ROS对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的探讨 ROS影响巨噬细胞凋亡的机制。方法激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记技术等。结果 1凋亡巨噬细胞内 NADPH氧化酶活性急剧降低使得胞内 ROS水平快速下降 ;2 ROS清除剂促进地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡 ;3PKC促进巨噬细胞凋亡和 ROS急剧减少 ;c AMP抑制巨噬细胞凋亡和 ROS急剧减少。结论 1ROS抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡 ;2 PKC、c AMP等因素通过影响地塞米松介导巨噬细胞凋亡时发生的 ROS变化促进或抑制巨噬细胞凋亡。由此可见 ,ROS作为一种巨噬细胞的信使分子和效应分子 ,一方面抑制巨噬细胞自身凋亡 。

放线菌酮诱导大鼠胸腺细胞凋亡的电镜观察

利用透射电镜详细观察了放线菌酮体内诱导大鼠胸腺细胞凋亡的形态学变化.观察显示,腹腔注射放线菌酮4小时后,大鼠胸腺细胞发生凋亡,凋亡胸腺细胞胞核和胞质发生一系列形态学变化,产生凋亡小体.主要表现为染色质断裂、浓缩、边集,大部分细胞核变成花瓣状,其它细胞核变成半月状、黑洞样和空泡状;粗面内质网大量增殖,并包裹细胞成分形成自噬体;线粒体增多、嵴紊乱并空泡化.凋亡细胞及其形成的凋亡小体被其它细胞吞噬清除.结果表明:放线菌酮体内诱导大鼠胸腺细胞发生自噬性凋亡,凋亡胸腺细胞的细胞器主动参与了凋亡过程.

利用激光扫描共聚焦显微镜检测巨噬细胞呼吸爆发

用过氧化物和超氧化物荧光探针ＤＣＦＨ－ＤＡ标记巨噬细胞后，在激光扫描共聚焦显微镜下，用最适发射波长为５３０ｎｍ的检测器１检测巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度变化，结果显示：检测器１可检测单个和多个巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度变化，经ＰＭＡ作用后，巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度增强，而且各细胞增强的幅度不同。表明：通过检测ＤＣＦＨ－ＤＡ荧光强度变化可原位实时观察单个或多个活细胞内呼吸爆发的动态变化，ＰＭＡ刺激巨噬细胞呼吸爆发作用。

小鼠腹腔巨噬细胞凋亡时线粒体的改变及其调控

目的 研究小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中线粒体和磷酸烟酰胺腺嘌呤 (NADPH)氧化酶活性的变化以及信使分子对线粒体膜电位、细胞内活性氧 (reactive oxygen species,ROS)和凋亡的影响。 方法 激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记技术等。 结果 1.地塞米松诱导巨噬细胞快速凋亡 ;2 .线粒体膜电位快速去极化 ,NADPH氧化酶活性剧降 ,ROS快速减少 ,ROS清除剂促进凋亡 ;3.蛋白激酶 C(protein kinase C,PKC)促进凋亡、ROS急剧减少、线粒体膜去极化 ;环腺苷酸 (c AMP)抑制凋亡、ROS急剧减少、线粒体膜去极化 ;环鸟苷酸(c GMP)、酪氨酸蛋白激酶 (TPK)略抑制凋亡 ,不影响 ROS变化 ,但影响线粒体膜去极化。 结论 1.地塞米松处理使线粒体内 NADPH氧化酶活性剧降 ,生成 ROS迅速减少从而促进巨噬细胞凋亡 ;2 .信使分子影响线粒体生成ROS的变化以及线粒体膜去极化从而影响巨噬细胞凋亡。提示线粒体变化 ,尤其是 ROS和膜电位的变化影响巨噬细胞凋亡。

小鼠巨噬细胞膜快速超极化和凋亡

利用激光扫描共聚焦显微技术、流式细胞术、TUNEL染色技术、FRAP技术等对大剂量地塞米松诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中膜通透性、膜脂流动性、膜电位等膜生物物理性状改变进行了研究 .结果显示 ,大剂量地塞米松诱导小鼠腹腔巨噬细胞快速凋亡 .凋亡巨噬细胞膜脂流动性升高 ,尤为显著的是 ,膜电位快速超极化 ,胞浆游离 Ca2 + 加速超极化 .结果表明 。

大剂量地塞米松快速高效诱导巨噬细胞凋亡

运用透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、原位末端标记法 (TUNEL)染色等技术 ,检测了大剂量地塞米松处理小鼠腹腔巨噬细胞的各种变化 .结果显示 ,大剂量地塞米松处理的巨噬细胞发生胞体皱缩、染色质凝聚、胞质浓缩 ;TUNEL染色呈阳性 ;0 5h后DNA凝胶电泳即呈梯状条带 ;流式细胞术作周期分析出现凋亡峰等明显的凋亡特征 .并且随处理时间延长凋亡率升高 .结果表明 ,大剂量地塞米松快速。

利用流式细胞术检测线粒体PTP开放

用线粒体膜电位特异性荧光探针Rhodamine123标记线粒体后 ,在改装FACS420流式细胞仪上用C -30数据采集和储存程序采集并存储数据 ,用C -30分析程序分析得到反映线粒体前散射 (FSC)、Rhodamine123荧光强度和侧散射 (SSC)变化的FSC,FL1和FL2合并图。结果显示 ,200μmol/LCa2 + 处理20分钟使线粒体同时发生FSC增大、Rhodamine123荧光强度降低和SSC增大。结果表明 ,流式细胞术可同时检测到Ca2 +诱导PTP开放产生的线粒体膨胀 ,膜电位消失 ,线粒体颗粒性状改变。本方法可多指标测定 ,实验过程快速 ,结果准确可靠 ,所需样品量小 ,是一种理想的PTP开放检测手段。

共聚焦镜观察凋亡巨噬细胞内pH的变化

用透射电镜观察巨噬细胞的形态学改变，结果显示，地塞米松处理８小时后，大部分巨噬细胞发生凋亡特征变化：胞突缩短、减少，胞膜完整。胞体皱缩，胞质密度增加，其中出现大量空泡。胞核染色质边聚、浓缩。另外用激光扫描共聚焦显微镜（ＡＣＡＳ５７０）和ｐＨ荧光探针ＳＮＡＲＦ┐１／ＡＭ实时检测地塞米松处理巨噬细胞胞浆ｐＨ的动态变化。加入地塞米松，多数巨噬细胞胞浆马上发生快速和短期的碱化。随后，胞浆ｐＨ缓慢降低，胞浆酸化。结果表明，胞浆酸化是细胞凋亡发展的必然过程，胞浆碱化则很可能与细胞凋亡的发生相关，也可能与细胞种类。

巨噬细胞凋亡及其调控

巨噬细胞通过介导和调控自身及其他细胞凋亡而实现其免疫调节和效应细胞功能 .引起巨噬细胞凋亡的原因有生物、化学、病理、自身等因素 .不仅巨噬细胞自身凋亡和凋亡调控有其特点 ,更为有趣的是 ,巨噬细胞可根据需要 :介导或抑制自身凋亡 ;介导或抑制其他细胞凋亡 ;抑制自身凋亡 ,介导其他细胞凋亡 .这可能是巨噬细胞在免疫调节 ,特别是肿瘤免疫中发挥重要作用的基础 .

c-Myc和细胞凋亡

c-myc的表达产物c-Myc可诱导细胞凋 亡。c-Myc诱导的细胞凋亡发生在细胞周期的不同时期,并与细胞的种类、细胞的生长条件以及引起c-Myc不当表达的原因等相关。c-Myc起介导凋亡的作用,可能主要影响凋亡的起动。c-Myc先和Max结合形成异二聚体Myc-Max,再经Myc-Max和DNA结合控制诱导凋亡所需要的转录而对凋亡进行调控。c-Myc诱导凋亡的方式有“矛盾模型”和“双重信号模型”。另外,还受p53和ROS等的影响。

利用共焦镜检测凋亡早期巨噬细胞内pH的变化

用激光扫描共聚焦显微镜（ACAS570）和pH荧光探针SNARF－1／AM实时检测地塞米松处理巨噬细胞胞浆pH的动态变化。结果显示，加入地塞米松，巨噬细胞炮装发生快速、短期碱化，随后脑浆pH值缓慢降低。结果表明，胞浆酸化是细胞凋亡发展的必然过程，胞浆碱化则很可能与细胞凋亡的发生相关。

线粒体和细胞凋亡

细胞凋亡引起线粒体的一系列变化，主要表现为，线粒体膜电位降低、膜结构改变、生成的活性氧增多、转译及转录活动减少等。反之，线粒体主动参与凋亡过程，主要通过活性氧的直接作用、发生透性变化。

6磷酸甘露糖受体（M6PR）（综述）

６磷酸甘露糖受体（Ｍ６ＰＲ）（综述）黄行许１）朴英杰１）霍霞１）唐珊珊２）（１）第一军医大学电镜室５１０５１５，广州；２）华南农业大学动物医学系５１０６４２，广州）溶酶体通过两条依赖Ｍ６ＰＲ（６磷酸甘露糖受体）的途径转运至溶酶体，一条途径是新合成的溶...

放线菌酮诱导胸腺细胞凋亡的电镜观察

放线菌酮诱导胸腺细胞凋亡的电镜观察黄行许朴英杰乔东访霍霞董武莫孙炼（第一军区大学中心实验室，广州５１０５１５）我们利用放线菌酮处理大鼠（体重１８０－２００ｇ的雌性ＳＤ大鼠，按３ｍｇ／ｋｇ体重腹腔注射放线菌酮），４小时后，用透射电镜观察大鼠胸腺细胞凋亡...

p53介导G_1停滞和细胞凋亡与肿瘤（综述）

ｐ５３介导Ｇ１停滞和细胞凋亡与肿瘤（综述）黄行许朴英杰乔东访（第一军医大学中心实验室５１０５１５，广州）细胞周期停滞（ｃｅｌｃｙｃｌｅａｒｒｅｓｔ）是指正常细胞受到不当因素影响时，主动停止在细胞周期的某一阶段，以消除所受到的不利影响。细胞凋亡（ａｐｏ...

凋亡淋巴细胞细胞器变化的电镜观察

凋亡淋巴细胞细胞器变化的电镜观察黄行许朴英杰鲍永耀霍霞乔东访（第一军医大学中心实验室）通常认为凋亡细胞内细胞器变化不明显。我们用透射电镜和Ｇｏｍｏｒｉ法观察了按３ｍｇ／ｋｇ体重腹腔注射放线菌酮４ｈ后，体重１８０～２００ｇ的雌性ＳＤ大鼠胸腺、脾脏和肠系...

鸭鸡气管和肺外支气管粘膜组织结构比较

采用透射电镜和ＡＢ－ＰＡＳ染色观察并比较了鸡鸭气管和肺外支气管粘膜组织结构特点和组化特征。结果表明，鸭鸡纤毛柱状细胞、杯状细胞和基细胞结构大体相似，但鸭的基细胞核周有较多粗面内质网，鸭粘液性细胞的分泌颗粒中有较多分布不均，大小不一的电子致密斑块，鸡粘被性细胞的分泌颗粒周围有电子致密晕。和鸡相比，鸭气管中杯状细胞比鸡多，气管和肺外支气管中气管腺比鸡少。但鸭杯林状细胞和气管腺的分泌物的酸性都比鸡强。

p53和细胞周期G_1停滞及细胞凋亡

本文综述了有关ｐ５３介导细胞周期Ｃ１停滞和ｐ５３介导细胞凋亡研究的最新进展。作为细胞转录调节因子，细胞ＤＮＡ受损甚至未受报时，ｐ５３或者主要通过影响其调控基因ｐ２１／Ｗａｌｆｌ／Ｃｉｐｌ、ｍｄｍ－２、ＣＡＤＤ４５等的表达介导细胞Ｃ１停滞，以利于受损ＤＮＡ的修复。或者主要通过影响其调控基因ｂｃｌ－２、ｂａｘ等的表达，以及Ｆａｓ／ＡＰＯ－１的表达，甚至通过ｐ５３自身的作用，介导细胞凋亡，除去ＤＮＡ受损或碱基受损细胞，以防癌变和遗传性状改变。

鸭淋巴器官中肥大细胞异质性的研究

应用５种组化染色法和透射电镜观察表明，鸭淋巴器官中含有大量的肥大细胞，它们在形态大小、异染性、颗粒的粘多糖成分、染色特性和超微结构等方面存在异质性。胸腺、淋巴结和腔上囊中的肥大细胞大小不一、形态多样；而脾脏中的肥大细胞较小，呈圆形或椭圆形。粘多糖组化染色显示，这些器官中含有中性粘多糖型和酸性粘多糖型肥大细胞，后者又可分为硫酸化粘多糖型和羧基化粘多糖型。此外，肥大细胞颗粒中还含有生物胺，但可能不含肝素。电镜下，肥大细胞表面突起稀少或无，胞核圆形或椭圆形，胞质内含有一些细胞器和大量的分泌颗粒，颗粒内部呈细粒状，不见涡卷或板层状结构。

放线菌酮诱发的凋亡淋巴细胞线粒体观察

本实验用放线菌酮处理大鼠建造细胞调亡模型。用透射电镜观察大鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结淋巴细胞的超微结构。放线菌酮处理２小时可致大鼠淋巴细胞凋亡。在凋亡早期可见淋巴细胞的线粒体、内质网、溶酶体等细胞器增多，线粒体数量变多和结构异常是凋亡淋巴细胞早期形态学特征之一。