转化生长因子-β1在肝细胞性肝癌中表达增强

目的转化生长因子－β１（ＴＧＦβ１）在细胞生长的负性调节上有重要作用，是肝细胞生长和增殖的强抑制物但肝癌（ＨＣＣ）患者肝组织中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达高．现检测ＨＣＣ患者外周血中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达，血清ＴＧＦβ１水平，以及肝组织中ＴＧＦβⅡ型受体（ＴＧＦβＲⅡ）的表达．方法ＨＣＣ患者外周血分离单个核细胞（ＰＢＭＣ），提取总ＲＮＡ，用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术扩增ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ．血清ＴＧＦβ１水平测定用Ｐｒｏｍｅｇａ公司产的试剂盒．肝组织ＴＧＦβＲⅡ表达的分析用原位杂交法．结果ＨＣＣ患者２０例ＰＢＭＣＴＧＦβ１ｍＲＮＡ用ＲＴＰＣＲ检测阳性率达７０％，对照组阴性．ＨＣＣ患者４０例血清ＴＧＦβ１水平（２７５８ｍｇ／Ｌ±８１０ｍｇ／Ｌ）明显高于对照组（８２７ｍｇ／Ｌ±３７２ｍｇ／Ｌ）．原位杂交表明，ＴＧＦβＲⅡ在ＨＣＣ细胞的胞质中有弱表达．结论ＨＣＣ患者ＴＧＦβ１基因在转录水平和翻译水平上均显示表达增强．ＰＢＭＣ有可能代替肝组织用以检测ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达应用于基础与临床的研究．

乙型肝炎与肝癌关系

乙型肝炎病毒(HBV)感染不仅能引起急性和慢性肝炎、肝硬变[1-4],而且由于持续HBV感染和宿主免疫反应,终可导致肝细胞癌(HCC)[5-27].过去对其机制不清,近年由于分子生物学、细胞生物学先进技术的应用,这方面研究取得重大进展[28-43],特别是HBV X基因的表达产物(HBx)与HCC的关系成为当前研究的热点,关于其机制现有多种观点提出,特别是HBx与抑癌基因p53作用的机制、HBx的基因突变对其功能的影响,以及HBx通过调节细胞信号传导途径激活转录的机制等,均在分子水平上进行了深入研究[44-83].据近期文献报道,除上述外HBx还有其他重要功能,如对于细胞增殖和细胞凋亡的作用及在不同条件下的不同效应.所以HBx被认为是一多功能的调节因子[78-87].台湾儿童广泛推行乙肝免疫,使HCC发病率明显下降的报道引起广泛重视,这提示免疫是预防肝癌的有效措施,也证明HBV感染与HCC发病的密切联系[88-97].

大肠杆菌合成的乙型肝炎病毒核心抗原的研究 HBcAg基因在大肠杆菌内和膜上表达

前言乙肝病毒c基因的克隆和表达的研究,国内外近年来有多篇报道。近有学者提出乙肝核心抗原(HBcAg)的前c区(PreC)可能为HBcAg分泌所必须,它使后者嵌合在肝细胞膜上成为靶抗原,产生免疫反应而造成肝细胞的损伤。本文将为HBcAg编码的c基因分别和载体pUR222及pⅠN-ⅡC重组得到重组质粒pHW202和pDC022。

肠杆菌膜蛋白基因的研究——Ⅳ.大肠杆菌染色体DNA Hind Ⅲ酶解片段上

大肠杆菌野生株JE5506(1pp^+)和突变株JE5505(1pp^-)的染色体DNA的Hind Ⅲ酶解片段,与一带有大肠杆菌外膜脂蛋白信号肽基因的107bp探针,在20℃下进行DNA-DNA杂交,在25kb和3.4kb处各出现一杂交带。该两片段与载体质粒pBR322在体外进行DNA重组,分别得到pHWO14和pHWO15两个重组质粒。该两重组质粒的限制性内切酶酶切图谱,Southern印迹及与107bp探针杂交的实验结果,进一步证明了上述两个DNA片段上存在有与脂蛋白信号肽基因同源的序列。pHWO15质粒编码的蛋白质经鉴定证明是脂蛋白(见另文发表)。pHWO14质粒在微细胞内的表达产物虽不是脂蛋白,但DNA序列分析证明它与脂蛋白信号肽基因同源的序列是信号肽断裂位点周围高度保守的15个碱基对。

原发性肝癌患者肝组织中乙型肝炎病毒X蛋白与P53蛋白的结合

癌抑制基因p53发生突变是导致肝癌发生的重要因素之一。突变的p53基因表达的p53蛋白稳定性提高易被检出。作者前已报道,免疫组织化学分析10例肝癌标本中HBx蛋白基因全部阳性,但p53蛋白仅有2例阳性。设想高度表达的HBx蛋白有可能在肝组织中与p53蛋白作用形成复合物。为了证实此设想,本文分别用抗HBx单克隆抗体和抗p53单克隆抗体作免疫沉淀和免疫印迹分析表明,在肝癌患者肝组织中HBx蛋白可与p53蛋白作用产生复合物,可能影响p53基因的抑癌功能。此为HBx蛋白在肝癌发病中起重要作用的一个方面。

原发性肝癌患者外周血中甲胎蛋白mRNA的意义

目的由于ＰＣＲ技术的应用，血循环中癌细胞的检测近有很大进展．本文用ＲＴＰＣＲ检测肝癌（ＨＣＣ）和其他慢性肝病患者外周血中ＡＦＰｍＲＮＡ，藉以反映ＨＣＣ细胞的存在，并与其他血清标记物比较．方法ＨＣＣ患者２２例，肝硬变和慢性乙型肝炎患者各１０例，健康成人受试者（对照）５例．取患者和对照的外周血，分离单核细胞，提取总ＲＮＡ并作电泳鉴定，用合成的两对引物进行巢式ＲＴＰＣＲ扩增ＡＦＰｍＲＮＡ，同时分析血清ＡＦＰ和乙肝标记物．结果ＡＦＰｍＲＮＡ在１３例ＨＣＣ（５９１％），２例肝硬变（２００％）患者外周血中测到，其余标本均为阴性．ＡＦＰｍＲＮＡ阳性的１３例患者肿瘤均大于５ｃｍ，为晚期患者．在该１３例患者中仅有６例（４６１％）在血清中测到ＡＦＰ，但有１２例（９２３％）ＨＢｓＡｇ，抗ＨＢｅ，抗ＨＢｃ全阳性，而ＡＦＰｍＲＮＡ阴性的５例该３标记物全阴性．结论ＲＴＰＣＲ扩增ＡＦＰｍＲＮＡ是检测ＨＣＣ和肝硬变患者循环肝癌细胞的敏感方法．患者外周血中的ＡＦＰｍＲＮＡ有可能作为肿瘤转移和复发的标记对ＨＣＣ诊断、随访观察和疗效评定有较大临床意义．

山莨菪碱对心肌缺血-再灌注损伤的保护作用和实验研究

用家犬制造实验性心肌缺血-再灌注动物模型,在心电图监测下,用间接和直接检测技术,在不同时间内分别检测汇常区,缺血-再灌注心肌的丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果,缺血-再灌注区心肌MDA高于正常区(P<0.05),GSH-px活性较正常区低,SOD活性在再灌注5min后持续上升,缺血30min后再灌注心肌标本直接低温测定电子自旋共振波谱显示氧自由基信号增强,提示心肌缺血后再灌注有氧自由基的异常增加,为心肌缺血一再灌注损伤的发生提供了依据。治疗组在再灌注前给子足量山莨菪碱,再灌后体内脂质过氧化损伤显著减轻,并呈量效关系。作者在临床抢救危重病患者28例取得满意效果,说明山莨菪碱能减少氧自由基的产生,防止膜的脂质过氧化损伤,提高细胞对缺血缺氧的耐受性。认为在再灌注的即时给予足量山莨菪碱配合其它抢救措施,可以预防或减轻再灌注损伤。

HBV X基因在大肠杆菌中高效表达及血清抗X抗体检测

本文分别用大肠杆菌(E.colf)的Lpp启动子和M13噬菌体的geneⅡ启动子表达了分子量约为17 kDa的HBx蛋白,并以抗合成X多肽抗血清和抗X融合蛋白抗血清对该重组蛋白进行了分析鉴定(用ELISA法和Western印迹法),然后用重组X蛋白检测肝病病人血清中抗X抗体。我们采用一种改进的ELISA方法检测了212份血清标本,结果表明:肝硬化,慢活肝、肝癌、慢迁肝和急性乙型肝炎病人血清中抗X抗体阳性率分别为49.3%、47.6%、37.8%、29.6,6和40.0,6,高滴度的抗体主要存在于肝硬化和慢活肝病人血清中。

分子杂交化学发光法检测血清中乙型肝炎病毒DNA

目的 用非放射性的异羟基洋地黄毒甙 (地高辛 ,Dig)标记探针与靶DNA杂交 ,结合化学发光检测系统检测乙肝患者血清中HBVDNA。方法 应用宝灵曼公司生产的DigDNA标记检测试剂盒。将Dig标记的HBVDNA探针与点印迹在尼龙膜或硝酸纤维素膜上的靶DNA杂交 ,杂交后的膜与Dig AP抗体保温 ,然后用化学发光底物CSPD与之作用 ,导致在波长 4 77nm处发光 ,感光于X光底片上。结果 待检的 12 9份血清标本 ,用此法检测HBVDNA阳性率达 5 8 4 % ,敏感性 2 0pg～0 5 pg。为了比较 ,3 2 9份血清标本用显色法测定 ,阳性率 4 5 0 % ,敏感性 5 0 pg～ 1 0 pg。对照组呈阴性结果。 结论 Dig标记探针分子杂交化学发光法具有较高特异性、敏感性和简便等优点 ,可用于血清中HBVDNA的检测。

用DNA重组技术获得乙型肝炎病毒e抗原及其在临床检测中的应用

HBeAg和抗-HBe是乙型肝炎的经典标志物。HBeAg基因与HBcAg基因在DNA C区上相重叠。为要获得重组DNA衍生的HBeAg,本文从adw_2亚型HBV 3.2 kb全长DNA上切取带有HBc基因的BamHI-EcoRI片段,用Bal31和Hpa Ⅱ酶处理产生一系列长度不同的片段,与载体pUR222和pUC 18构成不同的重组质粒,转化到大肠杆菌。通过平板筛选、质粒酶切图谱和抗原抗体反应等筛到高效表达HBeAg的转化株YG301和YG302,中和试验证明了重组HBeAg的血清学特异性。用凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析对其进行提纯并用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合Western印迹法进行纯度鉴定、含量分析和分子量测定。重组HBeAg制品具有高活性、稳定和安全等特点,实验证明它可以代替血源HBeAg制成酶联药盒用于乙肝诊断检测。

乙型肝炎病毒X基因的蛋白产物对HLA-DR表达的效应

目的 了解HBVX基因蛋白产物对HLA -DR表达的效应。方法 用野生型HBVX基因与真核载体质粒构建重组表达载体质粒pWHXⅡ转染HepG 2细胞。用PCR、Southern印迹、ELISA及Western印迹等分析鉴定目的基因DNA片段与其在转染细胞中的表达产物HBVX蛋白。将带重组质粒pWHXⅡ的HepG 2细胞的和带有HBV全基因组的 2 2 15细胞 ,在相同条件下用间接免疫荧光分析和免疫酶细胞化学技术检测。结果 在转染的HepG 2细胞和 2 2 15细胞表面均清晰地显示有HLA -DR表达 ,而对照组即不带质粒或只带载体质粒的HepG 2细胞则用同法不能在其表面检出HLA -DR的存在。结论 证明HBVX蛋白能在无炎症和外界因素存在下 ,单独诱导HLA -DR的表达 ,提示HBVX蛋白有参与乙肝免疫反应机制的可能性。

肝细胞癌p53基因的突变与表达

目的 :对HCC患者的肝组织和外周血单核细胞 (PBMC)进行突变 p5 3基因、p5 3蛋白和HBX的检测并作比较 ,以助评估它们与HCC发生的关系。方法 :从HCC患者肝组织和PBMC中提取DNA ,用PCR/SSCP和PCR/RFLP法分析 p5 3基因突变。HCC中HBx与p5 3蛋白表达用免疫组化法检测。 结果 :HCC标本 35 8% (5 /14)显示 p5 3基因第 7外显子突变发生在 2 49密码子。同样的PBMC标本中亦测到 p5 3基因第 7外显子有突变。免疫组化分析HCC肝组织中 p5 3蛋白检出率为 2 8 6 % ,而HBx在大多数标本中均有表达。 结论 :在HCC ,p5 3基因突变热点在第 7外显子 ,p5 3基因突变率与 p5 3蛋白检出率均约 30 %～ 40 % ,HBx较善遍地存在于所测的HCC标本中。这提示p5 3蛋白与HBx蛋白相互作用可能是HCC发病机制中的重要一步。

肝硬变患者TGF-β_1基因在外周血中表达及与PⅢP血清水平的关系

目的:为验证肝纤维化动物模型和慢性肝病患者肝组织中,转化生长因子(TGF-β1)的mRNA表达增强。作者分析肝硬变患者外周血TGF-β1mRNA和血清中有活性的TGF-β1蛋白及其结果与型前胶原N端肽(PP)血清水平间的关系。方法:肝硬变患者50例,健康自愿者8人,取其外周血,分离单核细胞(PBMC),提取总RNA,用巢式RT-PCR扩增TGF-β1mRNA并测定血清中TGF-β1和PP的水平。结果:分析表明患者外周血单核细胞(PBMC)中TGF-β1mRNA有高阳性率的表达。血清中TGF-β1与PP的水平均明显高于对照。结论:研究结果证实肝硬变患者TGF-β1基因在外周血中表达增强,与PP血清水平相关,表明TGF-β1可能在肝纤维化。

肝细胞癌患者外周血AFP-mRNA的临床价值

寻求早期诊断肝细胞癌微量转移的方法。方法 建立巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对44例原发性肝细胞癌(PHCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中甲胎蛋白信息核糖核酸(AFP-mRNA)进行了检测,并与慢性肝病患者和正常人进行对照。结果 44例PHCC中有27例检出AFP-mRAN,阳性率61.4％;10例肝硬化中2例阳性,占20％;肝炎及正常对照组均为阴性。结论 采用巢式RT-PCR法检测PHCC患者PBMC中AFP-mRNA是早期发现肝细胞癌微量转移的重要方法。

细胞因子在免疫反应和病毒相互作用中的机能

本文介绍了细胞因子信号传导及其产生的调节作用，着重介绍了干扰素以及几个炎性细胞因子的特性、信号传导途径及生物学功能。

乙型肝炎与肝癌关系

目的乙型肝炎病毒(HBV)持续感染和宿主免疫反应可导致肝细胞癌(HCC)发生.研究HBV感染致癌机制和乙肝免疫预防HCC具有重要的理论和实际意义.①从分子生物学观点出发探索HBV感染与HCC关系:与HCC相关的最危险因素HBV的XORF常整合于宿主DNA并高度表达.现有越来越多的证据表明反式激活剂HBx可能通过封闭抑癌基因p53的功能而致癌.结构与功能分析表明HBx的远C末端为其抑制p53诱导凋亡的必需区.最近发现HBx基因反式激活功能区发生天然"突然”,即可消除其诱导细胞生长停顿和凋亡的效应.②HBx是一多功能调节因子:近来研究相对集中在HBx对肝细胞凋亡的作用上,促凋亡或抑凋亡.发现HBx可抑制cospase3酶活性阻断细胞凋亡.但另有报告HBx可致敏细胞引起凋亡.联系上述HBx可封闭由于p53过表达而诱导的凋亡,可见病毒根据不同细胞环境或外来刺激采取不同的策略.③乙肝免疫预防HCC:HBVDNA,多在HBx基因整合于宿主DNA,可激活或抑制与生长增殖有关的细胞基因.如整合得到阻遏,细胞转化不至发生.台湾儿童广行乙肝免疫使HBV携带率10%降至0.9%,HCC发生率0.52%降至0.13%,证明控制乙肝是有效防癌措施.

建筑工程管理中的全过程造价控制研讨

如今,在社会经济持续快速发展过程中,各个行业都取得了十分不错的成绩。在城市建设速度不断加快的今天,建筑行业创造了较高的经济效益,也进一步推动了我国经济的高速发展。随着建筑行业的发展,建筑项目的规模越来越大,项目的总体投资越来越多,这就导致项目成本把控工作的难度越来越高,成本浪费问题屡见不鲜,从而严重影响了工程项目建设的经济效益。在上述背景下,建筑企业以及相关工作人员在工程建设过程中,提高了对项目成本控制工作的重视程度。建设项目的工程造价管理由控制与管理两方面的工作组成,其效果会受到各种因素的影响。因此,相关人员要对项目进行可行性研究,对项目的设计、招标、施工、竣工结算等阶段进行综合管理,最大限度地提升成本控制效果。

慢性乙型肝炎和肝硬化中乙型肝炎病毒X抗原表达的分析

用基因工程技术由大肠杆菌合成重组乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）并制备兔抗－ＨＢｘＩｇＧ以检测ＨＢｘＡｇ，合成一对以ＨＢＶＸ基因序列为模板的引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增ＨＢＶＤＮＡ。免疫组织化学和血清学方法分别用以分析肝病患者肝组织中的ＨＢｘＡｇ和血清标本中的ＨＢｘＡｇ、抗－ＨＢｘ。发现ＨＢｘＡｇ在慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）患者肝组织中检出率为７２．７％，在肝炎后肝硬化（ＬＣ）中为９２．６％，而乙型肝炎核心抗原（ＨＢｃＡｇ）在ＬＣ中检出率为４７．８％。在ＣＡＨ、慢性迁延性肝炎和ＬＣ的血清中ＨＢｘＡｇ的阳性率分别为４４．４％、６６．６％和３３．３％，与ＨＢｅＡｇ的阳性率相似，而且在这些ＨＢｘＡｇ阳性的血清中可检出ＨＢＶＤＮＡ的存在，ＨＢｘＡｇ的表达与ＨＢＶ复制紧密相关，ＨＢｘＡｇ可能是一慢性ＨＢＶ感染的重要标志物。