纳米顺铂对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

纳米顺铂通过纳米载体包载顺铂进而发挥抗肿瘤作用,但纳米顺铂在杀死肿瘤细胞的同时,其对动物生殖细胞的影响尚不明确,试验通过在卵母细胞成熟培养液中添加顺铂及纳米顺铂对比了二者对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。采集ICR小鼠未成熟卵母细胞并随机分为对照组、顺铂组和纳米顺铂组,体外培养16 h后统计卵母细胞成熟率;并对比卵丘卵母细胞复合体和裸卵经顺铂和纳米顺铂处理后减数分裂进程的差异,以探究颗粒细胞对纳米顺铂影响卵母细胞减数分裂的作用。通过免疫荧光染色检测染色体、纺锤体及肌动蛋白帽的形态变化以确定纳米顺铂对卵母细胞体外成熟过程中细胞骨架的影响。结果显示,顺铂组卵母细胞成熟率显著低于对照组,纳米顺铂组卵母细胞成熟率显著高于高浓度顺铂组,去除颗粒细胞后,纳米顺铂组停滞于GV期卵母细胞比例显著低于高浓度顺铂组。与对照组相比,顺铂组和纳米顺铂组的染色体排列正常率和细胞骨架形态正常率均显著降低,但纳米顺铂组染色体排列正常率显著高于顺铂组,两组之间细胞骨架正常率无显著性差异。结果提示,纳米顺铂通过增加减数分裂的完成性及维持核染色体的正常排布来减弱对小鼠卵母细胞的毒性作用,但不能改善顺铂对卵母细胞骨架的损伤,颗粒细胞能够在一定程度上降低纳米顺铂对卵母细胞减数分裂恢复的抑制作用。

毛序棘豆内生真菌分离鉴定及系统进化分析

为探明毛序棘豆中内生真菌的种属及种群分布情况,对采集于甘肃省通渭县毛序棘豆样品,运用表面消毒法消毒样品后进行内生真菌分离,采用形态学和ITS序列分析技术对所得菌株进行种属鉴定,并通过MEGA5.05软件进行系统进化分析。结果显示,从毛序棘豆(根、茎、叶)中共分离得到内生真菌29株,经鉴定,分属于4纲、5目、6科、10属;其中茎的分离率(39.13%)最高,根(23.91%)次之,叶(11.11%)最少;而链格孢属(Alternaria sp.)和镰刀菌属(Fusariumsp.)是毛序棘豆内生真菌的优势菌属,其相对分离频率分别为27.59%和17.24%;木霉菌属(Trichodermasp.)为毛序棘豆内分布最广泛的菌属,在根、茎、叶中均有分布;将所得菌株作系统进化分析,并根据其亲缘关系远近分为Ⅰ和Ⅱ两大种群。本试验结果表明,毛序棘豆内生真菌数量、种类与种属分布存在明显组织差异,茎是内生真菌侵染和定植的主要部位且真菌多样性最高。

XY性反转雌性小鼠的鉴定和初步分析

旨在繁育并鉴定XY雌性小鼠,初步分析其生殖能力和性反转的机制,为小鼠发育过程中性别决定相关研究提供动物模型。XY雌性小鼠的鉴定分为表型鉴定和基因型鉴定两步:令B6.XY^TIR雄性小鼠与野生型B6雌性小鼠自然交配,选用30、60、90日龄仔鼠,观察其外生殖器特征和肛殖距以鉴定雌雄;处死交配后17.5天的孕鼠,取胎鼠,根据其性腺形态学和生殖细胞类型鉴定雌雄(表型鉴定)。提取仔鼠或胎鼠DNA,设计引物扩增Zfy基因(Y染色体上的特有基因),以确定其性染色体为XX或XY(基因型鉴定),结合表型鉴定,从而得到B6.XY^TIR雌性小鼠。本研究同时用全组织免疫荧光染色的方法分析胎儿期性腺的分化,用形态学观察的方法观察出生后小鼠内生殖系统,通过测序对Zfy基因的序列进行初步分析。本研究通过表型鉴定和基因型鉴定得到了一种XY性反转雌性小鼠;通过对出生小鼠内生殖系统的观察,发现其拥有与野生型XX雌鼠相似的卵巢、输卵管和子宫结构;同时初步研究了性腺分化过程中生殖细胞的分布,发现XY雌性胎鼠生殖细胞分布类型与野生型类似;在扩增Zfy基因进行基因型鉴定的同时,测序表明B6.XY^TIR的后代中,XY雄性和XY雌性均只有Zfy-1的基因,而未能扩增到Zfy-2基因;XY雌鼠在所有XY小鼠(99只)中所占的比例为47.47%。XY雌性小鼠拥有一套完整的雌性生殖系统,且性反转在胚胎发育过程中已经确立;B6.XY^TIR的Y染色体上可能缺失Zfy-2基因,推测其与性反转的发生有关系;本试验结果可为深入研究性腺分化和生殖细胞发生提供独特的视角。