余庆花椒精油挥发性成分分析及其对红白血病HEL细胞分化和凋亡的影响

目的研究余庆花椒精油(Yuqing Zanthoxylum bungeanum essential oil,YZBO)的挥发性成分及YZBO对红白血病HEL细胞分化和凋亡的影响。方法采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法(headspace solid-phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry,HS-SPME-GC-MS)分析YZBO的挥发性成分,并以不同质量浓度YZBO处理HEL细胞24 h后,采用MTT和台酚蓝计数分析细胞存活,流式细胞仪检测HEL细胞CD71、CD235a、CD41的分化情况,流式细胞仪和Hoechst33258染色法检测HEL细胞凋亡情况。结果YZBO含有99种化学成分,包括28种醇类物质、7种酯类物质、1种醛类物质、6种酸类物质、4种酮类物质、37种烯烃类、7种烷烃类物质、2种炔烃类物质、2种酚类物质和5种其他物质。橙花叔醇、榄香醇和τ-杜松醇是主要的醇类物质,乙酸苯乙酯和异乔木萜醇乙酸酯是其主要酯类物质。YZBO对HEL细胞的半抑制浓度(median inhibitory concentration,IC_(50))值为2.94386μg/mL,可促进CD71(45.6%)和CD235a(38.8%)的分化,而对CD41的分化不明显,可诱导HEL细胞程序性凋亡,凋亡数目呈剂量和时间依赖性,镜下和染色观察发现细胞体积变小,核固缩以及呈高亮蓝色等典型细胞凋亡形态学改变。结论YZBO的主要挥发性成分是烷烃类、醇类、烯烃类化合物,YZBO具有抗红白血病HEL细胞的生物活性,可促进分化未成熟的HEL细胞向成熟细胞方向分化,抑制向巨核细胞方向分化,并诱导其凋亡。

弱碱性消癌液抑制乳腺癌细胞生长、转移并介导其消亡

为了研究新的肿瘤治疗方法,设计了1种弱碱性消癌液(weak alkaline cancer-eliminatingliquid,WACEL),测试WACEL是否抑制癌细胞的生长转移及消亡.在体外,检测WACEL对3种细胞株,即子宫颈鳞癌细胞SiHa、非小细胞肺鳞癌细胞H1299、人乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长增殖、细胞周期、细胞凋亡、侵袭转移的影响.在体内,建立人乳腺癌裸鼠颈背皮下移植瘤模型,观察WACEL对裸鼠皮下肿瘤生长转移的作用.研究结果发现,WACEL明显抑制3种细胞系的生长增殖,G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞,阻止细胞周期的进程.细胞形态呈圆状,细胞核浓缩,caspase-3活性检测增加,线粒体的膜电位降低,细胞凋亡;活细胞数目减少,细胞膜破裂,发生消亡现象,癌细胞迁移明显减少(P﹤0.001).目标基因SCCA1、cyclinB1、MMP-2以及MMP-9的mRNA表达水平下调,caspase-3的mRNA表达水平上调;SCCA1、cyclinB1和MMP-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达上调.体内动物实验发现,处理组的肿瘤生长较对照组明显缓慢,肺组织HE染色未见明显癌细胞转移,而对照组可见癌细胞转移.WACEL能抑制乳腺癌细胞的生长、转移并介导其消亡.本研究系统分析WACEL与癌细胞本身及其pH微环境之间的相互作用机制,发现其改变癌细胞所处的微环境的重要性.

单羧酸转运蛋白过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的研究单羧酸转运蛋白(MCT)过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法将真核表达质粒pcDNA3.1/MCT(实验组)及空质粒pcDNA3.1(阴性对照组)分别转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,将未处理的细胞作为空白对照组。采用Real-Time PCR和细胞免疫荧光化学法分别检测转染MCT基因的效率;采用MTS法检测转染MCT基因后对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,同时用吖啶橙染色法检测细胞形态学的改变;采用流式细胞仪检测过表达MCT基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、坏死和周期的影响;采用Transwell实验检测转染MCT基因后对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响。结果实验组MCT的基因和蛋白水平明显高于的阴性对照组和空白对照组(P<0.01);MCT基因过表达能抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖,诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡和坏死,促使细胞周期S期上升和G2期下降,同时能抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力(P<0.01或P<0.05)。结论 MCT基因过表达能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡和坏死,调控细胞周期,同时能抑制细胞的增殖、侵袭和转移能力。

异藤黄酚对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨异藤黄酚(ISO)对急性淋巴细胞白血病(ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法人ALL Jurkat细胞和人正常肝细胞HL-7702分别培养至对数生长期,0[二甲基亚砜(DMSO)]、10、15、20及25μmol/L ISO处理2种细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞处理后24、48及72 h的光密度(OD)并计算细胞存活率;取对数生长期Jurkat细胞,分别用0(DMSO)、10、15及20μmol/L ISO处理,采用流式细胞术检测各浓度ISO组Jurkat细胞24、48 h的凋亡率,采用Hoechst 33258染色法验证各浓度ISO组Jurkat细胞24 h的凋亡率,采用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测各浓度ISO组Jurkat细胞24 h的MMP,采用RNA高通量测序(RNA-seq)分析ISO组Jurkat细胞24 h的细胞内基因转录水平,采用Western blot检测各浓度ISO组Jurkat细胞24 h时凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)、剪切的Caspase3(Cleaved-caspase3)、剪切的Caspase9(Cleaved-caspase9)、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、细胞色素C(Cytc)、蛋白激酶B(Akt)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、重组人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)、截断的Bid(t-Bid)、磷酸化的信号转导和转录激活因子-3(p-STAT3)、Janus激酶2(JAK2)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、剪切的PARP(Cleaved-PARP)、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38)蛋白的表达。结果MTT检测结果显示,与DMSO组相比,10、15、20及25μmol/L ISO组Jurkat细胞活力下降(P<0.05),且具有时间依赖性;流式细胞术结果显示,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO组Jurkat细胞凋亡率升高(P<0.05),且具有时间依赖性;Western blot结果显示,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO处理Jurkat细胞24 h后,Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9、Cleaved-PARP、t-Bid、Apaf-1及Cytc的表达上调(P<0.05),p-JAK2、p-STAT3及c-Myc的表达下调(P<0.05);RNAseq分析结果,与DMSO组相比,15μmol/L ISO处理Jurkat细胞24 h后,299个基因上调、57个基因下调,且主要影响了Jurkat细胞中MAPK及PI3K/Akt等信号途径,进一步细胞实验结果表明,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO组Jurkat细胞中p-p38的表达上调(P<0.05),p-PI3K、p-Akt的表达下调(P<0.05)。结论ISO可抑制Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制JAK2/STAT3/c-Myc、PI3K/Akt信号通路及激活p38 MAPK信号通路有关。

泌淋清胶囊对不同白血病细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨泌淋清胶囊(MLQ)对不同白血病细胞株增殖及凋亡的影响。方法取适量MLQ,采用醇提旋蒸冻干方法配制成100 g/L MLQ母液备用;取对数生长期人红白血病细胞株HEL分为125、250及500 mg/L MLQ组及对照组,取对数生长期人慢性髓系白血病细胞K562分为62.5、125.0、250.0及500.0 mg/L MLQ组及对照组,取对数生长期的人急性淋巴细胞白血病细胞Jurkat分为62.5、125.0及250.0 mg/L MLQ组及对照组,3种细胞均培养不同时间及多个时间点、采用噻唑蓝比色法(MTT)测定各组细胞的存活率;取对数生长期Jurkat细胞,设置150、300及600 mg/L及对照组(600 mg/L浓度等量的溶剂),分别培养24和48 h,采用流式细胞仪检测Jurkat细胞24和48 h的细胞凋亡率。结果各浓度MLQ组于48 h时,细胞株HEL、K562的存活率均随MLQ浓度的增加而降低(P<0.0001),各浓度MLQ组Jurkat细胞的存活率随MLQ浓度的增加而降低、细胞活力随时间的延长而下降(P<0.005或P<0.001或P<0.0001);各浓度MLQ组Jurkat细胞的凋亡率随着MLQ浓度的增加而增高(P<0.0001)。结论MLQ可抑制不同类型白血病细胞(HEL、K562及Jurkat)增殖,促进Jurkat细胞凋亡。

6种植物精油对黑腹果蝇行为影响及活性成分研究

黑腹果蝇Drosophila melanogaster是多种水果生产中为害最为严重的害虫。植物精油可影响多种昆虫的行为。本试验提取了辣椒Capsicum annuum、小香葱Allium cepiforme、韭菜A.tuberosum、洋葱A.cepa、薄荷Mentha canadensis及大黄Rheum officinale的精油,测试了各精油对黑腹果蝇行为的影响并分析了主要化学成分,在此基础上,测试了5种精油中主要化合物对黑腹果蝇行为的影响。结果表明:6种植物精油均对黑腹果蝇表现出一定的驱避活性,活性次序为:薄荷>洋葱>韭菜>大黄>小香葱>辣椒。各精油中所含的主要化合物为长叶薄荷酮、草蒿脑、茴香脑、大黄酸、3-甲氧基苯酚。长叶薄荷酮、草蒿脑及茴香脑对黑腹果蝇表现出显著的驱避活性,当浓度为62.5 mg/L时,它们对黑腹果蝇的驱避率均高于90%,15.62 mg/L的大黄酸和3-甲氧基苯酚表现出显著的引诱活性,驱避率分别为-87.50%和-117.76%。长叶薄荷酮、草蒿脑、3-甲氧基苯酚具有开发为昆虫驱避剂和引诱剂的潜力。

pH值调控肿瘤细胞生长转移的机制

实体瘤存在一个显著的特征是肿瘤胞内呈碱性和胞外呈酸性的微环境,这种酸性微环境能促进肿瘤细胞的生长、侵袭转移。调节肿瘤酸性微环境的主要因子是膜离子交换体,这些离子交换体如NHE和VHA不仅是肿瘤酸性微环境的主要调节者,而且能促进肿瘤细胞的生长转移。通过调节肿瘤胞内外pH值变化可以抑制肿瘤细胞生长转移,但pH值的变化对肿瘤细胞生长转移的调控机制尚不清楚。全文对肿瘤细胞转移的发生机制、肿瘤酸性微环境的形成和膜离子交换体对其调节作用以及三者的关系进行阐述。

基于顶空固相微萃取-气相色谱-质谱的糟辣椒挥发性物质非靶标代谢组学分析

为了探究不同品种辣椒制作的糟辣椒风味特征差异,选取在贵州地区广泛种植的4个辣椒品种成熟果实制作成糟辣椒,采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法检测分析其挥发性物质。结果表明:黄平线椒(HP)、林卡辣椒(LK)、黔椒8号(Q4)和辣研101(LY)分别含有60、71、55种和65种挥发性物质,其中HP、LK和Q4含量最高的挥发性物质是乙酸,LY含量最高的挥发性物质是香叶醇,4种糟辣椒含有24种共有物质。通过相关性分析发现,糟辣椒中醇类与烷烃类、烯烃类物质,酯类与酮类物质均呈显著负相关(P<0.05),烯烃类和烷烃类物质呈显著正相关(P<0.05);正交偏最小二乘判别分析表明,4种糟辣椒组间的差异挥发性物质种类均在10种以上,其中HP vs Q4和LK vs Q4最主要的差异物质为乙酸-2-苯乙酯,LY vs Q4和LK vs LY最主要的差异物质为乙酸、LK vs HP最主要的差异物质为苯代丙腈。基于糟辣椒9类挥发性物质建立综合品质评价模型,最终得出4种糟辣椒挥发性风味品质由高到低的顺序:HP>LY>LK>Q4。本研究对了解不同品种辣椒制作的糟辣椒挥发性风味差异具有一定意义,可为糟辣椒的原料选择等提供一定参考依据。