微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白抗体检测ELISA方法的建立

为建立快捷的含病毒隐孢子虫的检测方法,本研究利用已构建的微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白重组表达质粒表达并纯化重组蛋白,建立以该重组衣壳蛋白为包被抗原检测抗体的间接ELISA检测方法。经优化后间接ELISA的最佳条件为:抗原包被浓度为0.25μg/孔,被检血清稀释度为1∶200,酶标二抗稀释度为1∶2000,封闭液为含5%脱脂奶粉的PBST溶液。该方法检测安氏隐孢子虫阳性血清,柔嫩艾美尔球虫阳性血清,蓝氏贾第虫阳性血清,弓形虫阳性血清与微小隐孢子虫阳性结果均为阴性。该方法灵敏度为1∶1600,特异性较强且具可重复性,可用于含病毒隐孢子虫的抗体检测及流行病学调查。

微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定

目的对微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白S-dsRNA基因进行克隆、表达和反应原性分析。方法以微小隐孢子虫总RNA逆转录的cDNA为模板,克隆S-dsRNA基因,并转化至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达载体pET-28a(+)-S,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白的表达情况,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白与鼠抗微小隐孢子虫阳性血清的反应原性。结果 PCR和双酶切鉴定表明,重组质粒pET-28a(+)-S构建成功。SDS-PAGE结果显示,37℃下经1mmol/L IPTG诱导4h,重组蛋白表达量最大。重组蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为37000,与预期大小一致,重组蛋白约占蛋白总量的72.6%。Western blotting分析结果表明,重组蛋白能识别抗微小隐孢子虫阳性鼠血清。结论微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白S-dsRNA基因表达成功,重组蛋白具有反应原性。

企业资金管理新说

目前,许多物资企业的资金管理,仍以普遍性的资金紧缺和资金效益低下为其特征。从江苏省某县16个物资企业的经济运行情况看,80％的亏损原因是由于资金缺乏科学管理所致,如盲目在外投资,造成大量资金被套、被骗;盲目赊销物资,造成大量资金沉淀、呆滞,等等。所以,物资企业要提高经济运行质量,扭亏增盈,必须把资金的科学管理,作为企业管理的重中之重,切实抓紧抓实抓好。