GNMT通过TGF-β1/Smad3信号通路抑制宫腔粘连纤维化及其机制研究

目的探究甘氨酸N-甲基转移酶(glycine N-methyl transferase,GNMT)对宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)纤维化的影响及其相关机制。方法体内实验:采用36只SPF级健康雌性SD大鼠(周龄为6~8周,体质量180~220 g)。分别构建SD大鼠IUA模型及GNMT过表达大鼠IUA模型,利用RT-qPCR、免疫荧光检测正常子宫与模型组子宫GNMT表达水平;进一步利用RT-qPCR及Western blot检测各组子宫纤维化相关分子mRNA和蛋白水平以及TGF-β1/Smad3信号通路激活情况;HE染色观察各组子宫内膜腺体数量;Masson染色分析各组子宫内膜纤维化程度。体外实验:利用TGF-β1构建人子宫内膜间质细胞(transformed human endometrial stromal cells,THESCs)纤维化表型模型,使用TGF-β1处理稳定转染过表达GNMT慢病毒的THESCs,RT-qPCR及Western blot检测纤维化表型相关分子mRNA和蛋白的表达情况;Western blot检测TGF-β1/Smad3信号通路相关蛋白表达;通过TGF-β1/Smad信号通路激活剂(SRI-011381)激活TGF-β1/Smad3信号通路,Western blot检测TGF-β1/Smad3信号通路及纤维化表型关键分子蛋白表达情况。结果体内实验:与对照组比较,IUA大鼠GNMT mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。过表达GNMT可降低IUA大鼠子宫组织纤维化相关分子CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN mRNA及蛋白水平(P<0.05),并降低TGF-β1及其下游的Smad3蛋白磷酸化水平(P<0.05);HE和Masson染色显示过表达GNMT可增加IUA大鼠子宫内膜腺体数量并减轻纤维化程度(P<0.05)。体外实验:过表达GNMT可降低THESCs纤维化表型相关分子CollagenⅠ、CollagenⅢ和FN的mRNA和蛋白水平(P<0.05),并降低TGF-β1下游的Smad3蛋白磷酸化水平(P<0.05);TGF-β1/Smad3信号通路激活后,LV-GNMT+SRI-011381组中TGF-β1/Smad3信号通路及下游的纤维化表型相关分子CollagenⅢ、FN的蛋白水平均明显降低。结论过表达GNMT通过调控TGF-β1/Smad3信号通路抑制子宫内膜纤维化,进而达到治疗IUA的作用。

下调NF-κB信号通路促进人羊膜间充质干细胞上皮化

目的探讨NF-κB信号通路在诱导人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)上皮化的过程中发挥的作用。方法分离和培养hAMSCs,将hAMSCs分为对照组和诱导组(n=3),采用RT-qPCR检测上皮化标志物(CK-7、CK-19、E-cadherin)、间质标志物(Vimentin)、NF-κB信号通路关键因子(IκBα、p65)和NF-κB信号通路靶基因cyclin D1的mRNA表达水平;采用免疫荧光检测CK-7、E-cadherin、Vimentin、IκBα、p65和p-p65的蛋白表达水平;为确认NF-κB信号通路在hAMSCs上皮化中的作用,将hAMSCs分为诱导组、抑制剂组、Ad-GFP组(空白腺病毒)、Ad-IκBα组(腺病毒过表达IκBα)、LV-GFP组(空白慢病毒)、LV-RELA-RNAi组(慢病毒沉默p65)(n=3)。RT-qPCR检测CK-7、CK-19、E-cadherin、Vimentin、IκBα和p65的mRNA表达水平,免疫荧光检测CK-7、E-cadherin、Vimentin和IκBα、p65、p-p65的蛋白表达水平。结果与对照组比较,诱导组中CK-7、CK-19、E-cadherin的mRNA表达升高(P<0.01),CK-7、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),Vimentin的mRNA表达降低(P<0.01),蛋白表达降低(P<0.05),IκBα、p65、cyclin D1的mRNA表达降低(P<0.001),IκBα、p65、p-p65蛋白表达降低(P<0.05);抑制剂组、Ad-IκBα组、LV-RELA-RNAi组中CK-7、CK19、E-cadherin的mRNA表达较诱导组明显升高(P<0.01),CK-7、E-cadherin蛋白表达较诱导组升高(P<0.05),Vimentin的mRNA表达明显下降(P<0.01),蛋白表达降低(P<0.05)。结论NF-κB信号通路参与hAMSCs上皮化的调控,下调NF-κB信号通路能有效促进hAMSCs上皮化。

LncRNA H19促进子宫内膜蜕膜化的作用研究

目的探究LncRNA H19对子宫内膜蜕膜化的作用。方法采用RT-qPCR检测自然流产和人工流产蜕膜组织中的LncRNA H19表达情况;检测非妊娠子宫内膜和不同孕周蜕膜组织中LncRNA H19的表达;使用MPA和8-Br-cAMP诱导剂诱导子宫内膜间质细胞(transformed human endometrial stromal cells,THESCs)使其蜕膜化,RT-qPCR检测蜕膜化标志物催乳素(prolactin,PRL)和胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin-like growth factor binding protein 1,IGFBP-1)的表达;检测蜕膜化后LncRNA H19和FOXO1的表达变化;使用慢病毒分别过表达和干扰THESCs中的LncRNA H19,CCK-8检测THESCs的增殖情况。慢病毒转染成功后再诱导蜕膜化,RT-qPCR检测空白对照组、LV-GFP诱导组、LV-H19-RNAi诱导组和LV-H19诱导组的PRL、IGFBP-1和FOXO1的表达。结果自然流产组LncRNA H19表达低于人工流产组(P<0.01);LncRNA H19在孕早期人工流产蜕膜组织第7周达到高峰(P<0.01);THESCs蜕膜化后,PRL、IGFBP-1、LncRNA H19和FOXO1的mRNA表达较对照组增高(P<0.05,P<0.01)。CCK-8结果显示干扰LncRNA H19后THESCs的增殖被抑制(P<0.01),而过表达LncRNA H19后THESCs的增殖被促进(P<0.01)。分别干扰和过表达THESCs的LncRNA H19后再进行蜕膜化诱导,与空白对照组比较,LV-GFP诱导组的PRL(P<0.05)、IGFBP-1(P<0.01)和FOXO1(P<0.01)的mRNA表达升高。与LV-GFP诱导组比较,LV-H19诱导组PRL(P<0.05)和IGFBP-1(P<0.01)的mRNA表达升高,而LV-H19-RNAi诱导组的PRL(P<0.05)、IGFBP-1(P<0.01)和FOXO1(P<0.01)的mRNA表达降低。结论LncRNA H19促进子宫内膜间质细胞增殖和蜕膜化。

妇科癌症患者并发静脉血栓栓塞的临床特征研究

目的探讨妇科癌症患者并发静脉血栓栓塞(VTE)的临床特征。方法选取2015年1月至2016年12月于四川省绵阳市第三人民医院就诊的252例癌症患者,统计患者临床资料,分析妇科癌症患者并发VTE的临床特征和危险因素。结果 252例妇科癌症患者共有28例合并VTE,VTE总发生率为11.11%,其中22例静脉血栓形成(DVT)、4例肺栓塞(PE)、2例DVT合并PE。宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌和其它类型癌症患者之间DVT、PE、DVT合并PE、VTE发生率比较均无显著性差异(χ~2值分别为0.357、0.306、0.986、0.087,均P>0.05)。绝经状态、肿瘤淋巴结转移分期(TNM)分期、肿瘤分化程度、血清D-二聚体和化疗与VTE的发生显著相关(χ~2值分别为8.488、17.662、15.330、23.864、4.257,均P<0.05),而年龄、淋巴转移和病理类型与VTE的发生无显著相关性(χ~2值分别为0.209、0.141、0.328,均P>0.05)。Logistic回归分析显示,TNM分期高、肿瘤分化程度低、血清D-二聚体升高和接受化疗是妇科癌症患者发生VTE的危险因素(OR值分别为3.782、2.013、4.993、2.942,均P<0.05)。结论 VTE在妇科癌症患者中具有较高的发生率,且以DVT为主,在不同类型的癌症中发生率未见差异,对于TNM分期晚、分化程度高、血清D-二聚体水平高和接受化疗治疗的患者,应该及时采取预防措施,从而改善患者预后。

p27、Cyclin-E在子宫内膜异位症中的表达及其临床意义

目的:探讨p27、细胞周期蛋白-E(Cyclin-E)在子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)中的表达及其临床意义。方法:选取2018年4月至2021年4月于绵阳市第三人民医院经手术病理证实为卵巢EMS的100例患者作为观察组,收集子宫内膜异位病灶组织;另选取同期因子宫肌瘤接受子宫切除手术的100例患者作为对照组,收集正常子宫内膜组织。采用免疫组织化学检查两组p27和Cyclin-E的表达。结果:观察组Cyclin-E阳性率(86.00%)显著高于对照组(11.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。观察组p27阳性率(57.00%)显著低于对照组(78.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。p27和Cyclin-E表达与生长程度、囊肿大小及痛经有关(P<0.05)。p27和Cyclin-E在EMS中的表达呈负相关(P<0.05)。结论:p27和Cyclin-E水平的变化在EMS发生发展中起重要作用。

地诺孕素的临床应用进展

地诺孕素(dienogest,DNG)为新型混合型强效孕激素,是高度选择性的孕激素受体激动剂,具有19-去甲睾丸酮衍生物和孕酮衍生物的双重特性。中枢及外周机制抑制排卵,发挥抗炎、抗增殖、抗血管生成、抗雄激素等作用,具有高效孕激素效应,而无盐皮质及糖皮质激素活性[1,2]。DNG是第一个针对子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)的孕激素类药物,现已广泛用于EMT、子宫腺肌病治疗。DNG作为孕激素成分,还可用于避孕、激素替代等治疗[3,4],同时,其在辅助生殖、抗肿瘤方面的应用价值也在不断挖掘中。本文将对DNG的药学特点、作用机制、临床应用现状作一综述。