TMT标记联合LC—MS／MS技术在分析非功能垂体腺瘤蛋白质组的重复性研究

目的探索TMT标记联合LC-MS／MS技术在分析非功能垂体腺瘤蛋白质组的重复性以获得FSH＋和FSH-非功能垂体腺瘤间的可靠差异表达蛋白质。方法将两组样品抽提蛋白质、SDS—PAGE、胰酶酶解后，用6-plexTMT对两组样品肽段分别进行三次平行重复实验，然后用色谱柱对样品进行分离成80个组分合并至18份，LC—MS／MS分析，运用Mascot搜索引擎（v．2．3．0）对串联质谱数据进行搜库。结果SDS—PAGE电泳条带正常区分度较高，并且清晰可分辨，保证了本次实验的蛋白质样品质量。质谱数据校验表明鉴定的6076个蛋白质及其中的4666定量蛋白质的肽段长度符合胰酶酶解消化肽段的规律。对于两组样品分别进行三次TMT标记实验结果的重复性分析发现：FSH＋和FSH一组99％以上定量蛋白质的平均变异系数〈20％，约100％的定量蛋白质平均变化倍数〈1．6倍，两组组内相关系数均位于0．9～1，这说明TMT定量蛋白质组学在对每组样品分析均具有高的重复性。结论TMT标记联合LC—MS／MS技术是一高通量和高重复性的有效定量蛋白质组学技术。