RT-PCR检测氧化砷治疗APL复发患者的PML-RARα融合基因

目的：探讨急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）患者在氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗过程中，ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的变化。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ技术动态观察１４例ＡＰＬ复发患者在Ａｓ２Ｏ３治疗过程中，骨髓单个核细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本的改变。结果：检测的１１例诱导缓解患者中，９例存在阳性ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本，随访的６例患者中，３例呈现ＰＭＬ－ＲＡＲα转阴，但２例分别在缓解后５、７个月转阳。

个性化延续性护理对变应性鼻炎儿童舌下特异性免疫治疗的影响

目的探讨个性化延续性护理对变应性鼻炎儿童舌下特异性免疫治疗(sublingualimmunotherapy,SLIT)的影响。方法选取我院2010年4月-2012年5月收治变应性鼻炎患儿100例,随机分为对照组和研究组各50例。对照组采用常规护理,研究组实施个体化延续护理。从护理开始时及第2年对患儿的症状进行评分,以判断临床效果。结果护理前两组的评分比较无明显差异,护理后两组评分均明显降低,组内前后比较有显著差异(P<0.01),且护理后研究组评分下降更明显,与对照组护理后比较差异有统计学意义(P<0.01)。研究组总有效率为96%,对照组为84%,两组效果比较差异有显著差异(P<0.05)。结论个体化延续性护理可以提高儿童变应性鼻炎使用舌下特异性免疫治疗的效果及患儿治疗依从性。

基于HL7 V3标准的集成平台的初步研究

随着数字化医院的迅速发展和不断进步,医院信息化建设发挥着越来越重要的作用,医院信息系统数量日益增多,复杂程度不断提高,医院信息系统集成也逐渐成为一个专门的研究领域。首先介绍HL7 V3(HL7标准第三版)的信息模型和HL7V3数据交换实现原理,并阐述了医院信息系统集成规范IHE在国内外的发展,总结现有几种常见的系统集成技术方案,提出了一种基于HL7 V3的医院信息系统集成平台。该平台可以在应用级、流程级及数据级进行系统整合与优化,从而解决了医院异构信息系统的集成问题,实现医院异构信息系统之间的无缝连接及信息共享,从整体上提高医院各项工作的效率和质量。

急性会厌炎的急救护理

目的:探讨急救护理对急性会厌炎(acute epiglottitis)疗效的影响。方法:通过回顾分析2009年1月-2011年12月在笔者所在医院就诊的50例AE患者的临床资料。结果:除4例伴Ⅳ度呼吸困难患者行气管切开术外,对照组有1例患者因治疗期间呼吸困难加重,改行气管切开术,其余均经药物治疗后痊愈;较之对照组,观察组患者平均住院时间明显短,护理服务满意度高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在AE护理工作中,采用专门护理路径表,实施规范化、系统化的急救护理,不仅可缩短患者住院时间,节省医疗费用,还能提高患者对护理服务的满意度,值得深究。

耳鼻咽喉科护理技术操作中潜在风险因素分析与防范措施

目的:探讨耳鼻咽喉科护理技术操作中潜在的风险因素并提出针对性防范措施。方法:将我院耳鼻咽喉科收治的66例患者随机等分为对照组和研究组,对照组进行常规护理,研究组在此基础上分析护理操作中可能存在的风险并采取针对性防范措施。比较两组患者护理差错发生率及护理满意率。结果:研究组患者的护理满意率高于对照组,护理差错发生率低于对照组,两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:针对耳鼻咽喉科可能存在的潜在风险进行针对性防范,可有效提升护理质量,降低护理差错发生率,提高护理满意度。

石膏外固定治疗耳廓假性囊肿的临床护理

目的探讨采用石膏外固定结合护理治疗耳廓假性囊肿的疗效。方法通过回顾分析2010年1月至2011年12月在我院门诊就医的100例耳廓假性囊肿患者的临床资料。结果观察组和对照组的治愈率分别为94.0%和80.0%,治愈率明显高(P<0.05);较之对照组,观察组结合相关护理措施后,耳部不适和外观不满意情况明显少(P<0.05),并发症情况也少。结论石膏外固定结合相应护理措施治疗耳廓假性囊肿,不仅可以提高疗效,还可以减少并发生情况,值得深究。

垂体瘤发病相关基因的大规模筛选及鉴定

目的：探讨垂体瘤与垂体组织差异表达基因的大规模筛选及鉴定。方法：垂体无功能腺瘤及正常垂体组织 cDNA文库构建，大规模表达序列标签 (expressed sequence tags， ESTs)测序、表达谱差异的生物信息学处理及半定量逆转录－聚合酶链反应 (reverse transcriptase polymerase chain reaction， RT-PCR)鉴定。结果：从无功能腺瘤和正常垂体组织中分别获得 1253和 7222个质量满意的 ESTs；垂体瘤中已知基因的品种数 200个，经组织表达谱差异比较的统计学软件处理，在这些已知基因中，差异的可靠性≥ 0.99者 38个，≥ 0.95者 130个；其中与细胞生长、分化相关的 G2类基因共 17个； 6个经半定量 RT-PCR证实 4个基因的表达在垂体瘤中明显高于正常垂体。结论：与细胞生长、分化相关的 G2类基因 MEIS2、 SMT3C、 C1D、 BUB3在垂体瘤中表达高于正常垂体，推测可能与垂体瘤的发生有关。

73例中国人血友病甲基因突变的分析

我们用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ、ＰＣＲ、变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和ＤＮＡ测序等方法对７３例血友病甲患者（经上海瑞金医院测定血浆ＦＶⅢ：Ｃ和ｖＷＦ：Ａｇ诊断，其中无亲缘关系患者６５例，按ＦＶⅢ：Ｃ水平分为轻、中、重三型。ＦＶⅢ：Ｃ＜２％为重型，共４７例；ＦＶⅢ：Ｃ２％～５％为中型，共９例；ＦＶⅢ：Ｃ５％～２５％为轻型，共１７例）进行ＦＶⅢ基因突变检测。共检出内含子２２倒位２３例，均为重型，约占重型的４９％，与国外报道相似。余下５０例（其中无亲缘关系者４５）用ＰＣＲ－ＤＧＧＥ分析所有外显子及其侧翼内含子序列，发现异常条带则进行ＤＮＡ测序。在１７例患者中检出突变１３种，其中无义突变５种，均为重型；错义突变６种，除１例外都是轻中型；小缺失２例，都是重型；其中，ＡＡ４６６Ｌｙｓ（ＡＡＧ）－Ｔｈｒ（ＡＣＧ），７１９Ｔｙｒ（ＴＡＣ）－Ｓｔｏｐ（ＴＡＧ），ＡＡ８２６Ａｓｐ（ＧＡＣ）－Ｇｌｕ（ＧＡＡ），３１２Ｉｌｅ（ＡＴＣ）－ｘｘＣ及ＡＡ１５５１－１５５２ｄｅｌ（ＡＧＡＡ）为新发现的突变。有亲缘关系的患者都有相同的基因突变，而在无亲缘关系患者未发现相同突变。基因突变与临床表现基本相符。

人APL细胞株NB4不同二维电泳条件对电泳结果的影响

本研究探讨不同二维电泳条件对人急性早幼粒细胞性白血病 (APL)细胞株NB4二维电泳结果的影响。选用 2 4cm ,pH3- 10L的固定 pH梯度 (immobilizedpHgradient,IPG)胶条 ,用IPGphor进行第一相等电聚焦 ,然后用EttanDaltII垂直电泳系统进行第二相SDS PAGE ,银染后用ImageMaster 2DElite软件进行分析。结果表明 :采用低离子强度的缓冲液冲洗收集样品可以提高等电聚焦效果。裂解液中 7mol/L尿素、4 0mmol/LDTT能溶解NB4细胞大部分蛋白质 ,而水化液中硫脲与尿素合用可以明显增加碱性端中低分子量区可分辨的蛋白质点。NB4细胞用 2 4cm ,pH3- 10L的IPG胶条进行二维电泳时 ,10 0 μg左右的上样量、6 32 0 0V小时左右的等电聚焦时间是恰当的。结论 :APL细胞的蛋白质种类繁多 ,受多种因素影响 ,正确选择样品制备方法和二维电泳条件十分重要。

BCR-ABL与泛素E3连接酶c-CBL的相互作用在慢性髓系白血病靶向治疗中的作用及相关机制研究

目的:通过对BCR-ABL与泛素E3连接酶c-CBL的相互作用结构域的筛查,明确砷剂治疗慢性髓系白血病(CML)的结构基础。方法:根据BCR-ABL与c-CBL的结构信息,对二者的结合界面进行结构模拟与分析,基于此构建BCR-ABL的不同突变体[(△SH2(Src同源结构域2)、△TyrKC(酪氨酸激酶催化结构域)和△SH2/TyrKC(S/H))以及c-CBL的突变体△RF(环指结构域),转染293T及HeLa细胞,应用免疫共沉淀(Co-IP)]及免疫荧光(IF)共定位的方法筛查BCR-ABL与c-CBL的相互作用结构域。结果:Co-IP发现BCR-ABL的TyrKC结构域主要参与了与c-CBL的相互作用,SH2结构域也发挥一定的作用,但作用弱于TyrKC结构域;当两个结构域同时截短后,BCR-ABL与c-CBL几乎不发生相互作用;同时c-CBL的RF结构域在一定程度上影响了与BCR-ABL的相互作用。IF的结果与Co-IP相符,证明了结构模拟的准确性。结论:BCR-ABL的TyrKC和SH2结构域主要参与了与c-CBL的相互作用,而c-CBL的RF结构域参与了与BCR-ABL的相互作用。c-CBL与BCR-ABL的相互作用对BCR-ABL的稳定性发挥调控作用,对于深入理解砷剂靶向治疗CML分子机制提供了结构基础。

垂体瘤基因表达谱的建立及其发病分子机理的探讨

目的 建立垂体瘤组织基因表达谱并探讨其发病的分子机理。方法垂体生长激素瘤（ＧＨＰＡ）和无功能腺瘤（ＮＦＰＴ）ｃＤＮＡ文库构建，大规模表达序列标签（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔａｇｓ，ＥＳＴｓ）测序及生物信息学处理。结果 在已知基因中，参与基因蛋白表达者最高（分别为２９％和２８％），其次是代谢相关基因（分别为１８％和２１％），均较正常垂体为高（２３．２％和１４．３％）。ＧＨＰＡ中可同时表达泌乳素（ＰＲＬ）和生长激素（ＧＨ）；ＧＨＰＡ和正常垂体（ＮＰ）中ＧＳａ基因表达明显高于钙调素，而ＮＦＰＴ中则相反。在垂体瘤差异表达的与细胞分裂有关的基因中，有些与肿瘤的发生有关；发现了７４个在垂体瘤中高表达而正常垂体中不表达的未知基因的ＥＳＴｓ。结论 不同垂体瘤组织中其主要的信号转导途径可能有别；发现有些与细胞分裂有关的基因在ＮＦＰＴ或ＧＨＰＡ库中与ＮＰ库中表达不同。

变应性鼻炎患者血清总IgE和特异性IgE分析

目的分析深圳特区变应性鼻炎的吸入性过敏原分布特点,为该地区变应性鼻炎的预防、诊断和治疗提供依据。方法采用德国Mediwiss过敏原体外检测系统,对569例变应性鼻炎患者血清特异性IgE和总IgE检测结果进行回顾性分析。结果 569例变应性鼻炎患者中,吸入性过敏原中以户尘螨阳性率最高(62.6%),其次是蟑螂、狗毛和屋尘,阳性率分别为14.4%、14.1%和10.0%;男女性别间过敏原阳性率没有显著差异(P>0.05),但儿童组吸入性过敏原阳性率为87.8%,成人组吸入性过敏原阳性率为65.4%,两者差异显著(P<0.0001);血清总IgE阳性率为81.9%,吸入性过敏原特异性IgE阳性率为74.2%,总IgE阳性率明显高于特异性IgE阳性率,差异有统计学意义(P<0.0001)。结论户尘螨是诱发深圳特区变应性鼻炎的主要过敏原;儿童AR患者过敏原阳性率高于成人AR患者,可能与其免疫系统发育尚不完善有关;联合检测血清总IgE和过敏原特异性IgE可提高变应性鼻炎诊断的准确性。

应用IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF鉴定蛋白质泛素化修饰

近年来,在蛋白质研究中,特别是在蛋白质翻译后修饰(PTM)的研究中,生物质谱技术的应用越来越广泛,与纳升级HPLC的联合应用,使这一技术手段更加有效.针对泛素化在细胞功能调控中发挥关键作用的PTM的特点,将免疫沉淀、2Dnano-HPLC和基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱(IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF)有机整合,建立了天然状态下蛋白质泛素化位点的鉴定方法,并应用这一方法确定出K562细胞内具有酪氨酸激酶活性的蛋白c-ABL的泛素化位点.为定性鉴定生理和病理状态下内源性蛋白的泛素化修饰提供了借鉴.

变应性鼻炎患者食物性变应原特异性IgE分析

目的研究变应性鼻炎(AR)患者食物过敏的特点,探讨食入性变应原检测在AR诊断和预防中的意义。方法采用德国Mediwiss变应原体外检测系统对569例AR患者血清变应原特异性IgE(sIgE)检测结果进行回顾性分析。结果 AR患者常伴发的食入性变应原以虾(6.2.%)和蟹(5.4%)为主,其次是牛奶(3.7%)、腰果(3.5%)、芒果(2.5%)和鸡蛋白(1.6%);AR患者食入性变应原sIgE阳性率占15.1%,其中吸入性变应原sIgE同时阳性者占13.2%,单独食入性变应原sIgE阳性者仅占1.9%;儿童AR患者食物过敏率为19.7%,成人AR患者食物过敏率为10.3%,二者比较差异有统计学意义(P<0.01);儿童AR患者伴发的食入性变应原以牛奶、虾、蟹和鸡蛋白为主,而成人AR患者则以虾、蟹、腰果和芒果为主。结论 AR患者食物过敏常与吸入性变应原过敏同时存在,儿童AR患者应同时检测吸入性和食入性变应原sIgE,食入性变应原检测在预测过敏进程和预防过敏性鼻炎的发生中具有潜在的应用价值。

组蛋白赖氨酸甲基化在表观遗传调控中的作用

组蛋白赖氨酸的甲基化在表观遗传调控中起着关键作用。组蛋白H3的K4、K9、K27、K36、K79和H4的K20均可被甲基化。组蛋白H3第9位赖氨酸的甲基化与基因的失活相关连;组蛋白H3第4位赖氨酸和第36位赖氨酸的甲基化与基因的激活相关连;组蛋白H3第27位赖氨酸的甲基化与同源盒基因沉默、X染色体失活、基因印记等基因沉默现象有关;组蛋白H3第79位赖氨酸的甲基化与防止基因失活和DNA修复有关。与此同时,组蛋白的去甲基化也受到更为广泛的关注。

新的生长激素异形体基因的发现及全长cDNA的克隆

在通过大规模 ESTS技术对垂体基因表达谱的研究中 ,从垂体组织产生了 72 2 2个 ESTS,有385个 ESTs是代表生长激素 (GH)基因的 ,其中 1个为中间缺失 1 38bp的 GH异形体基因 ,并经巢式 RT- PCR及测序证实 ;该基因编码 1 71个氨基酸的前肽 ,去除信号肽后 ,其成熟肽由 1 45个氨基酸组成 ;经生物信息学处理 ,其分子量大小约 1 7k D;与正常生长激素分子内有 2个 GH受体结合位点不同 ,该新的 GH异形体分子内仅有一个生长激素受体的结合位点 .研究结果揭示 :正常垂体内存在着新的 GH异形体基因 ,该基因可能编码外周血中 1 6k D的生长激素 ;其功能可能为 2 2k D GH的生理拮挤剂 .

同位素标签技术在人肾小管上皮细胞蛋白质组学研究中的应用

目的建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的同位素标签试剂(iTRAQ)标记技术,为进一步研究奠定基础。方法将人肾小管上皮细胞株HK-2通过细胞裂解、丙酮沉淀、蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和质谱鉴定,研究iTRAQ在HK-2细胞的标记情况和蛋白质组学。结果通过质谱检测,检测到带有iTRAQ标记肽段。随机选取20个前体离子,通过3次重复试验,鉴定出iTRAQ标记多肽肽段分别为17、15和18个,标记效率在75.5%～90.0%,且组间标记效率差异无统计学意义(P>0.05)。结论iTRAQ可以在HK-2细胞中标记效果满意,且重复性较好,为进一步研究肾脏疾病的蛋白质组学奠定了基础。

盐酸右美托咪啶在人工电子耳蜗植入术患儿镇痛中的应用及护理观察

目的：探讨盐酸右美托咪啶对于接受人工电子耳蜗植入术患儿进行镇痛的效果。方法：选择2012年12月~2014年12月我院收治的接受人工电子耳蜗植入术患儿作为研究对象,在均接受静吸复合全麻的同时,试验组于手术结束前30 min给予盐酸右美托咪啶,对照组则予以生理盐水。将两组患儿用药前后的心率（HR）以及平均动脉压（MAP）变化情况进行对比,同时将两组患儿的拔管时间、睁眼时间、躁动评分以及不良反应发生情况进行对比。结果：两组患儿在用药前后HR比较,组间、不同时间点、组间与不同时间点交互作用差异有统计学意义（P〈0.05）。两组患儿MAP比较组间、不同时间点、组间与不同时间点交互作用差异无统计学意义（P〉0.05）。两组患儿拔管时间以及睁眼时间比较无统计学意义（P〉0.05）。试验组患儿躁动评分明显低于对照组（P〈0.05）,患儿不良反应发生例数低于对照组（P〈0.05）。结论：应用右美托咪啶对于接受人工电子耳蜗植入术患儿进行镇痛,可以产生显著效果,能够有效降低患儿术后不良反应发生率,安全性高,具有极大推广应用价值。

ATRA诱导上调基因RIG-C的cDNA克隆和序列分析及蛋白表达

目的 克隆和表达维甲酸诱导上调的新基因RIG-C。方法 运用Blast、pfam等生物信息学手段对RIG-C的全长cDNA序列进行结构与功能预测;将RIG-C全长阅读框架插入原核表达载体pET22b中,在JM109(DE3)菌株中进行诱导表达;将全长RIG-C插入真核表达的绿荧光蛋白载体pEGFP-C1中,转染NIH3T3细胞以观察RIG-C的亚细胞定位。结果 RIG-C基因cDNA全长1266 bp,编码421个氨基酸,N端具有多个WD40结构域,C端有一个SOCS家族典型结构。原核表达的RIG-C蛋白大小约45 kd,NIH 3T3细胞表达的RIG-C定位于细胞浆。结论 克隆和表达了新基因RIG-C,为进一步研究其生物学功能和蛋白质的空间结构奠定了基础。

造血干/祖细胞大规模测序克隆的一个ABC转运体蛋白基因

ＡＢＣ转运体家族是已知的最大基因家族之一〔１〕，在进化上具高度的保守性，其成员含有ＡＴＰ结合小匣（ＡＴＰｂｉｎｄｉｎｇｃａｓｓｅｔｅ，ＡＢＣ）。最近，我们在对具造血功能的ＣＤ３４＋造血干／祖细胞（ＨＳＰＣ）的基因表达谱的研究中，通过大规模的ｃＤＮＡ测...