一种抑制pGEX载体系统本底表达的方法

用ｐＧＥＸ载体系统体外构建了一种人精子膜蛋白片段（ＨＳＤⅡ）的重组表达质粒．未经ＩＰＴＧ诱导，该质粒表达的融合蛋白在ＤＨ５α中即有较高的本底表达量．若将带有ＬａｃⅠ基因的ｐＲＥＰ４质粒与重组表达质粒共转化ＤＨ５α菌，则可有效抑制融合蛋白的本底表达．

TNF-α和IL-6在大鼠部分肝移植术后肝再生的作用

目的:研究肝再生相关细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)在大鼠移植肝内的表达及其与肝脏再生的关系。方法:建立稳定的冷缺血45 min和10 h 50%大鼠部分肝移植模型,50%肝切除为对照组。术后免疫组织化学检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)、TNF-α、IL-6的表达,RT-PCR检测术后2 h TNF-α、IL-6 mRNA的表达,并探讨TNF-α和IL-6的变化规律及其对大鼠部分肝移植术后肝再生的影响。结果:冷缺血10 h肝移植组PCNA表达明显下降。与对照组相比,冷缺血45 min组大鼠移植肝内细胞因子TNF-α、IL-6表达明显增加,高于对照组和冷缺血10 h组(P<0.05),持续的时间也延长到移植后24h以上。结论:与大鼠肝切除后诱导肝再生的机制相似,TNF-α、IL-6等细胞因子在移植后肝脏再生的早期启动过程中非常重要。短暂冷缺血促进大鼠肝移植后的肝脏再生,较长时间冷缺血降低部分肝移植术后肝再生。

大鼠肝移植后肝再生的实验研究

目的 探讨部分肝移植术后移植肝的再生问题。方法 建立大鼠部分肝移植模型 ,实验分为肝切除组(PLR组 )、全肝移植组 (OLT组 )和部分肝移植组 (POLT组 ) 3组 ,分别于术后不同时间段取外周血检测总胆红素和谷丙转氨酶水平 ;取肝组织行组织学检查及流式细胞仪检测移植肝的增殖活性。结果 移植术后 1w ,肝功能酶学指标增高 ,后逐步降低 ;组织学检查术后可见单核细胞浸润 ,特别在门静脉周围汇管区 ,肝实质可见点状坏死。术后 1个月可见胆管增殖 ;PLR组和POLT组还可见二倍体和多倍体的肝细胞 ,中央小静脉、肝窦和叶间静脉轻度扩张。PLR组和POLT组肝细胞均增生活跃 ,3组分别于术后 1d、2d、4d达到增殖高峰。结论 部分移植肝和肝切除后肝脏具有同样的增殖活性 ,但增殖高峰POLT组及OLT组均要晚于肝切除后的肝脏 ,但移植组增殖周期长。这可能是由于手术操作及肝脏缺血再灌注损伤所致。

芬太尼、司可林与戊巴比妥钠复合麻醉在急性心梗猪模型的应用

目的通过评价芬太尼、司可林等药与戊巴比妥钠复合麻醉在急性心梗猪模型实验中的应用结果,建立一种较好的应用于大型动物实验的麻醉方案。方法28只猪被分成结扎组(AMIn=22)和假手术组(n=8)。AMI组动物开胸、结扎阻断心脏左冠状动脉的前降支(LAD 23、对角支处),假手术组开胸不结扎冠状动脉。手术动物使用氯胺酮(10 mg/kg)和阿托品(0.5 mg/只)肌肉注射进行诱导麻醉;开放静脉通道,术前缓注戊巴比妥钠(20 mg/kg)、芬太尼(0.008 mg/kg)进行基础麻醉;术中动物肌肉松弛采用司可林(5 mg/kg),并气管插管,联通呼吸机。结果使用该复合麻醉方案时,手术动物安静,手术中动物循环稳定,术后复苏迅速,手术实验质量提高。AMI组动物死亡率是20%;结扎后动物心电图S-T段明显提高;TTC染色:梗死区肉眼可见灰白色;光镜下:梗死区结缔组织纤维增生。结论该复合麻醉方案可以较好的应用于大型动物实验麻醉。

气液界面培养体外构建角膜上皮的实验研究

目的:建立气液界面培养体外构建兔角膜上皮的方法。评价体外构建角膜上皮的生物学特性。方法:新西兰白兔15只30只眼,取角膜缘上皮组织。组织块接种原代培养。细胞融合生长后,消化传代。以去上皮细胞人羊膜组织为载体,接种培养传代细胞,细胞融合后,用气液界面培养方法继续培养周。倒置显2微镜对体外构建的角膜上皮进行观察。培养细胞膜片固定,苏木精-伊红(H)E染色;AE1细胞角蛋白单克隆抗体免疫组化染色,光镜观察。常规制作电镜标本,透射电镜观察。以传统培养方法作为对照。结果:倒置显微镜观察,气液界面培养可以形成连续的上皮细胞层,细胞和载体之间连接较牢固。HE染色显示体外构建的角膜上皮具有复层扁平上皮的结构。免疫组化染色有较高的阳性率。透射电镜观察细胞之间有丰富的桥粒样连接。结论:气液界面培养方法可以构建复层鳞状角膜上皮。与传统培养方法比较,构建的角膜上皮组织具有较优越的生物学特性。

灵芝合剂的耐缺氧和抗疲劳作用研究

灵芝合剂的耐缺氧和抗疲劳作用研究南京医科大学第一附属医院黄蓬黄艺灵芝在降压、降低血糖、抗肿瘤、调节机体免疫功能等方面都具有一定的作用。我们对口服灵芝合剂的小鼠进行耐缺氧和负重游泳试验，并将其与西洋参和心得安的作用进行比较，观察其对小鼠耐缺氧和抗疲劳...

冷保存时间对部分肝移植肝再生影响的实验研究

目的:建立大鼠部分肝移植模型基础上,研究不同冷保存时间对移植肝再生相关细胞因子表达的影响。方法:实验分为:冷保存30mim部分肝移植组、冷保存4h部分肝移植组和冷保存10h部分肝移植组,观察各组生存率并分别于术后1、2、4天取肝组织,免疫组化检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)、TNF-α、IL-6的表达。结果:冷保存30mim部分肝移植组、冷保存4h部分肝移植组和冷保存10h部分肝移植组存活率分别为79%、71%、29%,和其他实验组相比:冷保存10h部分肝移植组PCNA、TNF-α、IL-6表达降低(P<0.05)。结论:随着冷保存时间的延长,降低了部分肝移植术后的肝再生能力和生存率。冷保存时间影响移植肝TNF-α和IL-6的表达,移植物中细胞因子TNF-α和IL-6的表达对移植肝肝再生过程中起重要的调控作用。

益肾口服液抗氧化作用的实验研究

观察益肾口服液的抗氧化作用，实验结果显示，益肾口服液能增加老年大鼠血清超氧岐化酶的活性，降低血浆过氧化脂质的含量，揭示该制剂具有清除自由基。

基于应力波因子的金属材料表面塑性损伤检测

提出了一种基于应力波因子的金属材料表面塑性损伤检测方法。将AZ31镁铝合金试件加载到不同的拉伸载荷后,利用Ritec SNAP非线性超声测试系统激发和接收Rayleigh表面波,通过实验测试在不同载荷作用后基于应力波因子的声学非线性系数与应力的关系。研究结果表明,当加载应力接近材料的屈服极限时,基于应力波因子的声学非线性系数随着应力的增加明显增大,因此可以利用基于应力波因子的声学非线性系数对金属材料表面的塑性损伤进行非线性超声无损评价。

光谱法研究头孢曲松钠与DNA的相互作用

在pH7.4的Tris-HCl介质中,以溴化乙锭为荧光探针,研究了头孢曲松钠与小牛胸腺DNA之间的相互作用.采用荧光光谱、吸收光谱、Scatchard方程、圆二色谱、热变性等手段,对作用机理进行了研究,结果表明头孢曲松钠与小牛胸腺DNA之间的作用方式为混合方式,嵌入与沟槽作用是两种主要作用方式.求得25℃时的结合常数为6.3×104L·mol-1.

深圳市“社工、义工”联动模式的现状、问题及对策

社工、义工联动模式是城市社会工作的新型模式，本文从“两工联动”机制的背景及现状等方面，总结出“两工联动”深圳模式的发展优势及面临的问题并提出可行的建议，为建设和完善深圳市“两工联动”机制提供借鉴意义。

兔股动脉血栓形成模型中国产重组葡激酶作用的实验研究

目的:研究国产重组葡激酶(recombinantstaphylokinase,r-SAK)在兔股动脉球囊损伤后血栓形成模型中的药动学特征。方法:新西兰兔30只,采用随机抽签法分为6组,分别为对照组(生理盐水10mL,30min)、r-SAK小剂量组(r-SAK0.25mg/kg,30min)、r-SAK中剂量组(r-SAK0.5mg/kg,30min)、r-SAK大剂量组(r-SAK1.0mg/kg,30min)、r-SAK单次静脉推注组(r-SAK0.5mg/kg,2min)和联合肝素治疗组(先静脉推注肝素200U/kg,继之予r-SAK0.5mg/kg,30min,溶栓后予肝素50U/(kg·h)静滴至观察终点)。用球囊损伤法制作兔右股动脉血栓形成模型,模型形成后经耳缘静脉匀速输注治疗药物。溶栓前及溶栓后不同时间点取静脉血用“溶圈法”检测r-SAK血药浓度,用药代动力学计算程序拟合r-SAK药动学模型。结果:r-SAK血浆浓度在2.0×104～2.0×106U/L范围内与溶圈直径线性关系良好,平均回收率为(96.05±11.35)%,相对标准差(relativestandarddeviation,RSD)为±11.82%。各静脉输注组血药浓度峰值时间为30min,低、中、高3个剂量组峰值浓度与用药剂量呈正相关(r=0.99998,P<0.0001)。单次静脉推注组峰值浓度为(5.16±1.02)mg/L,显著高于等剂量30min输注组(P<0.01),其峰值时间为2min。联合肝素治疗组与等剂量r-SAK单独输注比较,峰值浓度差异无显著性意义(

尾静脉液压法注射转hIL-10在大鼠肝组织中的表达

目的：采用尾静脉液压法注射SB转座元(sleeping beauty transposon)系统转人类白细胞介素10(human interleukin-10,hIL-10)在大鼠肝组织中的表达．方法：采用Ringers溶液20mL经尾静脉10-12 s内快速注射．实验分组：Rinzers 20mL对照组、DOTAP 100μg空白组、DOTAP 100μg+pT-hIL-10 50μg转基因组、pT-hIL-10 50μg+pCMV-SB 5μg共注射组(每组n=6)．尾静脉注射后采血检测肝功能和转基因组血清中hIL-10的表达．RT-PCR法检测转基因组术后7,14d肝组织中hIL-10 mRNA的表达．结果：尾静脉注射后1,4,7d Ringers 20mL组、DOTAP组、DOTAP+pT-hIL-10组、pT- hIL-10+pCMv-SB共注射组ALT水平分别为：4339±602,13516±535,6576±347,4451±465；984±125,4087±600,2117±243,1158±130；592±85,2339±300,1384±165,40±663nkat/L．DOTAP+pT-hIL-10组、pT- hIL-10+pCMV-SB共注射组术后1,4,7,14d血清hIL-10浓度分别为：818．3±24．9,640．7±20．6,441．3±25．4,322．3±15．4和1008．3±65．8,820．8±20．9,675．8±31．6,438．2±26．0μg/L,两组相比有显著差异(P＜0．01)．转座元转基因组2wk后仍有hIL-10 mRNA表达,高于DOTAP转基因组．结论：尾静脉液压法注射转hIL-10可在大鼠肝组织中较长时间表达,联合SB转座元系统转hIL-10可提高转基因的效率．

兔股动脉血栓形成模型中国产重组葡激酶的药代动力学研究(英文)

目的 :研究国产重组葡激酶 (recombinantstaphylokinase ,r SAK)在兔股动脉球囊损伤后血栓形成模型中的药代动力学特征 ,采用“溶圈法”测定血浆r SAK水平。方法 :新西兰兔 30只 ,随机分为对照组 (生理盐水 10ml,30min)、r SAK小剂量组 (r SAK 0 .2 5mg kg ,30min)、r SAK中剂量组 (r SAK 0 .5mg kg ,30min)、r SAK大剂量组(r SAK 1.0mg kg ,30min)、r SAK单次静脉推注组 (r SAK0 .5mg kg ,2min)和联合肝素治疗组 (先静脉推注肝素 2 0 0U kg ,继之予r SAK 0 .5mg kg ,30min ,溶栓后予肝素5 0U (kg·h)静滴至观察终点 )。用球囊损伤法制作兔右股动脉血栓形成模型 ,然后经耳缘静脉匀速输注溶栓药物。溶栓前及溶栓后不同时间点取静脉血用“溶圈法”检测r SAK血药浓度 ,用药代动力学计算程序拟合r SAK药代动力学模型。结果 :r SAK血浆浓度在 2 .0× 10 4 ～ 2 .0× 10 6 U L范围内与溶圈直径线性关系良好 ,平均回收率为 (96 .0 5±11.35 ) % ,相对标准差 (relativestandarddeviation ,RSD)为±11.82 %。各静脉输注组血药浓度峰值时间为 30min ,低、中、高 3个剂量组峰值浓度与用药剂量呈正相关 (r =0 .99998,P <0 .0 0 0 1)。单次静脉推注组峰值浓度为 (5 .16± 1.0 2 )mg L ,显著高于等剂量 30min输注组

初探音乐剧的“声音概念”及教学

音乐剧演唱在发声方法以及对歌唱演员的声乐素养的要求不同于纯粹的歌剧美声唱法,又远远高于普通流行唱法。正确的"声音概念"是:表现力是戏剧的,嗓音是多样的,风格是多元的。

通过非靶向代谢组学和稳定同位素示踪技术分析索拉非尼耐药白血病细胞的代谢重编程和氧化还原适应

背景与目的FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3,FLT3)近膜结构域内的内部串联重复(internal tandem duplications,ITD)是急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)预后不良的指标。酪氨酸激酶抑制剂(如索拉非尼)是急性髓系白血病主要的靶向药物,但会产生耐药性,使其疗效受限。虽然目前已对FLT3抑制剂耐药的分子机制有所了解,但代谢物水平的细胞功能及与代谢通路的相互作用尚不清楚。本研究旨在阐明白血病细胞对FLT3抑制剂耐药后代谢组学的改变情况。方法我们建立了2株携带FLT3/ITD突变的索拉非尼耐药的细胞系,命名为鼠源BaF3/ITD-R和人源MV4-11-R细胞系。我们进行了非靶向代谢组学和稳定同位素标记代谢流分析,以确定与耐药相关的代谢改变。结果耐药细胞表现出完全改变的代谢图谱,其特征表现为葡萄糖需求增加,伴随进入磷酸戊糖途径(pentose phosphate pathway,PPP)的葡萄糖通量减少;氧化应激增加,同时谷胱甘肽合成增加。我们证明了耐药细胞中代谢改变得分最高的网络与核苷酸降解相关。我们还进行了稳定同位素示踪实验,结果提示在耐药细胞中进入PPP的葡萄糖通量减少。进一步研究表明,PPP中主要酶的抑制包括氧化途径的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺陷和非氧化途径的转酮醇酶(transketolase,TKT)。此外,我们发现长期使用索拉非尼可导致FLT3/ITD阳性的白血病细胞氧化应激增加,同时伴有细胞增殖能力降低及抗氧化应答增强。结论我们通过比较代谢组学的相关数据鉴定出了独特的代谢和氧化还原适应特征,这可能促进了FLT3/ITD突变的白血病细胞发生索拉非尼耐药。

RAS基因与脂代谢在恶性肿瘤中的相互调控

RAS基因是恶性肿瘤中常见的驱动基因,在多种恶性肿瘤中高频率突变并异常活化,是驱动肿瘤发生发展的重要因素。代谢重编程作为恶性肿瘤重要特征之一,是抗肿瘤治疗的关键靶点。RAS基因可通过蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1信号轴或其他多条信号通路调控脂代谢,如脂质合成途径和降解途径等。同样,脂代谢也能修饰并激活RAS蛋白及其下游信号通路。因此,本文概述了现阶段脂代谢与RAS之间相互调控的研究,旨在为靶向脂代谢在RAS驱动型肿瘤的临床应用提供思路。

民间主动融资(PFI)在我国应用的研究

民间主动融资(PFI)是近年来各国积极探索和利用的项目融资模式,它对基础设施建设发挥着重要作用,受到越来越多的重视。在介绍PFI模式的含义及其国内外发展的基础上,就其运作体系、运作原理、不同运作机制的特点和在我国适应范围等进行探讨,就推进PFI模式在我国应用提出一些政策建议。

环境监测档案管理的几点建议

环境监测档案在监测工作中发挥着越来越重要的作用,通过对档案管理过程中出现的问题进行分析,从人员档案意识培养、建立档案体系、建立管理制度和应用信息化技术管理等方面提出建议,以促进档案管理工作更加规范化、制度化。

城市给排水设计及其优化措施

在现代城市的整体规划中，给排水的设计有着十分重要的作用，与城市经济的可持续发展和人民的基本生活息息相关。如何做好给排水设计，确保城市整体规划的和谐，实现城市经济的可持续发展成为摆在我们面前的重要课题。