纤溶酶产生菌的鉴定及产酶优化

目的对纤溶酶产生菌——LZ-01菌株进行种属鉴定并优化其产酶能力。方法对LZ-01菌株的形态特征进行观察,并进行生理生化试验和phoR基因的序列相似性分析以确定菌株种属,通过单因素试验考察碳源、氮源等对菌株发酵产酶活力的影响,采用正交实验确定菌株最佳产酶工艺条件。结果经鉴定,LZ-01菌株与解淀粉芽孢杆菌标准菌株FZ42的相似度达99.78%,鉴定LZ-01菌株为解淀粉芽孢杆菌。经工艺优化后的酶活力是未经优化酶活力的3.63倍。结论本研究为进一步开发纤溶酶制剂溶栓药物提供了一定的理论依据。

慢病毒载体PLKO.1-shp65的构建及在乳腺癌细胞MDA-MB-231中功能的研究

目的:构建p65降表达质粒并包装成慢病毒,检测对MDA-MB-231细胞增殖转移能力的影响。方法:将体外合成的p65干扰片段与PLKO.1-puro连接形成重组慢病毒质粒PLKO.1-shp65,在293FT细胞中进行包装,产生重组慢病毒颗粒,感染MDA-MB-231细胞。实时定量聚合酶链反应(PR-QPCR)、Western blot检测细胞中p65表达情况。采用细胞计数的方法检测稳定降表达p65之后对细胞增殖能力的影响,用transwell实验检测细胞迁移侵袭能力的变化。用RT-QPCR、Western blot检测增殖转移相关基因细胞周期蛋白E1(CCNE1)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、细胞周期蛋白B1(CCNB1)、周期蛋白依赖性激酶(CDK1)、细胞分裂周期蛋白7(CDC7)、细胞分裂周期相关蛋白7(CDCA7)表达量的变化。结果:用重组慢病毒颗粒PLKO.1-shp65感染MDA-MB-231细胞,p65的表达量显著降低,并且MDA-MB-231细胞的增殖以及迁移侵袭能力降低。同时增殖相关基因CCNE1和CCND1,转移相关基因Snail、Slug的表达量降低。结论:干扰p65之后MDA-MB-231细胞的增殖、转移能力降低。