基于转录组学探讨当归芍药散对db/db小鼠肾脏保护作用的潜在机制

目的基于转录组学和实验验证探究当归芍药散对db/db糖尿病肾病小鼠肾脏的保护机制。方法25只8周龄造模成功的db/db小鼠按体质量随机均分为模型组(20 mL/kg蒸馏水)、达格列净组(1.3 mg/kg)、当归芍药散低剂量组(8.39 g/kg)、当归芍药散中剂量组(16.77 g/kg)、当归芍药散高剂量组(33.54 g/kg),每组5只;另选5只同龄db/m小鼠作为空白组(20 mL/kg蒸馏水)。每组灌胃1次/d,连续6周。给药结束后,检测各组小鼠体质量、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、口服糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)的曲线下面积(area under thecurve,AUC);采用全自动生化分析仪检测尿白蛋白肌酐比值(urea albumin creatinine ratio,UACR)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC);采用肌酐比色法检测血肌酐(serum creatinine,Scr);采用尿素比色法检测小鼠血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN);采用HE染色观察肾脏组织病理形态;采用转录组学芯片技术检测小鼠肾组织差异基因,并对当归芍药散中剂量组差异基因进行KEGG富集分析;采用RT-PCR法检测表达量TPM>10的核心基因在肾脏组织中的mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、OGTT-AUC、FBG、UACR、Scr、BUN、TG、TC显著升高(P<0.01)。与模型组相比,达格列净组、当归芍药散各剂量组小鼠体质量、OGTT-AUC、FBG、UACR、Scr、BUN、TG、TC均降低(P<0.05,P<0.01)。与空白组相比,模型组共筛选出1129个差异基因,其中上调差异基因337个、下调差异基因792个。与模型组相比,当归芍药散共筛选出271个差异基因,其中上调差异基因195个、下调差异基因76个。空白组、模型组、当归芍药散中剂量组三组差异共表达基因57个,其中TPM>10的核心基因共12个,包括Gsta2、Cyp4a12a、Slc8a1、Abcc4、Cpeb4、Serpina1b、Npl、Aacs、Kap、Slc5a10、Tmem252、Ifi27l2a。12个核心基因的mRNA表达水平与转录组测序趋势相同。与模型组比较,当归芍药散中剂量组小鼠Gsta2、Abcc4、Slc8a1、NPL mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Slc5a10、Tmem252 mRNA表达水平下降(P<0.05)。当归芍药散中剂量组差异基因富集于药物代谢-细胞色素P450、谷胱甘肽代谢、活性氧等相关通路。结论当归芍药散具有改善糖尿病肾病预后的作用,其机制可能与调控Gsta2、Slc5a10、Abcc4、Slc8a1、Tmem252、Npl等基因表达,调控细胞色素P450、谷胱甘肽代谢、活性氧等信号通路相关。

左归降糖清肝方通过改善肠道菌群稳态促进2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病小鼠肠黏膜屏障的修复

研究左归降糖清肝方对高脂饮食诱导的2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的肠道菌群稳态调节及肠黏膜屏障的修复作用。以MKR转基因小鼠(T2DM小鼠)为研究对象,使用高脂饮食(HFD)来诱导NAFLD,然后用左归降糖清肝方(7.5、15 g·kg^(-1))、二甲双胍(0.067 g·kg^(-1))对小鼠进行8周的治疗。取血清进行肝功能、甘油三酯的检测分析;肝脏组织行HE、Masson染色,肠组织进行HE、AB-PAS染色;利用16S rRNA测序观察各组小鼠肠道菌群的变化;采用免疫荧光、PCR法检测小鼠肠道黏膜屏障关键蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1及其基因(mRNA)的表达水平。结果显示,左归降糖清肝方可改善T2DM合并NAFLD小鼠体质量,降低肝脏指数,下调肝功能及血脂异常的血清生物标志物ALT、AST、TG,增加胰岛素敏感性,并改善葡萄糖耐受的情况。16S rRNA测序结果表明,左归降糖清肝方的治疗改变了肠道微生物群的组成和丰度,增加了Muribaculaceae、Lactobacillaceae、Lactobacillus、Akkermansia、Bacteroidota的相对丰度,降低了Lachnospiraceae、Firmicutes、Desulfobacterota、Proteobacteria、Desulfovibrionaceae的相对丰度。肠黏膜病理分析显示左归降糖清肝方可增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的表达水平,并促进肠道黏膜的修复,保护肠道绒毛,增加肠黏膜绒毛的高度及杯状细胞的数量。左归降糖清肝方可通过调节肠道微生物群稳态、促进肠道黏膜屏障的修复改善T2DM合并NAFLD诱导的肠黏膜损伤。

当归芍药散古今源流及临床应用机制

目的:系统梳理有关当归芍药散的古今文献,了解当归芍药散的历史沿革和临床应用概况,为当归芍药散的现代临床应用及研究提供理论基础。方法:在《中华医典》数据库中以“当归芍药散”为关键词搜索有关条目及古代书籍,在国家知识基础设施数据库(CNKI)及PubMed数据库中以“当归芍药散”“DangGui ShaoYao San(DSS)”为主题词进行检索,并依据纳入和排除标准筛选,最终总结出当归芍药散的历史沿革与临床研究。结果:古代文献最终纳入111条目,共50部医籍,当归芍药散首载于《金匮要略》,其药物组成、基原、剂量、煎服方法大致延续了仲景书中的记载,书中并未记载当归芍药散的炮制方法、服药反应及禁忌证,但是后世医家及学者对当归芍药散的单个药物进行了考证和探讨,处方配伍比例当为3∶16∶8∶4∶4∶8,方中药物为生品,主治腹痛;现代文献纳入38篇文献,该方具有镇痛抗炎、调节激素水平、降低血脂程度、改善血流状态、提高免疫的功用,主要用于慢性盆腔炎、痛经、黄褐斑、糖尿病肾病等疾病。结论:当归芍药散的组成、基原、剂量、煎煮及服用方法基本上与《金匮要略》保持一致,该方主要适用证型有5型,疾病有10余种。临床治疗上,探究其临床应用机制,扩宽了当归芍药散的应用范围,为经方当归芍药散的开发与应用提供了参考。