基于代谢组学研究海参酶酵液对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的利用蛋白酶酶解和益生菌发酵技术制备海参酶酵液(sea cucumber enzymolysis fermentation liquid,SCEFL),观察SCEFL对环磷酰胺致免疫抑制小鼠的作用,并采用代谢组学方法探讨其作用机制。方法采用腹腔注射环磷酰胺的方法诱导免疫抑制模型,C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、模型组、左旋咪唑(阳性药)组、SCEFL低、中、高剂量组。HE染色法观察小鼠脾脏病理变化;流式细胞术检测外周血CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞百分比以及CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞的比例;ELISA法对血清IL-2(白介素-2)、IgG(免疫球蛋白G)、IgM(免疫球蛋白M)进行检测;利用UPLC-Q/TOF-MS技术分析小鼠血清中内源性代谢产物的变化,筛选潜在差异代谢物并分析其相关代谢通路。结果SCEFL可改善免疫抑制小鼠的病理学变化;提高CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞的比例;提高血清IL-2、IgG、IgM的含量;主要通过6条相关代谢通路,包括甘油磷脂代谢、鞘脂代谢、亚油酸代谢、α-亚麻酸代谢、糖基磷脂酰肌醇-锚定生物合成及花生四烯酸代谢来调节小鼠的免疫功能。结论SCEFL可能通过调节内源性代谢紊乱达到改善小鼠免疫抑制的作用。

基于代谢组学及分子对接技术探究异牡荆素改善酒精性脂肪肝的作用机制

目的应用代谢组学与体内实验验证并结合分子对接技术的方法,探讨异牡荆素(isovitexin,IVT)对酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease,AFLD)的影响及其作用机制。方法将8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组及IVT组,每组6只。对照组用酒精液体饲料对照饲料喂养,模型组和IVT组用酒精液体饲料模型饲料喂养,IVT组每日灌胃IVT(100 mg·kg^(-1))。30 d后,检测与AFLD相关的关键指标,包括血生化指标、氧化应激指标和肝组织病理变化等,同时采用UPLC-Q-TOF/MS技术和分子对接技术,以探讨IVT对AFLD的影响及其作用机制。结果IVT可以明显降低AFLD小鼠血生化异常并且改善相关症状。通过代谢组学分析确定了34个生物标志物及5条代谢通路。通过分子对接进一步分析表明,IVT可能通过调控甘油磷脂代谢而起到治疗AFLD的作用。结论IVT能有效改善AFLD,对其具有一定的保护作用,其机制可能与激活甘油磷脂代谢通路有关。

莪术对局灶性脑缺血模型大鼠的神经保护作用

目的:探讨莪术对局灶性脑缺血模型大鼠的神经保护作用及机制。方法:健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为6组,分别为假手术对照组、模型对照组、尼莫地平组、莪术高、中、低剂量组。除了假手术对照组,其余组大鼠采用线栓法制作大鼠大脑中动脉梗阻模型。造模前预防给药7d,造模后给药3d,每天1次。各组大鼠进行神经行为学评分,断头取脑进行TTC染色,检测大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、谷氨酸(Glu)含量以及脑含水量、脑梗死体积百分比改变。结果:与模型对照组相比,莪术高剂量组LDH、CK、Glu含量以及脑含水量、脑梗死体积百分比有明显降低(P<0.05),莪术中剂量组LDH、Glu含量和脑梗死体积百分比也有明显降低(P<0.05),而莪术中剂量组CK、脑含水量和莪术低剂量组LDH、CK、Glu、脑含水量和脑梗死体积百分比与模型对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。说明莪术在一定剂量下能有效地降低局灶性脑缺血大鼠LDH、CK和Glu含量以及脑含水量、脑梗死体积百分比。结论:莪术对局灶性脑缺血模型大鼠具有一定的神经保护作用,这种作用可能与保护缺血区脑组织、减轻脑水肿、抗氧自由基,减少兴奋性氨基酸毒性有关。

金沙藤乙酸乙酯提取物对小鼠巨噬细胞炎症因子的影响

目的:研究金沙藤乙酸乙酯提取物(EHL)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌炎症因子的影响,并探讨其抗炎作用机制。方法:取RAW264.7细胞,分为空白对照组、LPS刺激组、地塞米松干预组、EHL低、中、高剂量组,采用MTT法测定EHL对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响;Griess法测定NO的释放量;ELISA法检测TNF-α、IL-6的分泌水平。结果:EHL能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α、IL-6,且呈剂量依赖性。结论:EHL具有体外抗炎作用,其机制可能与抑制TNF-α、IL-6等炎症因子的分泌有关。

广西产石韦和柔软石韦抗炎镇痛作用研究

目的:比较广西产石韦和柔软石韦的抗炎镇痛疗效。方法:雄性昆明种小鼠80只,随机分为8组:模型组(蒸馏水),阳性对照组(地塞米松0.01mg/kg),石韦及柔软石韦给药高(40g生药/kg)、中(20g生药/kg)、低(10g生药/kg)剂量组,每组10只,各组小鼠灌胃给药,每天1次,连续7d,于末次给药后30min,采用巴豆油混合物致小鼠耳廓肿胀及对角叉菜胶致足趾肿胀方法,观察石韦和柔软石韦对小鼠耳廓肿胀及对角叉菜胶致足趾肿胀的影响;雌性及雌雄并用昆明种小鼠80只,随机分为8组:空白对照组(蒸馏水)、阳性对照组(阿司匹林0.2g/kg),石韦及柔软石韦给药高、中、低剂量组,给药方法同上,于末次给药后30min,采用小鼠热板试验和醋酸扭体试验方法,观察石韦和柔软石韦对小鼠热板痛阈和扭体次数的影响。结果:与模型组比较,石韦和柔软石韦高、中剂量组均可明显减轻小鼠耳廓肿胀度和足趾肿胀度(P<0.01或P<0.05)。石韦和柔软石韦比较,石韦高、中剂量组明显减轻足趾肿胀度(P<0.01),石韦中剂量组明显减轻小鼠耳廓肿胀度(P<0.05);与空白对照组比较,石韦和柔软石韦高、中剂量组的痛阈值和痛阈提高百分率均有明显的提高(P<0.01或P<0.05),石韦和柔软石韦高、中、低剂量组明显减少小鼠扭体次数(P<0.01或P<0.05)。石韦和柔软石韦比较,石韦高、中剂量组明显提高小鼠热板痛阈值(P<0.01),石韦和柔软石韦对小鼠扭体次数无明显差异(P>0.05)。结论:石韦和柔软石韦均有明显的抗炎镇痛作用,石韦的抗炎镇痛作用强于柔软石韦。

桂千金子提取物对金黄色葡萄球菌体外抗菌作用及机制的初步研究

目的:探讨桂千金子提取物对金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性及作用机制。方法:通过体外抑菌试验,测定桂千金子乙醇提取物及其乙酸乙酯、正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),比较标准菌株金黄色葡萄球菌(SA)及临床分离的金黄色葡萄球菌(MSSA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抗菌活性大小。测定桂千金子乙醇提取物作用后MRSA碱性磷酸酶(AKP)活性、外流DNA/RNA大分子含量、胞内蛋白含量的变化,采用电镜观察MRSA细胞形态。结果:桂千金子提取物对3种供试菌株的抑菌圈直径均大于15 mm,MIC为1.56~12.50 mg/mL,MBC为3.13~25.00 mg/mL,抗菌强度排序为乙醇提取物≈乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物;与空白对照组比较,实验组AKP活性升高(P<0.05),各实验组与空白组外流DNA/RNA大分子含量和胞内蛋白含量比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);电镜下MRSA菌体细胞变形,表面粗糙有颗粒附着。结论:桂千金子提取物对金黄色葡萄球菌及其耐药菌株均具有显著的抗菌活性,其抗菌作用可能与细胞壁结构破损致通透性发生改变有关。

基于网络药理学探究积雪草酸抗酒精性肝炎的作用机制

目的应用网络药理学与体内实验验证的方法,探讨积雪草酸(asiatic acid,AA)对酒精性肝炎(alcoholic hepatitis,AH)的作用机制。方法通过数据检索、网络构建与富集分析的方法探索AA对AH的潜在作用机制。同时,每日灌胃SD大鼠酒精诱导酒精性肝炎模型,检测与AH相关的关键指标,包括血生化指标、炎症反应、酒精代谢、肝组织病理变化和NF-κB通路中关键蛋白的表达。结果筛选出AA与AH共同作用靶点24个,富集分析得到20条信号通路和12条GO功能条目,本实验重点研究排在第一位的hsa05200:Pathways in cancer的NF-κB信号子通路。体内实验结果显示,积雪草酸能明显降低大鼠血清中ALT和AST含量,提高ADH和ALDH的活性,明显降低肝脏TNF-α和GSH的水平;此外,积雪草酸还可以明显抑制p-IKKα/β、p-IκBα和p-NF-κB蛋白表达。结论积雪草酸对酒精导致的大鼠肝炎有一定的改善作用。

香蜂草苷对脂多糖联合D-氨基半乳糖诱导C57BL/6J小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨香蜂草苷对脂多糖(LPS)联合D-氨基半乳糖(D-Gal)致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法:将90只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、香蜂草苷(0.8 mg/kg)对照组、模型组、阳性对照(175 mg/kg联苯双酯)组及香蜂草苷低、高剂量(0.4 mg/kg、0.8 mg/kg)组。连续给药14 d后,除正常对照组和香蜂草苷对照组外,其余各组小鼠均腹腔注射LPS和D-Gal建立急性肝损伤模型。检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,苏木精-伊红(HE)染色法观察肝脏病理组织学改变,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blotting法检测NF-κB p65、磷酸化(p-)IKKα/β、IKKα/β蛋白表达。结果:与模型组比较,香蜂草苷低、高剂量组血清ALT、AST活性和MDA含量以及IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著降低,SOD活性显著升高(P<0.05);肝脏体积明显减小,充血明显减轻,肝细胞坏死明显改善。模型组p-IKKα/β、NF-κB p65表达较正常对照组显著上调,香蜂草苷低、高剂量组p-IKKα/β、NF-κB p65蛋白表达较模型组显著下调(P<0.05)。结论:香蜂草苷能显著改善LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。