Adipophilin在不同组织和器官中的功能

Adipophilin(ADFP)是一种脂滴周围主要的相关蛋白,它大量分布在脂质蓄积正常或不正常的细胞中,是脂质蓄积的一个特异性标记物。它在脂肪细胞分化早期就有很高的表达,但当脂肪细胞成熟后,它的表达就明显减少。ADFP在很多组织器官中都发挥重要作用,它不仅参与脂肪细胞的脂质代谢、脂滴的形成及肝内三酰甘油(TG)的合成与代谢,还能促进巨噬细胞、平滑肌细胞的泡沫化,长链脂肪酸的摄取、乳汁的分泌等。ADFP的表达异常与动脉粥样硬化、胰岛素抵抗和肿瘤等病理过程密切相关。

脂肪分化相关蛋白通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进巨噬细胞脂质蓄积

目的观察高表达脂肪分化相关蛋白对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达及脂质蓄积的影响。方法构建表达载体pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白,使用THP-1巨噬细胞,通过瞬时转染使之高表达脂肪分化相关蛋白,依次用氧化型低密度脂蛋白和(或)丙泮尼地处理。逆转录聚合酶链反应和Western blot检测酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1及脂肪分化相关蛋白的表达,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质的蓄积。结果随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增加,巨噬细胞脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达明显增强,两者呈伴行关系。丙泮尼地能抑制酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达上调,且随处理时间延长,其表达逐渐减少,并且能减少细胞内脂滴生成。与对照组相比,瞬时转染pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白能使脂肪分化相关蛋白表达明显升高。高表达脂肪分化相关蛋白的巨噬细胞能使酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积,并协同增强氧化型低密度脂蛋白的作用。加入丙泮尼地后,高表达脂肪分化相关蛋白的作用被减弱。结论高表达脂肪分化相关蛋白能上调THP-1巨噬细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达,促进细胞内脂质蓄积。脂肪分化相关蛋白可能通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进细胞内胆固醇酯的蓄积。

脂肪分化相关蛋白通过蛋白激酶C和酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质

目的:探讨脂肪分化相关蛋白促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质的机制。方法:使用高胆固醇饲料喂养新西兰兔12周,复制动脉粥样硬化动物模型。然后用Western blotting和免疫组织化学染色观察兔主动脉脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C的表达。THP-1巨噬细胞与氧化低密度脂蛋白孵育不同的时间,使细胞负荷胆固醇酯后,用RT-PCR的方法观察脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的表达,用PepTag assay琼脂糖凝胶电泳及分光光度法观察蛋白激酶C的活性。在负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中分别加入蛋白激酶C的激动剂佛波酯和抑制剂钙磷酸结合蛋白,观察脂肪分化相关蛋白的表达,同时使用油红O染色和高效液相色谱法测定细胞内脂质的变化。瞬时转染pcDNA3.1-HA-adi表达载体到THP-1巨噬细胞,复制高表达脂肪分化相关蛋白的细胞模型。在负荷、不负荷胆固醇酯或ACAT抑制剂存在的状态下,观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达及细胞内胆固醇酯的改变。结果:与对照组相比,兔主动脉病变处脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C表达均显著增加。负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达上调,蛋白激酶C的活性升高。荷脂细胞与蛋白激酶C激动剂共孵育后,可以协同增强上调脂肪分化相关蛋白的效应,细胞内脂质增多;如果荷脂细胞同时与蛋白激酶C抑制剂共孵育,可以有效抑制荷脂所致的脂肪分化相关蛋白高表达,细胞内脂质减少。高表达脂肪分化相关蛋白的THP-1巨噬细胞能够使酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积。加入酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶抑制剂后,这些作用被减弱。结论:脂肪分化相关蛋白可能是通过蛋白激酶C活性的改变影响酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的活性,从而影响细胞内脂质的蓄积。

氧化低密度脂蛋白对A10、THP-1及ECV3043种细胞蛋白激酶C活性的影响

目的以A10、THP-1及ECV3043种细胞为研究对象,观察氧化型低密度脂蛋白对3种细胞PKC活性的影响。方法用0,10,20,40和80μg/mL oxLDL共孵育24h,PepTag(r)非放射性蛋白激酶检测法对荷脂细胞胞膜中PKC活性进行定性定量检测—琼脂糖凝胶电泳分离磷酸化条带,观察活性变化的趋势,紫外/可见分光光度计检测570nm吸光度,定量酶的绝对活性。结果随着oxLDL浓度的增加,A10细胞膜PKC活性从静息状态的(0.2613±0.0521)units/mL陡增至(0.7685±0.0869)units/mL;THP-1巨噬细胞由(0.0670±0.0091)units/mL增至(0.1357±0.0235)units/mL;ECV304内皮细胞由(0.0550±0.0075)units/mL增至(0.1216±0.0187)units/mL,其中平滑肌细胞膜活性增幅最大。结论oxLDL浓度依赖性的增强平滑肌细胞、巨噬细胞和内皮细胞的蛋白激酶C活性。

脂肪分化相关蛋白促进RAW264.7细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1高表达

目的观察高表达脂肪分化相关蛋白细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达的变化,阐明脂肪分化相关蛋白促进细胞内脂质蓄积的机制。方法构建的pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒载体转染PA317包装细胞,获得pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒。用病毒感染RAW264.7细胞,Puromycin筛选后获得稳定高表达脂肪分化相关蛋白的RAW264.7细胞株。应用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测经感染后细胞内脂肪分化相关蛋白和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达。并应用阿托伐他汀处理高表达脂肪分化相关蛋白的RAW264.7细胞,观察酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达的改变。结果用pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒感染RAW264.7细胞后,脂肪分化相关蛋白和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1 mRNA和蛋白表达明显升高,而对照组表达无明显变化。加入阿托伐他汀后,即在去除底物对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达影响的情况下,高表达脂肪分化相关蛋白细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达仍升高。结论高表达脂肪分化相关蛋白可明显上调RAW264.7细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达。

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞脂质蓄积、亲脂素与过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达及蛋白激酶Cα活性的影响

目的:以THP-1巨噬细胞为研究对象,观察氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对细胞内脂质蓄积、亲脂素(adi-pophilin)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达以及蛋白激酶Cα(PKCα)活性的影响。方法:用0、10、20、40、80 mg/L oxLDL与THP-1巨噬细胞共孵育24 h,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质蓄积情况;半定量RT-PCR和Western blot检测adipophilin、PPARγ和PKCα表达的变化情况;PepTag(非放射性蛋白激酶检测法对荷脂细胞胞膜PKCα活性进行定量检测。结果:随着oxLDL浓度的增加,THP-1巨噬细胞内脂滴增加变大,胆固醇酯/总胆固醇比值升高,adipophilin、PPARγ和PKCα表达增强(与0 mg/L oxLDL处理组比较,P均<0.05),胞膜PKCα活性由(0.07±0.01)kU/L增至(0.14±0.02)kU/L(P<0.05)。结论:oxLDL可增强巨噬细胞PKCα活性,上调PKCα、PPARγ和adipophilin的表达,促进THP-1巨噬细胞中脂质的蓄积;oxLDL、PKCα、PPARγ和adipophilin之间可能存在着某种调控机制。

Calphostin C抑制脂肪分化相关蛋白诱导的ACAT1表达

目的我们已经发现adipophilin通过改变乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)的表达来促进细胞内脂质蓄积,病理状态下形成泡沫细胞,成为动脉粥样硬化的始动因素。本研究旨在探讨该过程所涉及的信号通路,阐明adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制。方法通过克隆adipophilin基因,构建逆转录病毒载体pQCXIP-HA-Adi,使用siRNA技术构建pSuper-retro-adipophilin siRNA逆转录病毒载体,包装病毒后,感染RAW264.7细胞,筛选后获得高或低表达adipophilin的细胞。将该细胞分别与300 nmol/L PKC抑制剂Calphostin C孵育16 h或同时再加入50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育,应用RT-PCR和Western blot检测细胞内ACAT1的表达。当低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育时,在不同的时间点取样,RT-PCR和Westernblot检测各时间点细胞内ACAT1的表达。结果高表达adipophilin细胞中ACAT1表达增加,低表达adipophilin细胞中ACAT1表达减少。无论在高或低表达adipophilin的细胞中,Calphostin C能够抑制ACAT1的表达,与不孵育Calphostin C组相比差别有显著性。与ox-LDL孵育使高表达adipophilin的细胞荷脂,同样能够发现Calphostin C抑制ACAT1的表达。低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育1 h后,ACAT1 mRNA开始下降;孵育8 h后,ACAT1蛋白开始下降;孵育16 h后ACAT1 mRNA及蛋白表达均明显下降,与对照组相比差别有显著性。高及低表达adipophilin或负荷脂质状态下,Calphostin C能够时间依赖性的抑制ACAT1的表达。结论 adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制可能是,PKC信号分子作用于adipophilin,并进一步影响ACAT1的表达,最终导致细胞内脂质积聚。

提高临床病理住院医师规范化培训水平的方法探讨

病理诊断在临床诊断、医学教育和医学研究中具有非常重要的地位,是评价医疗质量的金标准。然而,与发达国家相比,我国病理学科发展相对落后,病理住院医师规范化培训水平也存在一定的差距,因此需要不断提高我国病理住院医师规范化培训水平,培养出有潜力的高素质病理医师。文章结合我市病理住院医师规范化培训和教育情况并复习相关文献,探讨提高临床病理住院医师规范化培训水平的方法,为提升病理住院医师的培训水平提供一定的借鉴和参考。

DNA倍体技术和液基细胞学筛查宫颈上皮内瘤变的价值比较

目的分析研讨DNA倍体技术和液基细胞学(TCT)筛查宫颈上皮内瘤变的价值。方法随机从该院2016年6年—2018年5月期间收治接受宫颈上皮内瘤变筛查的患者中抽取852例进行讨论,患者均接受DNA倍体活检和TCT检查,比较此两种方式检查准确性,此次诊断金标准为病理检查。结果852例女性患者中,DNA倍体检查发现异常细胞共94例,阳性率为11.03%,其中33例异常细胞≥3个(35.11%),61例异常细胞为1~2个(64.89%)。TCT检查阳性患者共79例(9.27%)。DNA倍体检查阳性率11.03%高于TCT检查阳性率9.27%,数据差异有统计学意义(P<0.05)。此次检出阳性者均接受病理活检,共98例患者得到确诊,DNA检查准确率95.92%(94/98)比病理检查100.00%(98/98),数据差异无统计学意义(P>0.05),TCT检查准确性80.61%(79/98)低于病理检查100.00%(98/98),数据差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床筛查CIN可考虑首选DNA倍体技术,与TCT技术比较,可早期检出宫颈脱落细胞异常状态,且诊断准确性高。

泛素特异性加工酶2-69在乳腺导管原位癌中的表达及意义

研究泛素特异性加工酶2-69(USP2-69)在乳腺导管原位癌中的表达及意义。2016年2月—2018年12月,乳腺导管原位癌患者50例,分别采集乳腺导管原位癌组织以及癌旁正常组织,以免疫组织化学法检测USP2-69、Ki-67、PI3Kp110α表达情况并进行对比。通过ROC曲线分析USP2-69、Ki-67、PI3Kp110α诊断乳腺导管原位癌的能效。结果显示,乳腺导管原位癌组织USP2-69阳性率高于癌旁正常组织(96.00%比12.00%,P<0.05)。乳腺导管原位癌组织Ki-67阳性率高于癌旁正常组织(94.00%比10.00%,P<0.05)。乳腺导管原位癌组织PI3Kp110α阳性率高于癌旁正常组织(86.00%比34.00,P<0.05)。ROC曲线联合检测USP2-69、Ki-67、PI3Kp110α表达情况诊断乳腺导管原位癌的曲线下面积、敏感度、特异度高于上述两项指标单独检测(均P<0.05)。结果表明,USP2-69、Ki-67、PI3Kp110α在乳腺导管原位癌组织中存在明显高表达,联合检测上述指标有助于早期诊断乳腺导管原位癌。

白细胞介素23在子宫内膜息肉中的表达及临床意义

目的探讨白细胞介素23(IL23)在子宫内膜息肉中的表达情况,为进一步探索子宫内膜息肉形成的原因和发病机制提供实验依据。方法随机选取2016年4月至2018年4月于南方科技大学医院妇产科收治的子宫内膜息肉患者的子宫内膜息肉组织和正常子宫内膜组织,采用免疫组化方法和蛋白印迹方法检测IL23在子宫内膜息肉组织和正常子宫内膜组织中的分布情况及表达水平,采用SPSS.22软件分析IL23与子宫内膜息肉各临床病理特征之间的相关关系。结果IL23的表达可见于子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的细胞质中;子宫内膜息肉组织中IL23表达阳性率较正常子宫内膜组织降低,差异具有统计学意义(P<0.001);相关性分析显示,IL23的表达与阴道分泌物镜检异常(r=-0.298,P=0.035)和阴道不规则出血(r=-0.258,P=0.033)均呈负相关,但与患者年龄、孕次、产次、息肉直径、息肉位置及息肉个数均无显著相关性(P>0.05)。结论IL23的表达与子宫内膜息肉的发生和临床表现存在显著关联性,研究IL23与子宫内膜息肉之间的关系有助于阐明子宫内膜息肉发病的分子机制。

血必净注射液对腹腔镜围术期患者炎性反应的抑制和器官保护作用

目的探讨血必净注射液对腹腔镜手术患者围术期炎性反应抑制和器官功能的保护作用。方法选择2020年3月—2021年3月南方科技大学医院普外科行腹腔镜手术无中转开腹的住院患者60例,采用随机数字表法分为观察组及对照组,各30例。观察组患者术前给予血必净注射液2 ml/kg+生理盐水100 ml,对照组患者术前给予生理盐水200 ml。2组患者均于术前(T_(1))、术毕(T_(2))、术后12 h(T_(3))或术后3 d早上6:00(T_(4))取血,测定患者体温、血清白介素-6(IL-6)、血常规、C反应蛋白(CRP)、肝肾功能、空腹血糖(FBG),比较2组不良反应。结果T_(3)时,观察组体温低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。T_(2)时,观察组血清IL-6水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。T_(1)、T_(3)时,2组患者白细胞(WBC)、中性粒细胞比例(NE)、肌酐(CRE)、空腹血糖(FBG)组内及组间比较差异无统计学意义(P>0.05);T_(3)时,2组CRP、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DB)水平较T_(1)明显升高,尿素(UREA)水平较T_(1)明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),但T_(3)时,2组间CRP、TBil、DB水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);T_(3)时,对照组患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)均较T_(1)时及观察组T_(3)时明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05),但T_(1)、T_(3)时,观察组患者ALT及AST水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组使用血必净注射液后均未出现全身皮疹、呼吸困难、心律失常、过敏性休克等严重不良反应,所有患者术中、术后生命体征均平稳,无血栓栓塞、心律失常等并发症,均未接受二次手术。结论腹腔镜手术中使用血必净注射液可有效减轻围术期的炎性反应,对围术期肝功能有显著的保护作用,有助于患者术后恢复,且安全有效。