基于HPLC指纹图谱方法和化学计量学分析的黄芪质量评价研究

目的基于HPLC指纹图谱结合化学计量学分析方法对不同产区黄芪进行质量评价。方法采用HPLC法,SHIMADZU VPODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,体积流量1 ml/min,梯度洗脱,柱温30℃,检测波长230 nm,对12批黄芪药材进行HPLC指纹图谱分析,同时对所研究的黄芪指纹图谱进行化学计量学分析。结果HPLC指纹图谱分析标识出10个共有峰,相似度均大于0.80。聚类分析和主成分分析将所有黄芪药材分为2类,前2个主成分累计贡献率为84.55%,两种分析结果一致,说明12批不同产地黄芪药材的共有化学成分基本稳定,但各成分含量存在一定差异。结论该方法准确可靠,可为黄芪质量评价及真伪判定提供有效方法,为临床及制剂生产筛选优质药材提供技术支撑。

黄根片对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响

目的:探讨黄根片对大鼠慢性肝损伤的防治作用。方法:50只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(联苯双酯滴丸,0.2 g·kg-1)、黄根片高、低剂量(36 g·kg-1,9 g·kg-1)组。除空白对照组外,其余各组大鼠每周2次皮下注射四氯化碳复制慢性肝损伤模型,同时每天灌胃给药1次,连续12周,观察黄根片对慢性肝损伤大鼠血液生化指标以及肝组织病理变化的影响。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠造模后12周体质量、残留肝组织百分率显著降低,肝脏系数、肝组织Hyp含量、血清ALT、AST含量显著升高,血清TP、Alb含量显著降低(P<0.05或0.01)。与模型组比较,黄根片高、低剂量组灌胃给药12周能够显著提高大鼠血清TP含量和残留肝组织百分率(P<0.05)。结论:黄根片对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤模型有一定的保护作用。

黄根片对急性肝损伤小鼠的影响及急性毒性研究

目的观察黄根片D-氨基半乳糖引起的急性肝损伤的作用及其急性毒性。方法采用D-半乳糖胺盐酸盐ip建立小鼠急性肝损伤模型,用比色分析法测定小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的活性;并测定黄根片小鼠灌服给药的急性毒性。结果黄根片能显著降低因D-氨基半乳糖所致急性肝损伤小鼠血清ALT,AST的升高(P<0.01或P<0.05);小鼠以最大给药量为含生药933.24g/kg灌服黄根片,未观察到明显毒性反应。结论黄根片对D-半乳糖所致小鼠急性肝损伤有保护作用,且小鼠最大给药量为含生药933.24g/kg,相当于黄根片临床用量的777.7倍。

基于抗炎和促红细胞生成作用的九味补血口服液改善血虚证小鼠造血功能的机制研究

为探讨九味补血口服液改善血虚证小鼠造血功能的作用及机制,采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术鉴定九味补血口服液中的化学成分;利用蛋白互作和网络分析手段筛选九味补血口服液治疗贫血的关键网络靶点,并对关键网络靶点进行基因本体(GO)分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;同时采用分子对接技术将潜在活性成分与关键网络靶点对接,评估活性分子与靶点的结合能力。在动物实验中,采用环磷酰胺建立小鼠血虚模型,设立对照组和模型组,复方阿胶浆口服液组(30 mL/kg)及九味补血口服液高、中、低剂量组(10.0、5.0、2.5 mL/kg),每天灌胃给药1次,连续32 d。检测全血中红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)和红细胞压积(HCT)水平,并利用qRT-PCR法和免疫印迹法对关键靶点及通路在血虚证小鼠肾脏的表达进行验证。结果显示,在91种鉴定的九味补血口服液化学成分中,满足口服生物利用度(OB)≥30%和药物相似性(DL)≥0.18的条件,且具有相应靶点的潜在活性成分共计15个。分析九味补血口服液成分-血虚疾病靶点网络,获得九味补血口服液治疗贫血的关键靶点15个,主要富集于核因子-κB(NF-κB)信号通路(NF-κB signaling pathway)、代谢通路(Metabolic pathway)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路(HIF-1 signaling pathway)、Toll样受体信号(Toll-like receptor signaling pathway)通路等。分子对接结果显示,甘草苷、橙皮素与Toll样受体4(TLR4)具有强烈的结合能力。动物实验结果显示,与对照组相比,血虚证小鼠RBC、HGB和HCT水平明显降低,TLR4/NF-κB p65介导的炎性信号增强,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)介导的促红细胞生成信号受抑制(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,九味补血口服液各剂量组可显著升高血虚证小鼠RBC、HGB和HCT水平,不同程度地逆转TLR4、NF-κB p65变化,并上调HIF-1α、EPO mRNA或蛋白的表达水平(P<0.05或P<0.01)。因此,九味补血口服液可以改善血虚证小鼠的贫血状态,其机制可能与促进肾脏中HIF-1α/EPO介导的促红细胞生成作用、减少TLR4/NF-κB p65介导的肾脏炎症反应相关。

RP-HPLC法测定三味清热止痒洗剂中盐酸麻黄碱的含量

目的：建立三味清热止痒洗剂中盐酸麻黄碱的含量测定方法.方法：采用反相高效液相色谱法,Inertsil ODS-SP C18（150mm×4.6μm）色谱柱,流动相：甲醇-水-冰乙酸（50：50：1）,检测波长262nm.结果：盐酸麻黄碱在0.0504～1.0080μg内线性关系良好.平均回收率99.8%,RSD＝1.20（n=9）.结论：该方法简便、准确、专属性强,可用于三味清热止痒洗剂中盐酸麻黄碱的含量测定.

馥芳艾纳香组培快繁体系的初步研究

试验以馥芳艾纳香种子为外植体,通过探索不同植物生长调节剂对馥芳艾纳香继代和生根培养的影响,以期筛选出馥芳艾纳香不同培养阶段的适宜培养基,初步建立馥芳艾纳香组培快繁体系。试验结果表明:馥芳艾纳香种子经消毒后,接种于添加2.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine,6-BA)+0.2 mg/Lα-萘乙酸(α-Naphthaleneaceticacid,NAA)的1/2 MS培养基中可诱导出丛生芽;继代培养选择添加1.0 mg/L 6-BA和0.2 mg/L NAA的MS培养基,增殖系数达9.4,且不定芽长势较好;生根培养选择添加0.1 mg/L NAA的1/2 MS培养基,出根率达100%,组培苗主根粗壮,根系生长良好。该研究初步建立了馥芳艾纳香组培快繁体系,为馥芳艾纳香种质资源保护和产业化种植奠定了基础。

基于主成分分析的不同产地两面针药材质量评价

以《中华人民共和国药典(2020版)》收载的两面针[Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.]的内容为依据,对两面针样品进行性状、显微、薄层鉴别,检测10个产地两面针水分、总灰分、浸出物、氯化两面针碱的含量。结果显示,不同产地两面针的显微、薄层鉴别,水分、总灰分、浸出物及含量均符合药典规定;水分为4.27%-5.86%,总灰分为3.44%-4.77%,浸出物为7.10%-13.86%,氯化两面针碱的含量为0.14%-0.19%。说明不同产地两面针在质量品质方面均有差异,其中产自广东省广州市从化区的两面针品质综合表现最佳,广西壮族自治区南宁、钦州、崇左等产地治疗综合表现较优。

基于GC-MS/MS联合HPLC-MS/MS测定大枣禁用农药残留

目的:建立QuEChERS结合气相色谱-串联质谱法(Gas Chromatography-tandem Mass Spectrometry,GC-MS/MS)联合高效液相色谱-串联质谱法(High Performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,HPLC-MS/MS)检测大枣禁用农药残留的方法。方法:样品以体积比为1%的乙酸乙腈为溶剂,高速匀浆,采用QuEChERS法净化处理样品,分别以气质法和液质法进行分析,气质法采用外标法定量,液质法采用内标法定量。结果:气相色谱-串联质谱法检测的35种农药线性关系良好,相关系数均≥0.9972,定量限为0.0001~0.0055 mg·kg^(-1),回收率为65.54%~101.03%,相对标准偏差为0.38%~11.54%。高效液相色谱-串联质谱法测定的30种农药线性关系良好,相关系数均≥0.9896,定量限为0~0.00049mg·kg^(-1),回收率为62.92%~109.96%,相对标准偏差为0.04%~3.71%。结论:该方法操作简便、高效、定量定性准确、灵敏度高、重现性和稳定性良好,适用于大枣禁用农药残留的快速检测。

九味补血口服液HPLC-ELSD指纹图谱方法研究

目的建立九味补血口服液的HPLC-ELSD特征图谱,提高九味补血口服液质量标准。方法采用Waters Sunfire C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,体积流量为1.0 ml/min,柱温:30℃,漂移管温度为45℃,载气压力为3.6 bar。结果建立的HPLC-ELSD特征图谱分离度好,共标定出25个特征峰,通过对照品比对确定了人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd,黄芪甲苷,甘草苷,柚皮苷,橙皮苷,川陈皮素9个特征性成分。结论研究建立的九味补血口服液HPLC-ELSD特征图谱方法具有良好稳定性和重复性,将更为有效控制九味补血口服液的质量。

癣灵酊质量标准的研究

目的 对癣灵酊进行质量标准研究,提高其内在质量控制指标。方法 采用薄层色谱法对土荆皮、关黄柏、苦参、洋金花进行定性鉴别,采用HPLC法对处方中主要成分盐酸小檗碱进行含量测定。结果 土荆皮、关黄柏、苦参、洋金花的薄层色谱鉴别专属性强,均具有特征性的斑点,盐酸小檗碱平均回收率为99.5%（RSD=1.06）,线性范围为0.062-1.109μg（r=0.9999）。结论 研究结果表明,本法简便、准确、专属性和重现性好,为癣灵酊内在质量控制提供了实际可行的方法。

九味补血口服液质量标准研究

目的：提高九味补血口服液质量标准。方法：采用薄层色谱法对人参、绞股蓝、黄芪进行定性鉴别,采用HPLC法对五味子中五味子醇甲进行定量分析。结果：人参与绞股蓝、黄芪的薄层色谱均具有特征性的清晰斑点,阴性溶液无干扰;五味子醇甲在0.05100~1.5300μg范围内其峰面积与进样量呈良好的线性关系,平均加样回收率为100.97%（RSD=0.91%）。结论：研究建立的定性鉴别与定量分析方法灵敏、准确,具有良好专属性和重现性,更能有效控制九味补血口服液的质量。

HPLC法测定肌苷口服溶液中的有关物质

目的：采用HPLC法对肌苷口服溶液中的有关物质进行研究。方法：采用色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填充剂的C18柱（日本岛津公司，规格为4．6mm×150mm）；以甲醇-水（10：90）为流动相，流速：1．0mL·min^-1；检测波长：248nm；柱温：室温。结果：肌苷的线性范围为0．0401—0．7218μg，r=0．9999，最低检测限为8．2ng；次黄嘌呤的线性范围为0．0502～0．9036μg，r=0．9999，最低检测限为7．4ng；结论：各有关物质峰与肌苷峰能达到有效分离，且操作方法简便、准确、稳定，专属性强，可用于肌苷口服溶液有关物质的检查。

华佗风痛宝片薄层色谱鉴别研究

[目的]对华佗风痛宝片进行薄层色谱鉴别研究。[方法]采用薄层色谱法鉴别红鱼眼、九层风、三叶青藤、山风(或大风艾)、两面针。[结果]红鱼眼、九层风、三叶青藤、山风(或大风艾)、两面针的薄层色谱鉴别均有较强的专属性和特征性的斑点。[结论]本法操作简便、重现性好,为进一步完善华佗风痛宝片的质量标准提供了切实可行的参考依据。

维C银翘颗粒中马来酸氯苯那敏含量均匀度测定的研究

目的:用HPLC法研究维C银翘颗粒中马来酸氯苯那敏的含量均匀度。方法:采用色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填充剂的C18柱(日本岛津公司,规格为4.6mm×250mm),检测波长为262nm,流动相为乙腈-0.2%十二烷基磺酸钠溶液-磷酸(48∶52∶0.2),流速为1.0mL·min-1,外标法测定含量。结果:马来酸氯苯那敏在0.0598～0.3588μg之间呈良好线性关系,平均回收率为100.4%(n=9),RSD:0.89%。结论:本方法准确可靠,可用于维C银翘颗粒中马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定。

碘量法测定维C银翘颗粒中维生素C的含量

目的 :为提高维C银翘颗粒的质量标准 ,建立样品中维生素C的含量测定方法。方法 :用经典方法—碘量法。结果 :与经典方法相比较 ,由于减半取样 ,缩短了滤过时间 ,使本法更加合理、迅速、结果准确。平均回收率为 97 82 6 3% ,相对标准差RSD =1 2 %。结论 :应用于维C银翘颗粒测定维生素C含量 。

华佗风痛宝片治疗骨关节炎的效果及其机制研究

目的探讨华佗风痛宝片治疗骨关节炎大鼠软骨组织损伤的效果及其可能机制。方法选取6周龄SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性组、高剂量组、低剂量组。假手术组大鼠,打开膝关节腔后直接缝合。其余组大鼠采用前交叉韧带切除术法制备膝骨关节炎大鼠模型。每组取10只存活的大鼠备用。阳性组大鼠给予壮骨关节丸治疗,高剂量组大鼠给予华佗风痛宝片18 g/kg治疗,低剂量组大鼠给予华佗风痛宝片4.5 g/kg治疗,模型组、假手术组大鼠给予蒸馏水灌胃。各组大鼠连续给药(治疗)8周。观察各组大鼠治疗后膝关节软骨组织形态,采用番红O-固绿染色于显微镜下观察各组大鼠膝关节软骨组织形态。比较各组大鼠治疗后血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和基质金属蛋白酶(MMP)-13水平。比较各组大鼠治疗后膝关节软骨组织TNF-α、MMP-13、性别决定区Y框蛋白9(SOX9)和Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ)水平,以及连接蛋白43(Cx43)mRNA、蛋白相对表达水平。结果治疗8周后,与模型组比较,阳性组、高剂量组、低剂量组大鼠膝关节软骨组织磨损得到改善;模型组大鼠膝关节软骨基质染色不均,表层细胞缺失,有的成簇状,排列欠规则,染色稍浅淡,层次交错、紊乱,潮线不完整,钙化层增厚;高剂量组大鼠膝关节软骨组织细胞增殖明显,成簇状分布;低剂量组膝关节软骨组织细胞大小不等,有的成簇状,排列欠规则,层次稍紊乱但可辨认。治疗8周后,低剂量组大鼠血清MMP-13水平低于模型组,高剂量组、低剂量组大鼠血清TNF-α水平均低于模型组;与模型组比较,高剂量组大鼠膝关节软骨组织SOX9和Collagen Ⅱ表达升高,TNF-α、MMP-13表达减少,高剂量组、低剂量组和阳性组大鼠膝关节软骨组织Cx43 mRNA和蛋白相对表达水平均降低(均P<0.05)。结论华佗风痛宝片治疗骨关节炎大鼠效果较好,这可能与其能调节MMP-13、TNF-α、SOX9、Collagen Ⅱ和Cx43水平有关。

九味补血口服液在大鼠体内的吸收与代谢研究

目的:研究九味补血口服液在大鼠血浆、尿液中的吸收及代谢情况。方法:采用UPLC-Q-TOF/MS联用技术,大鼠灌胃3 d后采血样、尿液分析。结果:九味补血口服液中五味子活性成分吸收后主要分布于血浆中;陈皮成分5-去甲基川陈皮素、5-羟基酸橙素等,黄芪成分毛蕊异黄酮、芒柄花黄素等,甘草活性成分甘草素等吸收后主要经尿液排出体外。结论:本研究在血样与尿样中共鉴定出了27个原型成分,发现五味子、陈皮主要组分经吸收后大量分布于血浆中,表明五味子、陈皮也可能是本药品潜在药效物质,研究结果为阐明该制剂的药效物质基础和药理作用提供依据。

九味补血口服液的胃肠道稳定性研究

目的研究九味补血口服液在胃肠道环境下的稳定性。方法采用UPLC-MS方法,分别在人工胃液、人工肠液的酸碱物理环境及消化酶作用下检测多成分含量的变化。结果口服液中的13种主要成分在人工胃液中有7种发生了代谢,导致其含有量变化超过30%;而口服液中的13种主要成分在人工肠液中只有1种含量变化超过10%,可认为在肠液中的稳定性良好。结论该研究为后续进一步的药理作用研究提供有力支持。

黄根片对急性肝损伤和肝纤维化作用的研究

目的:观察黄根片对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠和四氯化碳复合因素诱导的肝纤维化大鼠的防治作用。方法:小鼠采用四氯化氮诱导急性肝损伤小鼠模型,灌胃给予黄根片,连续10天,观察黄根片对急性肝损伤小鼠肝脏系数,血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、抗氧化水平及肝组织病理损伤程度的影响;采用四氯化碳复合因素复制肝纤维化大鼠模型,灌胃给予黄根片,连续11周,观察黄根片对肝纤维化模型大鼠血清ALT、AST、碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)水平、肝脏指数、肝组织羟脯胺酸(Hyp)含量的影响,Masson染色观察肝组织纤维化程度的影响。结果:黄根片可显著降低急性肝损伤小鼠肝脏系数和ALT、AST水平,肝脏系数由模型组的(52±6)mg/g降低到黄根片36.0 g、18.0 g药材/kg剂量组的(42±6)mg/g、(45±8)mg/g,AST由模型组的(107±63)U/L降低到黄根片36.0 g、18.0 g药材/kg剂量组的(53±22)U/L、(54±31)U/L,ALT由模型组(85±41)U/L降低到黄根片36.0 g、18.0 g药材/kg剂量组的(43±16)U/L、(46±21)U/L,并可提高急性肝损伤小鼠血清、肝脏的SOD的活性,显著改善急性肝损伤小鼠肝组织病理状态。和模型组比较,灌胃给药11周,黄根片24.0g药材/kg剂量组能够显著降低大鼠肝脏指数、肝组织Hyp含量和肝纤维化百分率,分别由模型组的(8.8±1.3)g/(100g体重)、(363±96)μg/g(3.03±0.67)%下降到黄根片24.0g药材/kg剂量组的(7.1±1.4)g/(100g体重)、(244±28)μg/g肝湿重、(2.28±0.43)%肝湿重;能显著增高大鼠血清ALB水平,由模型组的(17.7±2.1)g/L肝湿重增高到黄根片24.0g原药材/kg剂量组的(19.8±1.7)g/L。结论:黄根片对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠、四氯化碳复合因素所致肝纤维化大鼠均具有良好的防疗作用。