葛根素对中波紫外线损伤HaCaT细胞的抗氧化作用

目的研究葛根素不同处理方式对其抗氧化能力的影响。方法以30mJ/cm2中波紫外线(UVB)和1.0mg/mL葛根素处理HaCaT细胞。实验分为阴性对照组、模型组、UVB照射前给药组、UVB照射后给药组和UVB照射前后给药组。UVB照射后24h收集细胞,检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)。结果 UVB照射前给药处理和UVB照射前后给药处理,使细胞内T-AOC、CAT、GSH-Px升高,而ROS和MDA降低(P<0.05);UVB照射后给药处理可以升高SOD(P<0.05),但对其他指标无影响(P>0.05)。结论葛根素不同处理方式影响其抗氧化能力,其中预防性结合治疗性处理效果最佳,单纯预防性处理其次,单纯治疗性处理最差。

扇贝多肽对UVB损伤HaCaT细胞的抗氧化作用

目的研究扇贝多肽(PCF)对UVB损伤HaCaT细胞的抗氧化作用。方法HaCaT细胞与PCF孵育1h后,接受UVB辐射,继续孵育18h后,采用酶化学法测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、过氧化氢酶(CAT)活性、以及测定其总抗氧化能力(TAOC)、丙二醛(MDA)水平。结果PCF能提高HaCaT细胞内抗氧化酶SOD,GSHPx,CAT活性,增强细胞总抗氧化能力并减少脂质过氧化产物MDA的产生。结论PCF能增加细胞内抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化反应,具有抗氧化作用。

秋茄枝乙醇提取物对2型糖尿病大鼠肝脏氧化损伤的保护作用

目的研究秋茄枝乙醇提取物(EEK)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏氧化损伤的保护作用。方法以高脂饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)建立T2DM大鼠模型。大鼠分为正常对照组,T2DM模型组,二甲双胍组,EEK低、中、高剂量组。大鼠给药4周后采血测定空腹血糖(FBG)。动物处死后取肝脏称重,计算肝脏系数,然后制备肝脏组织匀浆,测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量。结果 EEK减小T2DM大鼠肝脏体积,降低肝脏系数、血糖和MDA,而升高肝脏SOD、GSH-Px、CAT活性。结论 EEK能降低血糖,并通过抗氧化作用保护2型糖尿病大鼠肝脏。

秋茄枝乙醇提取物在减轻2型糖尿病大鼠胰腺损伤中的作用

目的:探讨秋茄枝乙醇提取物(ethanol extract from kandelia candel trunk,EEKCT)在减轻2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠胰腺损伤中的作用。方法 :使用喂养高脂饲料联合注射小剂量链脲佐菌素的方法制作T2DM大鼠。对T2DM大鼠用EEKCT连续进行4周的灌胃后,处死大鼠,取出其胰腺进行称重,并计算其胰腺系数。对T2DM大鼠的胰腺进行组织匀浆,测定其匀浆液的总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性和丙二醛的水平。结果 :EEKCT可增加2型糖尿病大鼠的胰腺系数和胰腺的T-AOC,提高其胰腺中SOD、过氧化氢酶及GSH-Px的活性,同时降低其胰腺中丙二醛的水平。结论 :EEKCT具有抗氧化的活性,对T2DM大鼠的胰腺具有保护作用。

cTnI、AST及CK在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值的比较

目的:探讨心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值。方法:选取32只SD大鼠随机分为四组,心肌损伤组,单次背部皮下注射异丙肾上腺素;骨骼肌损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因;联合损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因及背部皮下异丙肾上腺素。正常对照组,不给予任何药物。予给药后24h,检测血清AST,CK及cTnI,常规HE染色观察骨骼肌和心肌受损情况。结果:心肌损伤组和联合损伤组血清cTnI均显著高于正常对照组和骨骼肌损伤组,差异具有统计学意义(P<0.01),而联合损伤组和心肌损伤组AST与骨骼肌损伤组比较,差异无统计学意义(P>0.05),心肌损伤组CK与骨骼肌损伤组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:cTnI在鉴别大鼠心肌及骨骼肌损伤上较AST、CK有较高的敏感性,并且在一定程度上能够降低误诊及漏诊率。

UVB对HaCaT细胞凋亡的影响

①目的 探讨紫外线B(UVB)对HaCaT细胞凋亡的影响及其作用机制。②方法 取培养的HaCaT细胞 ,用 30mJ/cm2 的UVB照射后继续培养 18h ,以流式细胞术检测细胞的凋亡率、线粒体膜电位和细胞内游离Ca2 +水平 ,用透射电镜观察细胞的超微结构。③结果 UVB照射增加了HaCaT细胞的凋亡率 (t =5 .2 36 ,P <0 .0 1) ,降低了线粒体膜电位 (t=6 .897,P <0 .0 1) ,升高了细胞内游离Ca2 + 水平 (t =6 .0 4 6 ,P <0 .0 1)。细胞的超微结构因UVB照射而遭到严重破坏 ,胞浆内的细胞器大量减少 ,线粒体严重空泡化 ,髓样小体形成 ,核内染色质成块并边聚。④结论 线粒体膜电位的下降和胞内游离Ca2 +

环磷酰胺对以KLH为特异性抗原BALB/c小鼠TDAR实验定量分析

目的:利用环磷酰胺诱导BALB/c小鼠免疫功能异常动物模型,考察以血蓝蛋白(KLH)作为特异性抗原,T细胞依赖性抗体反应(TDAR)实验定量分析方法能否预测药物的免疫抑制作用。方法:平行对照组和环磷酰胺组给予注射环磷酰胺进行造模,阴性对照组不予处理;阴性对照组和环磷酰胺组经腹腔注射KLH进行免疫;应用流式技术分析外周血淋巴细胞亚群变化;采用间接ELISA法检测血清KLH IgG抗体含量;HE染色观察脾脏组织学改变。结果:进行免疫抑制的实验动物外周血CD3 +CD4 +、CD3 +CD8 +T淋巴细胞以及B淋巴细胞数量明显减少,与阴性对照相比差异具有统计学意义( P <0.05),同时脾脏内淋巴细胞数量减少;TDAR定量检测结果显示环磷酰胺能够降低外周血清KLH IgG抗体产生量,较阴性对照组相比差异具有统计学意义( P <0.05),而TDAR实验定性分析差异无统计学意义( P >0.05)。结论: TDAR实验定量分析能够很好地反映药物对机体的免疫抑制作用。

秋茄枝乙醇提取物降低高脂膳食大鼠血脂

目的研究秋茄枝乙醇提取物(EEK)对高脂膳食大鼠血脂的影响。方法高脂饲料喂养大鼠4周以建立高血脂模型,然后大鼠给药4周,采血测定总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)。结果低、中、高剂量EEK均降低大鼠TG、TC、FFA、LDL-C水平,但似乎对HDL-C没有影响。结论提示EEK对高脂膳食大鼠具有降血脂作用。

cTnI、AST及CK在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值的比较

目的探讨心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnI)在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值。方法 32只SD大鼠随机分为4组:心肌损伤组,单次背部皮下注射异丙肾上腺素;骨骼肌损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因;联合损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因及背部皮下异丙肾上腺素;正常对照组,不给予任何药物。予给药后24h,检测血清AST,CK及cTnI,常规HE染色观察骨骼肌和心肌受损情况。结果心肌损伤组和联合损伤组血清cTnI均显著高于正常对照组和骨骼肌损伤组(P<0.01),而联合损伤组和心肌损伤组AST与骨骼肌损伤组无明显差异(P>0.05),心肌损伤组CK与骨骼肌损伤组无明显差异(P>0.05)。结论cTnI在鉴别大鼠心肌及骨骼肌损伤上较AST、CK有较高的敏感性,并且在一定程度上能够降低误诊及漏诊率。

大鼠门静脉高压形成过程中血浆内毒素水平与肠道iNOS的表达

在肝硬化形成过程中常伴随着门静脉高压（portalhy—pertension，PHT）的形成，其血流动力变化过程中肠道高动力循环的形成是PHT维持和发展的重要条件。各种因素如内毒素，内皮素-1（endothelin-1，ET-1）等通过刺激血管舒张剂如NO等可引起肠道血管扩张而使门脉血流增加。

大鼠肝窦内皮细胞扫描电镜制样方法的改良

目的:改良大鼠肝窦内皮细胞扫描电镜制样方法,以期得到优质图像。方法:采用红细胞裂解液去除红细胞,然后样本划痕制作断裂面的方法制备电镜样本。结果:改良法可清晰观察肝窦内皮细胞的窗孔。结论:通过裂解红细胞和样本划痕的方法制备样本,可以获得优质肝窦内皮细胞扫描电镜图像。

葛根素对长波紫外线诱导的HaCaT细胞损伤的保护作用和机制研究

目的:研究葛根素对长波紫外线(UVA)诱导的人永生化表皮细胞(HaCaT细胞)损伤的保护作用和机制.方法:将五份HaCaT细胞分别设为阴性对照组、UVA模型组和各浓度葛根素预处理组(低浓度葛根素预处理组、中浓度葛根素预处理组和高浓度葛根素预处理组).对除阴性对照组HaCaT细胞外的其他四组HaCaT细胞均采用UVA进行照射,制作UVA诱导的HaCaT细胞损伤模型.为各浓度葛根素预处理组HaCaT细胞均采用不同浓度的葛根素进行预处理,然后观察五组HaCaT细胞的存活、凋亡和坏死情况及葛根素对HaCaT细胞内p38蛋白、p-p38蛋白和Nrf2蛋白表达水平的影响.结果:各浓度葛根素预处理组HaCaT细胞的存活率均高于UVA模型组,其晚期凋亡、坏死率均低于UVA模型组,P<0.05.高浓度葛根素预处理组HaCaT细胞的早期凋亡率低于UVA模型组,P<0.05.用不同浓度的葛根素对HaCaT细胞进行预处理后,HaCaT细胞中的p-p38蛋白、p38蛋白和Nrf2蛋白的表达水平均明显下降.结论:葛根素能减轻UVA诱导的HaCaT细胞损伤,其作用机制可能与葛根素可抑制p38蛋白的磷酸化及激活Nrf2蛋白的抗氧化信号通路有关.

荧光定量PCR定量检测5种假丝酵母菌方法的建立

目的建立并评价从血液标本中检测5种假丝酵母菌的荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法。方法以5种假丝酵母菌共有的高度保守序列为靶序列,设计特异引物和探针进行检测,优化定量PCR体系,并进行方法学评价。结果建立的荧光定量PCR方法,其线性范围为10^1-10^9CFU/m L;灵敏度为5 CFU/m L;批内和批间CV值均〈5%;对19份模拟血液标本进行检测,其中分别含有5种假丝酵母菌的标本均为阳性,而分别含有常见血液感染曲霉菌和细菌的检测结果均为阴性。结论建立的检测血中假丝酵母菌荧光定量PCR方法快速、准确,结果可靠,可对常见的临床血液感染假丝酵母菌进行定量检测。

海莲叶提取物对胃癌细胞增殖的抑制作用及对小鼠急性毒性实验

目的研究海莲叶提取物(BSLE)对人胃癌细胞增殖的抑制作用及其对小鼠的急性毒性。方法先以CCK-8细胞增殖抑制实验测试BSLE对人胃癌细胞SGC-7901和MGC80-3的抑制作用。再以流式细胞术观察BSLE对人胃癌细胞周期的影响。然后建立人胃癌细胞SGC-7901和MGC80-3的裸小鼠皮下移植瘤模型,观察BSLE对胃癌细胞皮下移植瘤的抑制作用。最后将BSLE以9.6g/kg剂量对小鼠单次给药,观察其急性毒性大小。结果 BSLE在细胞实验中剂量依赖性地抑制2种常见的胃腺癌细胞SGC-7901和MGC80-3的增殖,对这2种细胞的IC50分别为31.02和35.23μg/mL。接下来的流式细胞术结果显示BSLE能增加肿瘤细胞进入G0/G1期的细胞比率。在裸小鼠抑瘤实验中,BSLE随着剂量增加对胃癌细胞皮下移植瘤生长的抑制作用逐渐增强,相对肿瘤增殖率(T/C)均低于40%。在急性毒性实验中,BSLE对小鼠的毒性主要表现为腹泻和体质量增长缓慢。结论 BSLE在体内和体外研究中均显示了对胃癌细胞增殖的抑制作用,其作用机理可能与阻滞细胞G0/G1期有关。在毒性方面,BSLE对小鼠的急性毒性反应较少且症状轻。

秋茄枝乙醇提取物改善2型糖尿病大鼠血糖和血脂异常

目的研究秋茄枝乙醇提取物(EEK)对2型糖尿病(T2DM)大鼠血糖和血脂的影响。方法以高脂饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型。EEK低、中、高剂量组(0.25,1,2 g.kg-1)给药4周后,测定空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)和空腹胰岛素(FINS)。结果 EEK未能影响T2DM大鼠体重,但可降低FINS、FBG、TC、TG、FFA和LDL-C,同时升高HDL-C。结论 EEK能够通过减轻胰岛素抵抗,增加机体对胰岛素的敏感性,从而降低血糖和改善血脂异常。

葛根素通过神经酰胺通路抑制UVB诱导的HaCaT细胞DNA损伤

研究葛根素(puerarin,PUE)对UVB诱导的HaCaT细胞DNA损伤的影响和作用机制。葛根素预处理细胞以30 mJ.cm2 UVB照射,24 h后以彗星电泳实验检测DNA损伤,薄层色谱法和气相色谱法检测神经酰胺,流式细胞术检测细胞内游离钙离子,Western blotting法检测p38蛋白磷酸化水平。结果显示,UVB模型组细胞DNA损伤、细胞内游离钙离子、神经酰胺、磷酸化p38蛋白显著增加;与UVB模型组相比,各葛根素预处理组的DNA损伤、细胞内游离钙离子、神经酰胺、磷酸化p38蛋白均减少。结果表明,葛根素首先抑制神经酰胺蓄积,阻止下游的细胞内钙离子升高和p38 MAPK通路激活,从而减轻UVB诱导的HaCaT细胞DNA损伤。

秋茄枝乙醇提取物减轻链脲佐菌素诱导的大鼠肝脏和胰腺病理损伤

目的:研究秋茄枝乙醇提取物(EEK)对链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏和胰腺组织病理结构的影响。方法:以高脂饲料喂养联合STZ建立T2DM大鼠模型。大鼠分为为正常对照组、T2DM模型组、二甲双胍组、EEK低、中、高剂量组。大鼠给药4周后处死,取肝脏和胰腺进行组织病理学检查。结果:随着EEK剂量的增加,大鼠肝脏和胰岛组织的病理损伤逐步减轻。结论:EEK有助于修复STZ诱导的T2DM大鼠受损的肝脏和胰岛组织。

预防性葛根素抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡

目的探讨预防性葛根素对UVB诱导的HaCa T细胞凋亡的影响。方法 HaCa T细胞与0.49、1.0mg.mL-1葛根素孵育1h后,以30mJ.cm-2UVB直接照射细胞,24h后收集细胞测定细胞凋亡率和p53蛋白。结果葛根素预处理HaCa T细胞的凋亡率下降,同时细胞表达的p53蛋白减少。结论预防性葛根素抑制UVB诱导的HaCa T细胞凋亡,可能与下调p53蛋白有关。

海莲叶乙醇提取物的抗氧化作用和对黑素的抑制作用

目的研究海莲叶乙醇提取物(BLE60)的抗氧化和抑制黑素作用,并对它的皮肤刺激性进行评价。方法首先通过检测二苯代苦味酰肼(DPPH)自由基和细胞活性氧(ROS)研究BLE60的抗氧化活性,接着在小鼠B16黑色素瘤细胞上研究BLE60对酪氨酸酶和黑素的抑制作用,然后以Western blotting检测BLE60对酪氨酸酶表达的影响,最后通过家兔皮肤多次给药研究BLE60的皮肤刺激性。结果 BLE60能清除DPPH自由基和UVA诱导的ROS,同时也抑制细胞酪氨酸酶活性、减少黑素产生和酪氨酸酶表达。BLE60多次给药对家兔皮肤无刺激性。结论 BLE60具有抗氧化和抑制黑素活性,且对皮肤无刺激性。BLE60主要通过下调酪氨酸酶表达来降低酪氨酸酶活性,从而抑制黑素产生。

秋茄乙醇提取物对胰岛素抵抗大鼠相关指标的影响

目的观察秋茄(kandelia candel)乙醇提取物(QQ)对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性和糖耐量的影响,探讨秋茄对2型糖尿病的防治作用。方法动物连续高脂饲料喂养8周后,第5周起同时预防性给予QQ高、中、低剂量处理4周,在8周末采血测定空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS),测定糖耐量,并计算出胰岛素敏感指数(ISI)。结果 QQ高、中、低剂量组经预防性给药4周后明显改善胰岛素敏感指数,并改善糖耐量。结论 QQ可提高胰岛素敏感性,可防止和控制高脂高热量膳食诱导胰岛素抵抗的发生。