基于人体寄生虫实物的3D-数字化标本库的构建及其在“人体寄生虫学”混合式实验教学中的应用

目的构建基于人体寄生虫实物3D-数字化标本库,并探索其在“人体寄生虫学”实验教学中的应用效果。方法以我校人体寄生虫教研室的大体标本和玻片标本为主素材,依托上海梦之路公司制作成3D数字化标本,并配有各自的二维码;以本校2020级护理本科1班为实验组,采用线上线下混合式实验教学法;以本校2020级护理本科2班为对照组,采用常规实验室教学法。结果对实验组和对照组共同参与的实验报告成绩、标本辨认成绩进行比较分析,实验组的实验报告成绩及标本辨认成绩高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论这种基于实物的3D-数字化标本辅助线上线下实验教学促进了医学生对人体寄生虫学的学习,值得推广应用。

TpbA通过调节c-di-GMP抑制鲍曼不动杆菌ATCC17978生物膜的形成

目的分析生物膜形成相关的酪氨酸磷酸酶A(TpbA)经调节3,5-环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)影响鲍曼不动杆菌ATCC17978生物膜的形成。方法通过上海生工合成TpbA基因序列,构建pET-28a-TpbA载体,原核重组表达目的蛋白TpbA经亲和层析纯化后并用western blot验证,将该载体转入鲍曼不动杆菌ATCC17978,采用western blot和磷酸酶活性实验鉴定TpbA表达及活性,分析c-di-GMP表达水平及生物膜形成情况。结果在成功构建pET-28a-TpbA载体并证实表达TpbA的基础上,将该载体转入鲍曼不动杆菌ATCC17978,western blot表明TpbA过表达(P<0.05),磷酸酶活性实验证实过表达的TpbA具有酶活性(P<0.05)。进一步分析发现,ATCC17978中TpbA过表达能够降低c-di-GMP的水平(P<0.05),表明TpbA能够有效调节鲍曼不动杆菌的c-di-GMP。ATCC17978中c-di-GMP相关的生物膜形成在TpbA过表达作用下能够被显著抑制(P<0.05)。结论本研究初步证实了TpbA通过调节c-di-GMP,可以抑制ATCC17978生物膜形成,为抑制鲍曼不动杆菌生物膜的形成提供了新的潜在靶点和实验数据。

斑点金免疫渗滤法检测肿瘤患者血清弓形虫IgG抗体的应用研究

为建立简便、快速的斑点金免疫渗滤法 (DIGFA)检测肿瘤患者血清弓形虫IgG抗体。本文将弓形虫抗原包被于硝酸纤维素薄膜上 ,用来检测肿瘤患者血清中的弓形虫IgG抗体 ,通过胶体金———SPA直接显色 ,阳性者出现红色斑点。用该法对 2 32名肿瘤患者血清和 2 6 0名正常体检者血清进行检测 ,阳性率分别为 11. 2 1%和 1. 92 %。与IHA法对比检测 ,其结果具有良好的一致性 ,总符合率为 99. 39%。结果显示 ,斑点金免疫渗滤法检测肿瘤患者血清中弓形虫抗体简便、快速 ,适于向基层推广。

两种特异抗体检测与B超诊断在包虫病流行病学调查中的应用

目的应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和滴金免疫渗滤法(DIGFA)检测人群包虫病流行情况,评价两种抗包虫特异抗体检测结果与B超诊断的一致性,探讨二者在包虫病流调中的应用。方法用粗纯化的人源型细粒棘球蚴囊液抗原(CE抗原)和鼠源型的泡球蚴组织抗原(AE抗原)做常规ELISA,检测-80℃存放8年的1999份滤纸血的包虫病特异性抗体,其结果与流调现场应用的DIGFA法检测结果进行比较,并将两种方法的血清学检查结果分别与现场B超诊断比较。用Kappa一致性检验,确定检查结果的一致性。结果用ELISA法检测-80℃存放8年的血清结果和现场用DIGFA法检测包虫阳性率分别为6.70%(134/1999)、7.15%(143/1999);以≥60岁组为最高(24.44%和17.78%);各年龄组间差异有统计学意义(P均<0.01)。女性感染率(7.96%和9.45%)高于男性(5.58%和5.11%),性别间差异有统计学意义(P均<0.05)。包虫病诊断中ELISA法检测结果敏感性与特异性均高于DIGFA法,与B超诊断结果一致良好(Kappa=0.41);反之亦然,DIGFA检测结果与B超诊断结果不完全一致(Kappa=0.26)。结论包虫病感染率与年龄和性别有关。DIGFA方法操作简单,检查用时短,所需设备简单,适合于流动性现场调查用;而ELISA法用时较长,检查要求有相当的实验室设备和一定培训技能的人员进行操作,用于现场流调有一定困难,但特异性和敏感性相对比前者高,尤其是用较为新鲜的血样标本更为理想。

肿瘤患者合并弓形虫感染血清抗体检测分析

目的 了解银川地区肿瘤患者弓形虫感染状况 ,使肿瘤合并弓形虫感染时能得到及时的治疗 ,提高化疗或放疗的效果。方法 用间接血凝法 (IHA)对 2 32例各种肿瘤患者及 2 6 0名正常体检者血清进行检测。结果2 32名肿瘤患者弓形虫血清抗体阳性 2 4人 ,阳性率为 10 .34 % ,2 6 0名正常体检者弓形虫血清阳性 4人 ,阳性率为1.5 4% ,抗体几何平均滴度 (GMT)分别为 11.6 5和 1.5 4。结论 肿瘤患者弓形虫感染率及血清抗体平均滴度均高于正常体检者 ,两者间有显著性差异 (P <0 .0 1)。

宁夏西吉县两自然村人群包虫病/泡球蚴病血清检测的分析

目的 了解宁夏西吉县农村人群包虫病和泡球蚴病感染情况 ,使病人及早得到治疗。方法 用免疫金标试剂盒对 15 6名村民静脉血进行检测。结果 两型包虫病阳性率为 30 .13%,其中包虫病阳性率为 2 6 .2 8%;泡球蚴病阳性率为 12 .82 %。男性、女性阳性率分别为 19.2 8%和 42 .47%;两组间有显著性差异 (χ2 =3.92 ,P <0 .0 5 ) ;成年人与未成年人阳性率分别为 37.2 3%和 19.35 %,其间有显著性差异 (χ2 =4.86 ,P <0 .0 5 )。结论 两型包虫病感染与性别及年龄有显著相关性。

口腔疾病与口腔原虫感染关系的分析

目的 :了解银川地区口腔原虫感染情况 ,进一步探讨口腔原虫感染与口腔疾病的关系。方法 :取口腔病灶或齿垢 ,用生理盐水直接涂片 ,光镜下检查口腔原虫滋养体。结果 :口腔原虫总感染率为 34 6 2 %,(其中齿龈阿米巴感染率为32 2 1%,口腔滴虫感染率为 5 0 5 %)。 14岁以下、14岁～、2 5～ 5 0岁、5 0岁以上各年龄组口腔原虫的检出率分别为17 6 5 %、2 5 87%、2 6 12 %和 6 2 86 %。结论 :口腔原虫感染与口腔疾病及年龄有显著相关性。

银川市732名大学新生血清弓形虫抗体检测分析

为了解银川地区在校大学生弓形虫感染状况及其与民族、性别、家庭职业之间的关系 ,以保障在校大学生的身体健康 ,用间接血凝试验 (IHA)对 732名入院新生静脉血进行弓形虫抗体检测。结果 ,弓形虫血清抗体阳性率 2 0 5 % ( 1 5 /732 ) ;男、女学生弓形虫抗体阳性率分别为 3 0 8% ( 1 1 /35 7)和 1 0 7% ( 4 /375 ) ,两组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。汉、回、满族学生弓形虫抗体阳性率分别为 2 5 1 % ( 1 1 /4 38)、1 84 % ( 3/1 6 3)和 0 79% ( 1 /1 2 6 ) ,各组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。农业学生与非农业学生弓形虫抗体阳性率分别为 3 5 1 % ( 1 2 /34 2 )和 0 77% ( 3/390 ) ,两组间有显著性差异 (P <0 0 5 )。显示不同性别和民族的学生均有机会感染弓形虫 ,农业家庭学生弓形虫感染率高于非农业家庭学生。

人体寄生虫学综合性实验的开设与评价

目的探讨综合性实验在人体寄生虫学实验教学中开设的可行性并评价教学效果。方法根据教学进度安排,在学期的中后期增加以学生操作为主的综合性实验,并对2003级和2004级815名学生进行问卷调查。结果结果显示,2个年级分别有86.11%和89.74%的学生认为,综合性实验加深了自己对寄生虫学理论知识的记忆;分别有76.01%和81.15%的学生认为,综合性实验增强了自己的实际操作能力。结论综合性实验强化了理论教学,增强了学生的实际操作能力,为提高教学质量和培养学生的创新能力打下了基础。

银川市部分幼儿园学龄前儿童肠道蠕虫感染情况调查分析

为了解银川地区学龄前儿童肠道寄生虫感染情况 ,在银川市随机抽查 10所幼儿园 ,用透明胶纸法检查蛲虫卵 ,加藤氏厚涂片法查肠道蠕虫卵。结果 ,132 2名 2 .5～ 7岁儿童 ,蛔虫卵阳性 39人 ,感染率为 2 .95 % ,蛲虫卵阳性 15 1人 ,感染率为 11.42 % ,肠道蠕虫总感染率为 14.37%。性别及民族间肠道蠕虫感染率差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,不同年龄组感染率差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结果表明 ;各年龄组、民族及性别的儿童都有不同程度的感染肠道蠕虫的机会 ,以

252例手术包虫病患者情况分析

为了解银川地区包虫病患者的分布特点。对 1994～ 2 0 0 1年住院接受治疗的 2 5 2例包虫病患者病历档案进行分析。结果 ,包虫病患者女性多于男性 ,且以女性农民居多 ;患者多集中在 2 5～ 4 5岁年龄段 ;农村患者多于城市。提示银川地区包虫病没有明显的流行趋势 。

槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p38、iNOS表达的影响

目的探讨槐定碱(sophoridine,SRI)在内毒素导致的炎症反应中的作用。方法采用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,实验细胞分为5组(n=6):空白对照组、LPS组、槐定碱组、SB203580组、SB203580+槐定碱组,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测RAW264.7巨噬细胞p38 mRNA表达量;利用Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞p-p38与iNOS蛋白的表达量。结果槐定碱组与LPS组比较p-p38蛋白表达量和p38 mRNA表达量降低,但高于空白对照组(P<0.01),表明槐定碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p-p38蛋白表达和p38 mRNA表达量;与LPS组比较,槐定碱组iNOS蛋白表达量降低,但高于空白对照组(P<0.01),SB203580+槐定碱组iNOS蛋白表达量低于槐定碱组和SB203580组(P<0.01),表明槐定碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞P38MAPK信号通路下游iNOS蛋白表达,并且与SB203580有协同作用。结论槐定碱可以通过抑制p38MAPK位点而下调p-p38、iNOS蛋白表达而发挥抗炎作用。

槐定碱预防小鼠内毒素性肝损伤的作用及对肝脏CD14、TLR4表达的影响

目的研究预防性给予槐定碱对小鼠内毒素血症急性肝损伤的影响及对CD14、TLR4表达的调节。方法观察槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性处理的小鼠,在给予内毒素后2、6、12、24h时各组小鼠一般状况、肉眼及光镜下肝组织的病理变化,赖氏法测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)浓度,RT-PCR与Western Blot分别检测肝组织CD14及TLR4的mRNA与蛋白表达,放免法检测血清TNF-α含量的变化。结果槐定碱三个剂量预防性给予,各个时间点结果均表明改善了内毒素血症模型小鼠的一般状况,减轻了肝组织病理改变;槐定碱三个剂量组的ALT值均低于同时间点的LPS模型组(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组与同时间点LPS模型组比较,均下调肝组织CD14、TLR4 mRNA和蛋白的表达(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组血清TNF-α水平均较同时间点LPS模型组降低(P<0.01或P<0.05),并在24h时均降至正常对照组水平。结论槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性给予,可抑制内毒素血症小鼠肝脏炎症反应,其机制可能与下调LPS识别受体CD14、TLR4表达,并进而抑制下游炎症因子分泌有关。

氧化槐定碱对大鼠额叶皮层脑电活动及功率谱的影响

目的观察氧化槐定碱(OSR)对麻醉大鼠额叶皮层脑生物电(EEG)变化及其功率谱的影响。方法利用脑立体定位技术,将电极置入大鼠额叶皮层,采用单极引导法及计算机辅助傅里叶变换技术(FFT)以脑电图、功率谱、频率分配为观察指标,记录并分析OSR对大鼠额叶皮层脑生物电变化的影响。结果侧脑室注射(icv)OSR2.5、5、10毫克/只,大鼠额叶皮层脑电出现以低幅慢波为主并伴有梭形睡眠波的波形;脑电总功率明显下降(P<0.05),但δ波占总频率比例升高(P<0.05)。结论 OSR降低皮层脑生物电活动是其中枢抑制作用的明显表现,额叶皮层是参与其中枢抑制作用传导环路上的结构之一。

氧化槐定碱对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究氧化槐定碱(OSR)对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用,并初步探讨其保护作用的机制。方法雄性ICR小鼠腹腔注射OSR(125,250,500 mg/kg)5d,末次给药结束0.5 h后,腹腔注射CCl4(0.5 ml/kg)染毒造模,染毒后2h再次腹腔注OSR。染毒16h后摘眼球取血,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;留取动物肝脏组织,测定组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px);观察病理形态学改变;利用透射电镜观察肝细胞的超微结构。结果与模型组相比较,OSR各剂量组血清ALT、AST、LDH含量明显降低;肝组织匀浆中MDA含量显著下降、SOD、GSH-Px活性明显增高;HE染色观察显示OSR各剂量组肝脏组织受损程度明显减轻;细胞超微结构的损伤明显减少。结论 OSR对CCl4所致小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。

重组猪IL-2对口蹄疫重组腺病毒免疫增强效果的研究

目的构建表达猪白细胞介素-2(poIL-2)的重组腺病毒,研究其作为佐剂对口蹄疫重组腺病毒免疫效果的影响。方法将poIL-2基因克隆到腺病毒的穿梭载体中,与腺病毒骨架载体共转化BJ5183感受态细胞,获得的重组病毒质粒通过脂质体转染HEK-293A细胞,获得表达poIL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)。以rAd5poIL-2作为佐剂与表达PMDV VP基因的重组腺病毒(rAd5VP1)联合免疫小鼠,以单独免疫rAd5VP1的小鼠作为对照。通过测定淋巴细胞增殖指数、特异性抗体、IL-4和IFN-γ的水平来衡量rAd5poIL-2对rAd5VP1的免疫增强效果。结果经PCR鉴定,成功构建了rAd5poIL-2。MTT与抗体检测结果显示,rAd5poIL-2既能增强rAd5VP1诱导小鼠淋巴细胞增殖,又能促进rAd5VP1诱导小鼠特异性抗体的产生,细胞因子检测结果显示,rAd5poIL-2能促进rAd5VP1诱导Th1和Th2的分化。结论 rAd5poIL-2可望成为口蹄疫疫苗的候选佐剂。

苦豆子总碱及四种生物单碱体外触杀阴道毛滴虫的实验研究

目的 :探索苦豆子总碱、苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱体外触杀阴道毛滴虫的作用 ,为治疗滴虫性阴道炎寻找更为有效的中草药。方法 :将苦豆子总碱及其四种生物单碱稀释为 4 0 0、 2 0 0、 10 0、 5 0 μg/ml的不同浓度对体外培养的阴道毛滴虫进行杀虫实验 ,并与对照药(甲硝唑 )比较 ,确定疗效。结果 :苦豆子总碱、氧化苦参碱在高浓度 (4 0 0 μg/ml)时对阴道毛滴虫的生长、繁殖有一定的抑制作用 ;槐果碱、槐定碱无抑制作用 ;苦参碱 4 0 0、 2 0 0、 10 0 μg/ml对阴道毛滴虫具有明显的触杀作用 ,与甲硝唑比较两者差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;与其他四种生物碱各个浓度比较均有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 :苦参碱有明显的触杀阴道毛滴虫的作用 ,是一种高效具有开发价值的生物碱。

鹅绒藤总生物碱对小鼠体液免疫功能的影响

目的研究鹅绒藤总生物碱(Cynanchum Chinense Total Alkaloid,CCTA)对正常小鼠体液免疫的影响。方法给正常小鼠腹腔注射高(12.96mg/kg)、中(6.48mg/kg)、低(3.24mg/kg)3个剂量的CCTA,每天1次,连续7d,于末次给药后12h,眼球取血并取脾脏,定量溶血分光光度试验进行小鼠脾脏抗体形成细胞检测,对小鼠血清溶血素进行测定。结果CCTA高、中剂量组抗体形成细胞OD值及血清溶血素HC50明显高于免疫小鼠对照组(P<0.05,P<0.01);与CCTA低剂量组比较,CCTA高、中剂量组抗体形成细胞OD值升高(P<0.05),血清溶血素HC50升高(P<0.01)。结论CCTA有提高正常小鼠体液免疫的作用。

槐定碱预处理对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞c-Jun表达的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞c-Jun表达的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW264.7巨噬细胞,以槐定碱(31.25mg.L-1)预处理细胞24h后给予LPS(E.coli O55:B5)100μg.L-1刺激细胞,并于刺激后5、30、60、120min收集细胞;再以槐定碱31.25、15.63、7.81mg.L-1三个浓度同上预处理细胞,于LPS刺激后60min收集细胞。利用免疫细胞化学技术检测RAW264.7巨噬细胞中c-Jun的表达。结果单独槐定碱对c-Jun表达无影响;LPS模型组各时间点c-Jun阳性细胞数均显著高于巨噬细胞对照组(P<0.01),且随LPS刺激时间延长而升高,持续升至120min;槐定碱预处理组在LPS作用后30、60、120min时c-Jun阳性细胞数均较同时间点LPS模型组降低,差异有统计学意义(均P<0.01),但槐定碱预处理组各时间点c-Jun阳性细胞数无明显变化。不同浓度槐定碱(31.25、15.63、7.81 mg.L-1)预处理细胞,对LPS刺激的c-Jun表达均有显著抑制作用(均P<0.01),且31.25 mg.L-1的作用强于另两个浓度(15.63、7.81mg.L-1),差异有统计学意义(均P<0.05)。结论槐定碱预处理RAW264.7巨噬细胞能显著抑制LPS诱导的c-Jun蛋白表达,其作用有剂量依赖性。

犬博卡病毒结构基因VP2多克隆抗体的制备与应用

目的构建犬博卡病毒(CBV)结构蛋白VP2的兔抗VP2多克隆抗体并进行特异性鉴定。方法应用PCR方法扩增获得CBV结构蛋白VP2 C末端区域300个氨基酸所对应的基因片段。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体p ET-32a(+),构建重组质粒p ET-32a(+)-VP2,转化至E.coli BL21中,异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物SDS-PAGE分析鉴定;纯化融合蛋白后免疫新西兰家兔,制备多克隆抗体,检测抗体效价及特异性。结果通过酶切和测序证实成功构建原核表达载体p ET-32a(+)-VP2,转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶6 400 000,Western blot法及免疫荧光染色鉴定抗体的特异性。结论成功制备了抗CBV结构蛋白VP2的多克隆抗体。