日本鳗鲡TBK-1基因的克隆及免疫刺激的表达模式

利用PCR技术克隆了日本鳗鲡(Anguilla japonica)TBK-1基因(AjTBK-1),其开放阅读框为2193 bp,编码731个氨基酸。序列结构分析结果显示,AjTBK-1含有4个保守结构域,分别为氨基端激酶结构域,泛素样结构域和羧基端两个卷曲-螺旋结构域。系统发育分析表明,鱼类与四足类的TBK-1各自聚为一枝。实时定量PCR(qPCR)结果显示,AjTBK-1在日本鳗鲡各组织中均有表达。Poly I:C刺激6 h后,日本鳗鲡脾脏组织中AjTBK-1的上调倍数最高,为对照组的1.63倍;迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)感染24 h后,日本鳗鲡肝脏组织中AjTBK-1的上调倍数最高,为对照组的2.2倍:表明AjTBK-1参与了日本鳗鲡抗病毒、抗细菌免疫反应应答。

不同叶果比对设施‘红美人’杂柑秋梢叶片生理生化特征的影响

为探究不同叶果比(leaffruitratio,LFR)对设施柑橘秋梢叶片生理生化特征的影响,以设施栽培‘红美人’杂柑为试材,设置高(LFR=100)、中(LFR=80)、低(LFR=60)3个叶果比,测定秋梢叶片中矿质元素、碳氮代谢物、碳氮代谢的关键酶、抗氧化酶活性等生理指标的变化。结果显示,LFR80和LFR100秋梢叶片的磷、钾、镁、淀粉含量较高;丙二醛、脯氨酸、抗坏血酸含量较低;β-淀粉酶、硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶和抗坏血酸过氧化物酶的活性较高;LFR80和LFR100秋梢叶片整体养分含量充足,受胁迫程度较低。结果表明,设施栽培‘红美人’杂柑的叶果比控制在80~100有利用于平衡营养生长和生殖生长,延缓叶片衰老,维持树势强健。

鸡尾葡萄柚速生早结技术研究初探

柑橘目前是世界第一大类水果,也是我国南方农民增收致富的重要经济作物。鸡尾葡萄柚(Citrus paradise Osbeck.)作为一种优新柑橘品种,具有酸甜可口、多汁化渣、富含功能性物质等特点,深受消费者喜爱。鸡尾葡萄柚是暹罗甜柚(Citrus grandis L. Osbeck.和弗鲁亚橘(Citrus reticulate Blanco)杂交选育而成。鸡尾葡萄柚长势强健,挂果能力强,试种面积扩大较快,但普通栽培管理方式要到第三年小量挂果,且初结果树果实品质较差,资金成本回收慢,影响农户种植的信心,更不利于鸡尾葡萄柚的发展。如何使鸡尾葡萄柚在保证树势和果实品质的基础上快速投产,目前暂未见相关报道。本试验计划通过树形改造和精准施肥促进鸡尾葡萄柚1年生小苗树冠快速形成,在第三年达到批量挂果的能力,并通过精准水肥控制促进初结果树果实品质的提升,形成鸡尾葡萄柚的速生早结技术,该技术有利于鸡尾葡萄柚的进一步推广,对期望资金快速回笼的农户提供一个种植新的栽培管理参考。

日本鳗鲡TRAF3基因的克隆及功能研究

为探究鱼类TRAF3在鱼类抗病毒免疫应答中的功能及作用机制,实验利用逆转录PCR克隆获得了日本鳗鲡TRAF3转录本(AjTRAF3),利用生物信息学软件分析了AjTRAF3的结构特征,利用实时荧光定量PCR(qPCR)、双荧光素酶报告系统以及免疫共沉淀等方法对其表达规律、功能及作用机理进行了初步分析。AjTRAF3的开放阅读框长度为1707 bp,编码568个氨基酸。序列结构分析结果显示,AjTRAF3由N端的环结构域2个锌指结构域以及1个螺旋结构域和C端高度保守的TRAF-C(MATH)结构域组成。qPCR结果显示,AjTRAF3在日本鳗鲡各组织中均有表达,脑组织中表达量最高,其次为头肾,心脏中的表达量最低。Poly I:C刺激6 h后,日本鳗鲡脾脏组织中AjTRAF3上调倍数最高,为对照组的15.83倍。迟缓爱德华氏菌感染24 h后,日本鳗鲡脾脏组织中AjTRAF3上调倍数最高,为对照组的31.47倍。此外,本研究构建了AjTRAF3真核表达质粒,发现过表达AjTRAF3能显著上调炎症及抗病毒相关基因的表达,可显著增强AjIFN2、AjIFN4和NF-κB启动子荧光素酶活性。并能显著上调由AjRIG-IN、AjMAVS、AjIRF3诱导的AjIFN2、AjIFN4和NF-κB启动子活性。免疫荧光结果显示,AjTRAF3主要定位于细胞质中,且与AjMAVS存在共定位。免疫共沉淀结果显示,AjTRAF3通过MATH结构域与AjMAVS相互结合,缺失该结构域后,其与AjMAVS的相互作用消失,推测AjTRAF3可通过介导RIG-I/MAVS信号转导途径调控鱼类的抗病毒免疫应答。本研究结果为进一步揭示鱼类TRAF3的生物学功能奠定了基础。

基于疾病与活性化合物靶点网络研究牛舌草治疗大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用

目的基于脑缺血-再灌注损伤与牛舌草中活性化合物靶点网络,研究牛舌草治疗大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用及机制。方法采用线栓法制备脑缺血-再灌注损伤大鼠模型,缺血1.5 h再灌注24 h,对大鼠神经功能进行评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)测定大鼠脑梗死体积。采用网络药理学的分子网络分析技术、蛋白质-蛋白质相互作用网络、基因本体(GO)生物过程富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析、分子对接等方法研究牛舌草治疗脑缺血-再灌注损伤作用机制。结果牛舌草给药治疗能够显著改善脑缺血-再灌注损伤引起的神经行为功能障碍,减轻脑组织病理损伤。并且牛舌草能够通过143个缺血性脑卒中相关靶点,调控炎症反应、细胞凋亡等生物过程,干预肿瘤坏死因子信号通路、血管内皮生长因子信号通路和缺氧诱导因子-1信号通路等发挥作用。结论网络药理学及动物实验表明,牛舌草通过多靶点、多机制整体联合治疗脑缺血-再灌注损伤,可有效降低脑损伤和保护神经功能。

高海拔4000 m以上地区驻训官兵龋病调查分析

目的 了解高原高海拔地区驻训官兵的龋病流行情况。方法 采用《第三次全国口腔健康流行病学调查方案》及世界卫生组织1997年版《口腔健康调查基本方法》和标准器材,采用分层、整群抽样的方法,对驻阿里地区海拔4 000 m及以上的580名驻训官兵,依据高原驻扎时间、恒牙的患龋数量、龋病的病变程度和患龋牙位进行检查,并分析相关数据。结果 所调查的580名研究对象的恒牙患龋率为25.00%,龋均为0.51。驻扎时间≤2年的军人患龋率最高为26.51%,驻扎时间≥5年的军人患龋后补牙率是驻扎时间≤2年军人的2倍余,驻扎时间≤2年的军人和农村籍军人因患龋导致缺失的比例分别高于驻扎时间≥5年的军人和城镇籍军人。在龋病病变程度中,浅龋占比最高,为10.69%,龋坏牙位主要发生在磨牙。结论 高原高海拔驻训官兵口腔健康意识认识不足,在口腔医疗环境、医疗设备、医疗技术不足的情况下,官兵龋患率、龋坏程度和龋病未治率较高。应加强对驻训人员的系统性口腔卫生服务,提高部队官兵的口腔健康水平。

斜带石斑鱼IFN-γ基因的克隆与表达分析

IFN-γ在天然免疫和适应性免疫应答中均发挥着重要的作用。由于低等脊椎动物IFN-γ与哺乳动物IFN-γ相似性非常低,硬骨鱼类的IFN-γ近年来才得到鉴定。本研究报道了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的IFN-γ基因,并对其表达进行了分析。斜带石斑鱼IFN-γcDNA全长为867 bp,编码200个氨基酸。其基因组全长为5 104 bp,由4个外显子、3个内含子组成。氨基酸序列比对显示斜带石斑鱼IFN-γ与高等脊椎动物IFN-γ的序列相似性较低,仅为32.5%～39%,与其他硬骨鱼类的IFN-γ相似性为38.0%～68.5%。序列分析结果显示,斜带石斑鱼IFN-γ分子C末端中存在IFN-γ的特征序列以及核定位基序。二级结构分析结果显示斜带石斑鱼IFN-γ序列中包含6个α螺旋结构,其排列与高等脊椎动物的IFN-γ类似。应用荧光定量PCR检测了IFN-γ基因在Poly I:C诱导后的表达变化。发现在肾、脾、鳃、头肾、皮肤和胸腺组织中,Poly I:C能显著诱导IFN-γ的表达,在胸腺中上调倍数最高,其次为头肾、脾、肾、皮肤和鳃,而在脑和心脏组织中没有显著变化。据此推测,IFN-γ在斜带石斑鱼抵抗病毒感染的过程中起有十分重要的作用。

斜带石斑鱼IgM、IgZ和IgD重链基因的克隆

应用RACE方法获得斜带石斑鱼膜结合型免疫球蛋白M（membrane-bound immu-noglobulin M,mIgM）,膜结合型免疫球蛋白D（mIgD）,分泌型免疫球蛋白Z（secretory immu-noglobulin Z,sIgZ）的重链基因。斜带石斑鱼膜结合型IgM重链恒定区包含3个恒定区结构域（μ1,μ2,μ3）以及两个跨膜外显子（TM1,TM2）,TM1外显子与μ3结构域末端相连接。氨基酸序列相似性分析结果显示,斜带石斑鱼mIgM各恒定区与牙鲆mIgM恒定区相似性最高,为53%-78%。mIgD的cDNA全长为3 375 bp,开放阅读框包含3 006 bp,其恒定区由1个μ1外显子,7个δ外显子以及跨膜区组成。斜带石斑鱼IgD恒定区与鳜IgD各恒定区氨基酸序列相似性最高,δ1-δ7的相似性分别为75.5%、75.8%、65.4%、76.6%、88.1%、90.6%、82.8%,TM结构域为82.7%。sIgZ的基因结构与其他硬骨鱼类sIgZ的结构相似,包括4个外显子和3个内含子,内含子长度分别为222、129和458 bp。利用半定量PCR分别检测了这3种基因在斜带石斑鱼各器官/组织中的表达,发现mIgM在头肾、肾脏、脑、脾脏、肠、鳃、心脏和胸腺中均有表达;mIgD的mRNA在头肾、肾脏以及胸腺中有较高的表达,在肠中表达量较低;sIgZ mRNA主要分布于淋巴组织如头肾、肾及脾脏中,而在鳃、心脏和胸腺中的丰度较低。

美国、日本农产品物流模式对湖北省的借鉴

通过对美国、日本农产品物流模式的分析,总结美国、日本农产品物流模式的特点,结合湖北省农产品物流现状,找出湖北省农产品物流模式的问题和不足,并以美国、日本先进经验为借鉴,提出完善湖北省农产品物流模式的建议。

基于无人机影像的林地管理情况检查与应用分析

根据林地管理情况检查实际工作需要,从遥感数据处理、判读区划、资料收集核对等方面详细介绍了检查前期工作准备,突出强调了无人机在现地验证中的运用。试验通过Pix4D mapper软件处理无人机采集信息,获得实时航拍正射数据,对比分析无人机在林地管理情况检查工作中的优势,并提出森林资源监督管理方案。

3S技术在云南省天然林资源保护工程二期中的应用

简述了3S技术(GPS、RS、GIS)在精准林业中的应用。分别从森林资源补充调查和监测、规划建设项目落实及成果图(表)编制三个方面,概述了3S技术在云南省天然林资源保护工程二期建设中的应用。3S技术为科学合理的制定实施方案提供了强有力的技术保障。

荆州市农产品冷链物流体系建设的出路探讨

近年来,随着生活水平的不断提高,人们也越来越关注农产品的安全卫生和营养健康问题。同时荆州市农产品产量也在逐年扩大,而生鲜农产品对物流有较高的要求,使得市场对冷链物流的需求日益提高,农产品冷链物流的建设也更为必要。在对荆州市农产品冷链物流体系建设的必要性进行研究的基础上,分析了荆州市现阶段冷链物流体系的发展现状及存在的问题,对荆州市农产品冷链物流体系的构建提出几点建议。

荆州市农产品第三方物流发展研究

分析了荆州市农产品物流发展现状,对荆州市农产品第三方物流发展的可行性进行了分析,并对荆州市农产品第三方物流的发展提出五点对策和建议。

中日关系的改善困境与恶化限度

清华大学国际关系研究院中外关系定量预测组数据显示,2022年1月至12月,中日关系持续走低,两国关系分值已降至-5.4分,为邦交正常化以来最低点(见图1)。这一变化趋势与本组此前对2022年中日关系的预测观点吻合:两国关系下滑将加剧,但分值跌至-6分以下的可能性较低。(1)这一年中,中日两国在政治、安全领域的负面事件频发,日本政府对涉台、涉疆、涉港等中国内政议题的干预呈现常态化趋势;同时,两国间实质性正面合作较少,中日首脑会晤等高层互动并未彻底扭转双边关系的低迷态势。

丹酚酸A抑制NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应

目的利用脂多糖(LPS)刺激BV2小胶质细胞构建体外神经炎症模型,探讨丹酚酸A(SalA)对神经炎症的抑制作用及机制。方法(1)BV2细胞分为细胞对照组(正常培养24 h)、LPS(1 mg·L^(-1)孵育24 h)组、SalA(0.01,0.05,0.5,5,10和20μmol·L^(-1)培养24 h)组和LPS+SalA(加入LPS 1 mg·L^(-1)及SalA 0.01,0.05,0.5,5,10和20μmol·L^(-1)共同培养24 h)组,MTT法检测细胞存活率。(2)除LPS+SalA组SalA给药浓度为0.05,0.5和5μmol·L^(-1)外,其他分组处理同方法(1)。Griess法检测BV2细胞一氧化氮(NO)分泌水平,ELISA检测BV2细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6分泌水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TNF-α,IL-1β和IL-6 mRNA表达水平,Western印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平及NF-κB P65和NF-κB抑制因子α(IκBα)的磷酸化水平,免疫荧光法检测iNOS蛋白表达及NF-κB P65的核转位。结果(1)与细胞对照组相比,LPS 1 mg·L^(-1)和SalA 0.01~20μmol·L^(-1)对BV2细胞存活率无显著影响。(2)与细胞对照组相比,LPS 1 mg·L^(-1)组NO分泌水平显著升高(P<0.01),TNF-α,IL-1β和IL-6分泌及mRNA表达水平显著上升(P<0.01),iNOS表达水平及NF-κB P65和IκBα磷酸化水平显著升高(P<0.01),且iNOS和NF-κB P65蛋白免疫荧光强度显著升高(P<0.01);与LPS 1 mg·L^(-1)组相比,SalA5μmol·L^(-1)可使NO表达水平显著降低(P<0.01),TNF-α,IL-1β和IL-6分泌及mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。SalA 0.5和5μmol·L^(-1)可使iNOS表达水平及NF-κB P65和IκBα磷酸化水平显著降低(P<0.05,P<0.01),且iNOS和NF-κB P65蛋白免疫荧光强度明显降低(P<0.01)。结论SalA通过抑制NF-κB信号通路减轻LPS刺激引起的BV2细胞炎症反应。

日本鳗鲡肝脏表达抗菌肽2基因的克隆与表达

为探讨鱼类抗菌肽基因的生物学功能,研究应用RACE方法克隆获得了日本鳗鲡(Anguilla japonica)肝脏表达抗菌肽2基因(Liver-Expressed Antimicrobial Peptide 2,LEAP-2),即AJLEAP-2的cDNA序列,全长为450 bp,开放阅读框编码89个氨基酸。其成熟肽含有LEAP-2保守基序"C-X5-C-X4-C-X4-C"。AJLEAP-2基因组结构与其他脊椎动物LEAP-2相同,都包含有三个外显子。利用荧光定量PCR检测了AJLEAP-2在日本鳗鲡不同组织/器官中的表达,发现其转录子在肝脏中表达量最高,是内参基因(β-acHn)的6倍;其次是肠道,但其表达量仅为肝脏的1/130。此外,还检测了AJLEAP-2在日本鳗鲡玻璃鳗(Glass eel)阶段的转录表达水平,结果显示,玻璃鳗中AJLEAP-2的转录表达量仅低于黑仔期的肝脏,为黑仔鳗肠道表达量的2倍。LPS和迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)刺激能显著上调鳗鲡血液中AJLEAP-2的转录表达,刺激16h后上调倍数最高,分别为对照组的86倍和12倍。此外,LPS刺激72h和E tarda刺激8h后,肠道中AJLEAP-2显著上调表达(P<0.05),为对照组的8倍。Poly I:C刺激24h后,血液中AJLEAP-2转录表达显著下调。结果表明,AJLEAP-2在日本鳗鲡抗细菌感染过程中起重要的作用。

日本鳗鲡TLR21基因的鉴定、免疫应答与启动子分析

为研究TLR21(Toll like receptor 21)在低等脊椎动物中的功能及表达调控机制,我们扩增获得了日本鳗鲡TLR21(Aj TLR21)c DNA序列,其编码的蛋白具有TLR家族的共同特征。Aj TLR21基因结构与其他鱼类和两栖类TLR21相同,由单个外显子编码。荧光定量结果显示,Aj TLR21在血液、鳃、脾脏、中肾等11个组织/器官中转录表达,其中在血液中表达量最高。经Poly I:C诱导后8h,Aj TLR21在脾脏和中肾中的表达量显著性上调;诱导后16h,Aj TLR21在血液、鳃、肠和脾脏中的表达量显著性上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,在Aj TLR21 5′上游调控序列–1179 bp到+117 bp存在Poly I:C调节的正调控元件。经Edwardsiella tarda诱导后16h和72h,Aj TLR21分别在血液和中肾组织的表达量显著性上调,表明Aj TLR21同时也参与了抗细菌免疫应答,其在机体免疫系统中的功能具有多样性。研究对于理解日本鳗鲡Aj TLR21的免疫学功能具有重要的理论意义和应用价值。

非洲爪蟾短型肽聚糖识别蛋白基因的克隆与鉴定

采用生物信息学方法首次对非洲爪蟾短型肽聚糖识别蛋白(xePGRP-S)基因进行了克隆,并对其在胚胎发育和成年爪蟾各组织中的表达状况进行了分析。xePGRP-ScDNA全长720bp,开放阅读框为549bp,编码182个氨基酸。序列比对显示xePGRP-S与其他物种PGRP-S的序列相似性在42.4%—50.5%之间。RT-PCR显示在非洲爪蟾胚胎发育至3d时可以明显检测到xePGRP-S的表达,之后呈持续性表达,且在所检测的心、肝、脾、肺、肾、肠和胃这7种组织器官中呈组成型表达。

利用紫砂土研制劈开砖

以辽宁省喀左县紫砂土为主要原料,采用三种配方研制劈开砖。分析测试了样品的吸水率,抗折强度,抗冻性,热稳定性,利用差热分析研究了劈开砖烧结的反应过程,利用X射线衍射仪(XRD)和扫描电子显微镜(SEM)表征了劈开砖的物相组成和显微结构,并讨论了劈开砖的烧成机理。研究结果表明:辽宁省喀左县的紫砂原料具有较好的理化性能指标,在合理的工艺条件下,研制的劈开砖各项性能符合行业要求。

苹果和红梨化学疏花疏果效应及其胚胎学机制研究

以8a生红梨和16a生"红富士"苹果为试材,以尿素、硫脲、石硫合剂、乙烯利+萘乙酸、单氰胺、TMN-6、CFA为化学疏除药剂,采用随机区组设计方法进行田间试验,研究筛选了适合昆明地区苹果、梨的化学疏除剂并明确其疏除机制及对胚胎学方面的影响。结果表明:处理后1周,1.5°Be石硫合剂处理的红梨花朵坐果率比对照低了10.1个百分点,有显著的疏除效果,单果比例为87.92%;生理落果后,0.25%硫脲处理的红梨花朵坐果率比对照降低了21.6%,单果比例为94.49%;0.3%TMN-6适宜作为红富士苹果的疏除剂,并能在一定程度上提高红富士果实的纵、横径及单果重。TMN-6是通过烧伤花瓣、花药和柱头,杀死部分花粉粒并抑制花粉管的生长而起作用;CFA对柱头有杀伤作用并能杀死大部分花粉管,硫脲能抑制位于花柱中上部的花粉管的生长,石硫合剂对花粉无明显的杀伤作用但对花粉管的生长有明显的抑制作用。施用于红富士的各种药剂均对授粉前的胚囊发育进程没有影响。