蛋白序列进行生物信息学分析,利用MEGA-X软件进行系统进化树构建和分析;构建亚细胞定位载体CpWRKY11-GFP,通过转化水稻原生质体,确定CpWRKY11的亚细胞定位情况;利用酵母单杂交试验验证CpWRKY11是否具有转录激活活性;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析CpWRKY11在番木瓜不同组织(根、茎、叶、花和果实)及生物胁迫(短孢炭疽菌和番木瓜畸形花叶病毒侵染)、外源激素(水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、乙烯利(ETH))和非生物胁迫(高盐、干旱和机械损伤)处理下的表达情况。【结果】CpWRKY11基因编码序列全长1719 bp,编码572个氨基酸;CpWRKY11含有60个磷酸化位点,理论分子量为62.31 ku,理论等电点为6.75,不稳定指数为51.17,亲水性为-0.792,是一个亲水不稳定蛋白。CpWRKY11有2个典型的WRKY结构域,同源氨基酸比对及进化树分析结果显示,CpWRKY11与拟南芥AtWRKY20的同源性最高,属于WRKY家族Ⅰ类。亚细胞定位结果显示,CpWRKY11只定位在细胞核上。酵母转录激活验证试验结果显示,CpWRKY11蛋白不具有转录激活活性。CpWRKY11在番木瓜中为组成型表达,在茎中表达量最高,其次为根、果实和花,在叶中的表达量最低。CpWRKY11受短孢炭疽菌和PLDMV的诱导上调表达,在短孢炭疽菌诱导48 h内持续上调,与0 h对照相比其表达量均显著上调,且在反应后期(24和48 h)表达量更高。在PLDMV处理条件下,除接种第3天外,CpWRKY11也均呈现出明显的上调趋势。外源激素处理结果显示,CpWRKY11受SA、ETH和MeJA的诱导上调表达,尤其是在MeJA处理下,CpWRKY11被强烈诱导而显著上调表达,处理48 h内的表达量较对照上调1.9倍以上。CpWRKY11受机械损伤的强烈诱导,表达量显著上调。【结论】CpWRKY11是调控番木瓜逆境胁迫响应,尤其是病原菌侵染及机械损伤响应的重要因子。CpWRKY11可能主要通过JA信号途径参与病原菌应答反应,是具有潜在利用价值的重要候选基因。

番木瓜两性株高温条件下花性转变的转录组分析

【目的】探索番木瓜两性株高温条件下花性转变的分子机制,筛选花性调控相关基因,为培育耐高温番木瓜新品种提供理论依据。【方法】以在高温环境(39~40℃)下采集的番木瓜两性株的雄花(雌蕊退化)和两性花(完全花)为试验材料,利用高效液相色谱法测定两者内源激素含量,利用RNA-seq技术分析两者间的差异表达基因,并通过qRTPCR进行验证,用Plant CARE在线软件分析花发育相关基因启动子顺式元件。【结果】两性花乙烯合成前体1-氨基环丙烷羧酸(ACC)、吲哚-3-乙酸(IAA)、反式玉米素(tZ)、水杨酸(SA)、茉莉酸(JA)含量显著高于雄花,两者脱落酸(ABA)和赤霉素A3(GA3)含量无显著差异。从转录组数据中共获得27793个表达基因,筛选到517个差异表达基因(DEG),其中214个基因在雄花中上调表达,303个基因下调表达。这些差异表达基因主要富集到转录与调控、植物激素响应与信号转导、细胞分化与器官生长调控、质膜组分、氧化应激等GO条目和植物激素信号转导、植物-病原体相互作用、促丝裂原活化蛋白激酶信号通路等KEGG通路上。通过基因功能注释,筛选到70个植物激素信号转导、响应、生物合成及代谢相关差异表达基因,其中52个基因在雄花中下调表达,18个基因上调表达。鉴定到ANT、ANT2、CIB1、HHO5、ZIP21、SAP等6个花发育相关差异表达基因,均在雄花中下调表达,其中SAP基因在两性花中特异表达。除ANT2未查找到相应启动子序列外,ANT、CIB1、HHO5、SAP、ZIP21启动子含植物激素和逆境相关顺式作用元件。选取17个花发育和植物激素相关差异表达基因进行qRT-PCR分析,结果与转录组数据一致。【结论】番木瓜两性株在高温条件下花性转变可能与花芽ACC、IAA、tZ、SA、JA含量下降及ANT、ANT2、CIB1、HHO5、SAP基因下调表达有关。

番木瓜炭疽病病原鉴定及防治药剂筛选

【目的】明确广东省番木瓜果实疑似炭疽病病害的致病菌,并筛选防控该病害的适宜化学药剂,为番木瓜炭疽病的诊断和有效防治提供科学依据。【方法】在广东省广州市番木瓜果园采集番木瓜果实水渍状炭疽病疑似病果,对番木瓜病果进行组织分离及致病性测定,利用传统形态学和分子生物学方法鉴定病原菌;采用菌丝生长速率法测定8种杀菌剂对该病原菌的室内毒力。【结果】从病果样品中分离出5个形态特征相似的菌株(C1~C5),随机选取C1作为代表性菌株进行致病性测定和鉴定。致病性分析发现,番木瓜果实接种C1病原菌2 d即可表现出明显的水渍状病斑,从表现症状的部位可以重新分离到该病原菌。形态学观察发现,C1初生菌丝为白色辐射状,随后变灰白色,菌丝体上覆盖着一些橘红色分生孢子盘;孢子梗透明,有分隔;分生孢子透明,单细胞,细胞壁光滑,两端圆,形状规则呈圆柱形,壁薄,内含物呈颗粒状;分生孢子大小为13.2μm×5.1μm。这些形态学特征与短孢炭疽菌(Colletotrichum brevisporum)一致。分子生物学鉴定结果显示,供试菌株C1核糖体内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、β微管蛋白(β-tubulin,TUB2)和肌动蛋白(actin,ACT)基因序列与短孢炭疽菌(C.brevisporum)模式菌株BCC 38876对应基因的序列一致性分别为100%,93%,98%和100%。系统发育树分析结果表明,供试菌株C1与短孢炭疽菌单独聚为一支。结合形态学、分子生物学、致病性及发病特征明确了导致广东省番木瓜炭疽病的病原菌为短孢炭疽菌。室内毒力测定结果显示,在8种杀菌剂中,45%咪鲜胺水乳剂对C1菌株的抑制效果最明显,抑制中浓度(EC_(50))为0.082 0 mg/L,其次为250 g/L丙环唑乳油和40%苯醚甲环唑悬浮剂,EC_(50)分别为0.263 5和9.714 3 mg/L。【结论】在中国内地首次鉴定了番木瓜果实炭疽病的致病菌短孢炭疽菌。45%咪鲜胺水乳剂、250 g/L丙环唑乳油和40%苯醚甲环唑悬浮剂对番木瓜短孢炭疽菌具有明显的抑制作用。

18个龙眼品种果肉中核苷物质的HPLC定量测定

采用HPLC法同时分离测定了龙眼肉中的为尿嘧啶、胞苷、尿苷、胸腺嘧啶、肌苷、鸟苷、胸苷、腺嘌呤、腺苷等多种核苷成分,并用外标法计算各种核苷的含量。结果发现,鸟苷、尿苷、腺苷含量较高,多数龙眼品种为30～70μg/g;胸腺嘧啶、胞苷含量次之,普遍在10～30μg/g之间;胸苷、尿嘧啶含量较低,普遍在3～10μg/g之间;龙眼肉中还含有少量的腺嘌呤和次黄嘌呤核苷。如果以鸟苷、次黄嘌呤核苷、腺苷等核苷含量的多少来衡量龙眼品种的优劣,则石硖、双孖木、古山二号、储良、大乌圆、东壁、福眼等为较优的龙眼品种。

黄皮和杨梅果肉中核苷含量的HPLC测定

应用HPLC法分析了黄皮和杨梅果肉中核苷的含量．色谱柱为Nucleosil C18反相柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为水和甲醇，二元梯度洗脱，流速0．8mL／min；柱温40℃；分析波长为250nm．结果表明，黄皮4个品种果肉中含次黄嘌呤核苷16．5682-40．6261μg／g鲜质量、腺苷类物质16．2405-39．5125μg/g鲜质量；杨梅4个品种果肉中含次黄嘌呤核苷1．4038-9．0940μg／g鲜质量、腺苷类物质8．0943-20．0012μg／g鲜质量，另外还含有胸苷类物质6．1806-61．9100μg／g鲜质量．

HPLC法测定龙眼肉中的几种核苷类物质

目的:建立HPLC法测定龙眼肉中腺苷、尿苷和腺嘌呤的含量。方法:采用NucleosilC18反相柱(250mm×4mm),以0.01mol/L的KH2PO4:乙腈=92:8为流动相,流速为1ml/min,检测波长为254nm,柱温40℃,用外标法,测定了龙眼肉中腺苷、尿苷和腺嘌呤的含量。结果与结论:分析中选取腺苷的线性范围0.1～20.0μg/ml,相关系数r=0.9999,回收率94.59%,RSD3.10%;尿苷的线性范围0.05～10.0μg/ml,相关系数r=1,回收率97.49%,RSD4.50%;腺嘌呤线性范围0.05～10.0μg/ml,相关系数r=1,回收率103.11%,RSD1.90%。该方法简便快速,线性关系良好。

广东省百香果产业现状与发展对策

百香果是著名的果汁型热带水果,集高营养价值、观赏价值、药用价值于一身。百香果产业是近年广东省大力发展的新兴产业,具有广阔的市场前景。分析了广东省百香果的产业现状及主要存在的问题,包括优质种质资源缺乏,健康种苗繁育技术溃乏;高效高产能配套栽培技术尚不完善;病虫害及逆境灾害防范不足;产、销、加工产业链不完善;产业发展科技支撑及政策扶持不足等。这些产业问题制约了广东百香果的综合利用和发展,亟需解决。针对百香果产业问题提出了广东省百香果产业发展的相应策略,包括加强百香果品种资源收集与利用;加强百香果良种良法种植;加强广东省百香果产业创新联盟构建,产销形式多元化发展;发挥科技支撑作用,加强培养新型经营主体;加强百香果产业政策扶持与管理。

黄皮和杨梅果肉中绿原酸、表儿茶素及芦丁含量的HPLC测定

应用高效液相色谱（HPLC）法测定了黄皮、杨梅果肉中的绿原酸、表儿茶素和芦丁的含量。色谱柱为Nucleosil C18反相柱（250 mm×4 mm）,流动相为20%的甲醇（A）,30%乙腈（B）,pH 3.2,梯度洗脱,流速0.8mL/min,检测波长280 nm,柱温35℃。结果表明：3种标准品的线性范围为0.390 6～50.000 0μg/mL,相关系数r=0.999 9。标准品在0～48 h内经多次测定,保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.78%～0.91%和0.67%～0.95%;回收率和回收率相对标准偏差分别为93.21%～103.50%和2.77%～3.94%;仪器最低检出限分别为0.090 1、0.095 5、0.098 0μg/mL。测定结果还表明：黄皮和杨梅果肉中均含有一定量的绿原酸、表儿茶素和芦丁。黄皮的4个品种中,3种物质的含量（鲜重）分别为4.046 8～38.669 0、4.316 4～84.614 8、52.392 4～130.609 7μg/g;杨梅的4个品种含量（鲜重）分别为17.564 4～93.546 3、113.090 8～236.401 5、46.366 7～168.370 0μg/g。

西藏野桃果实的特性及综合加工利用研究

调查了西藏野桃资源的分布状况,分析了野挑果实加工特性;根据野桃果实特性及当地居民消费习惯,制订了西藏野桃综合加工利用方案,研制出有地方特色的“西藏野生桃果汁”、“西藏野生桃果脯”及“西藏野生桃六合果茶”等产品。

龙眼肉中9种核苷类成分的高效液相色谱分析

利用高效液相色谱（HPLC）法同时分离测定了龙眼肉中的9种核苷类成分（尿嘧啶、胞苷、尿苷、胸腺嘧啶、次黄嘌呤核苷、鸟苷、胸苷、腺嘌呤相对标准偏差和腺苷）。分离柱为Nucleosil C18反相柱（250 mm×4 mm）,流动相为0.01 mol/L的KH2PO4和甲醇,梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长260 nm,柱温40℃。用外标法测定龙眼肉中9种核苷成分的含量。在供试条件下,选取9种核苷标准品的线性范围为0.05-3.20μg/mL,相关系数r=0.9999-1.0000;标准品在0-48 h内经多次测定,保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.133%-1.156%和1.153%-3.023%;回收率和回收率相对标准偏差分别为98.79%-107.34%和1.411%-4.544%;仪器最低检出限分别为0.0035-0.0136μg/mL。

西藏野桃资源及其综合加工利用

西藏野桃资源及其综合加工利用蔡长河钟明黄炳雄王碧青肖维强邱俊荣（广东省农科院果树研究所广州５１０６４０）（广东省农科院科技处西藏野桃资源丰富，处于自生自灭状态，资源利用率低。我们于１９９６—１９９７年对西藏野桃资源的分布、生长和果实品质情况进行...

18个龙眼品种果肉中氨基酸含量的HPLC测定

采用高效液相色谱(HPLC)对18个龙眼品种的鲜果肉进行了氨基酸含量的测定。结果表明:不同龙眼品种间在多种氨基酸含量上存在显著差异,其中谷氨酸含量变化较大,在1.7348～15.4081mg/g湿重之间。18个龙眼品种中均分离出16种水解氨基酸,7种必需氨基酸,龙眼肉中含量较高的氨基酸分别是谷氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸。

荔枝幼年结果树不同时期末次梢的营养及其对成花、坐果的影响

荔枝幼年结果树不同时期抽出的秋梢结果母枝叶片营养及其对翌年成花、坐果的影响研究结果显示 :幼年结果树采后可培养三次梢作为结果母枝 ,末次梢的最适抽出时间 :糯米糍为 1 0月上中旬 ,妃子笑为 9月底 1 0月初 ;适时抽出的三次梢与二次梢相比 ,末次梢老熟时三次梢的营养积累不如二次梢 ,但到了花果期三次梢的营养反而高于二次梢 ,而且适时培养三次梢 ,冬梢萌发少、花穗缩短、花量减少、雌雄比增大、座果率高 。

番木瓜米酒酿造工艺研究

以番木瓜和糯米为主要原料,先将糯米发酵成酒,再把番木瓜汁加入进行后发酵,根据单因素试验结果,设计以后发酵时间、番木瓜汁添加量和酒曲添加量为因素的L9(33)正交试验,得出酿造番木瓜米酒的最适条件:后发酵时间为5 d,添加酒曲用量为0.2%,番木瓜汁的加入量为14%。此条件下的番木瓜米酒糖度为18%,酒精度为12%vol,感官评价分数为85分,其酒体澄清透亮,呈橙黄色;果香与酒香协调,醇甜适口,无苦涩味,典型性好,具有较好的市场前景和推广价值。

化橘红中香豆素类物质的高效液相色谱法测定

采用高效液相色谱(HPLC)法测定化橘红中的多种香豆素成分,并建立10种香豆素混合标准品的分离方法。这10种香豆素标准品是羟甲香豆素、香豆素、7-甲氧基香豆素、呋喃香豆素、6-甲基香豆素、5,7-二甲氧基香豆素、佛手内酯、欧前胡素、异欧前胡素和香柠檬亭。10种香豆素的分离条件:分离柱NucleosilC18反相柱(150mm×4.6mm,3μm),流动相水-甲醇-乙腈,三元梯度洗脱,起始流速0.3ml/min,流速0.3～1ml/min,柱温35℃,分离波长315nm。标准品质量浓度范围为0.078～15.000μg/ml,回归方程的相关系数为0.999～1.000,线性关系极好。标准品连续5次进样和在48h内多次进样,保留时间和峰面积的相对标准偏差均不高于3.466%。对采自广东省茂名市化州市10个不同栽培地点的化橘红样品分析,除6-甲基香豆素和5,7-二甲氧基香豆素未在样品分离中出现外,化橘红样品含有其余的香豆素成分。10个样品间在香豆素含量上存在显著差异,其中7号样品含量最高,香豆素达1380μg/g干粉,异欧前胡素为1226μg/g干粉,分别达0.138%和0.123%。各样品中基本以香豆素和异欧前胡素这两种香豆素含量为主。

微波杀菌对糖水罐头荔枝感官品质的影响

对糖水罐头荔枝进行常规杀菌和微波杀菌对比试验及感官品质指标分析研究结果表明:微波杀菌对防止和抑制果肉颜色红变优于常规杀菌,制品贮藏前期果肉硬度保持良好,随贮期延长,两种杀菌处理之间的差异呈缩小趋势。