γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病中MDM_2的表达研究(英文)

目的观察MDM2在γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病组织细胞中的表达变化,探讨MDM2在辐射致癌中的作用 及可能的分子机制。方法:用γ射线照射BALB/c小鼠诱发白血病发生,建立辐射致癌动物模型;分别应用Western印迹分析 和原位杂交(ISH)技术,从蛋白水平和mRNA水平检测小鼠胸腺和骨髓组织中MDM2的表达情况;运用免疫沉淀技术检测 MDM2蛋白的磷酸化水平;PCR-SSCP及银染技术用于检测基因突变。结果:癌变组和辐射未癌变组胸腺细胞/骨髓细胞 MDM2蛋白表达水平都高于对照组(P<0.05);而癌变组和辐射未癌变组之间MDM2蛋白水平无明显差异。在γ射线照射后 早期辐射组骨髓MDM2蛋白表达水平也明显高于对照组。ISH结果显示:癌变组织中MDM2阳性反应和阳性率均明显高于 对照组。在癌变组组织中发现有MDM2磷酸化比其他组都明显升高(P<0.05)。辐射组和对照组均未检测到基因突变。结论: MDM2可能参与γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病的发生和发展过程,作用机制可能与过表达及高磷酸化所致活性增强有 关。MDM2的基因突变在辐射致小鼠白血病发生中不起主要作用。

羧酸富勒烯C_3的合成及其保护辐射损伤效应

通过Bingle环加成反应,利用富勒烯与丙二酸二乙酯催化合成羧酸富勒烯C3,经1H-NMR,13C-NMR以及MS-ESI确认其结构和分子量。通过芬顿体系检测了C3清除自由基的能力。利用CCK-8法和Annexin-V/PI染色和流式细胞分析法,分别检测C3对γ射线照射后AHH-1、HIEC细胞存活率,细胞凋亡和细胞周期变化的影响。结果表明,C3具有良好的清除自由基的能力,当芬顿体系中C3终浓度为1000mg/L时,清除效率高达93%左右。对1-12Gyγ射线照射的细胞,C3具有良好的辐射保护作用,表现为照后细胞存活率明显升高,细胞凋亡率显著降低;且对于较高剂量的照射,辐射防护效果较好。说明C3对γ射线照射的细胞具有较好的辐射防护作用,其机理可能主要与其清除自由基的作用有关。

肝癌及不同发育阶段小鼠肝组织中DNA-PKcs的表达及其对细胞增殖作用的研究

目的:研究DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)在小鼠不同发育阶段肝脏组织和肿瘤组织中的表达,明确其促细胞增殖和在肿瘤发生发展中的作用及机制。方法:采用免疫组织化学方法和蛋白印迹检测小鼠不同发育阶段肝脏组织和肿瘤组织中DNA-PKcs的蛋白表达。通过干扰RNA技术沉默肝肿瘤HepG2细胞中DNA-PKcs的表达,通过细胞增殖实验和裸鼠致瘤实验观察肿瘤细胞增殖和致瘤能力的变化。蛋白印迹法检测细胞增殖相关信号通路蛋白p-GSK3β和c-myc的表达水平。结果:在发育过程中,随着细胞增殖能力降低,肝组织中DNA-PKcs表达水平下降,在成年鼠肝组织中DNA-PKcs只有微弱表达。而在肿瘤组织细胞中DNA-PKcs表达显著增高(P<0.01)。细胞生长曲线结果显示,DNA-PKcs表达抑制后,HepG2细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.01),致瘤能力也显著降低。信号通路蛋白分析发现DNA-PKcs抑制导致GSK3β磷酸化水平和c-myc蛋白水平降低(P<0.01)。结论:DNA-PKcs表达水平与肝脏细胞的增殖能力密切相关。DNA-PKcs的高表达可能通过调节细胞的增殖,参与肝脏肿瘤的发生和发展过程,作用机制和Wnt/GSK/c-myc信号通路相关。

HIV-1 Tat通过抑制启动子活性调控MCAK基因表达

目的验证HIV-1Tat对有丝分裂着丝点关联驱动蛋白MCAK基因表达的调节作用并探讨其分子机制。方法利用表达Tat的人横纹肌肉瘤细胞(TE671)模型及原核表达纯化的Tat蛋白,通过Northern印迹法和蛋白印迹技术验证HIV-1 Tat对MCAK基因表达的抑制作用。PCR扩增MCAK基因各启动区片段,与荧光素酶报告质粒相连接,并转染到TE671细胞,通过荧光素活性分析法检测DNA片段启动活性,确定MCAK基因的活性启动区域。进一步通过HIV-1Tat与MCAK启动区作用,分析Tat对启动子活性的调控作用。结果Northern印迹和蛋白印迹结果证实Tat蛋白对MCAK转录、翻译水平的表达都有强烈的抑制作用;荧光报告质粒检测系统分析表明MCAK的核心启动区存在于-399～+1bp区域,且其启动子活性在Tat存在的情况下受到明显的抑制。结论HIV-1 Tat能作用于MCAK基因启动区-399～+1bp区域,导致MCAK启动子活性降低,从而抑制MCAK基因的表达。

MDM2功能及其调控机制

MDM2是调节 p5 3通路的重要基因 ,具有降解p5 3及泛素化的功能 ,参与肿瘤的发生、发展 ,并与胚胎发育和组织分化相关。近年来对MDM 2的分子作用机制和调控机制的研究取得了一定进展 ,已用MDM2反义寡核苷酸进行肿瘤的基因治疗。

p73在γ射线诱发小鼠淋巴细胞白血病中的表达(英文)

目的 :观察 p73基因在γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病小鼠胸腺和骨髓组织细胞中的表达变化 ,探讨 p 73在辐射致癌中的作用。 方法 :用γ射线照射 BAL B/ c小鼠诱发白血病 ,建立辐射致癌动物模型 ;分别应用 Western印迹和原位杂交(ISH)技术 ,从蛋白水平和 m RNA水平检测小鼠胸腺和骨髓组织中 p73基因的表达情况 ;运用免疫沉淀技术 (IP)检测 P73蛋白的磷酸化水平 ;RT- PCR/ DNA测序技术检测基因突变和变异体的表达。结果 :辐射后癌变组胸腺 /骨髓中的 P73蛋白表达水平明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ;而对照组和辐射未癌变组之间蛋白水平无明显差异 (P>0 .0 5 )。原位杂交 (ISH)结果显示癌变组织中 p73阳性反应和阳性率均明显高于对照组。在癌变组织中发现 P73磷酸化水平明显升高 (P<0 .0 5 )。 RT- PCR发现在癌变组中有 p73变异体γ、δ过表达以及 N末端缺失的突变体 (DTA- p73)表达。结论 :p73可能参与γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病的发生和发展过程 。

白细胞介素13

白细胞介素１３是最近发现的由Ｔｈ２细胞产生的细胞因子。其对Ｂ细胞调节作用与白细胞介素４相似，另外它也具有Ｔｈ１细胞的功能，是一种多功能活性的细胞因子。本文对其生物学功能和分子生物学性质作一简单介绍。

远航中船员的心理变化及其对免疫功能的影响

目的:研究船员远航时心理和免疫功能的变化特点。方法:在连续航行35 d的某航天测量船上选取40名船员作为研究对象,采用SCL-90症状自评量表进行问卷调查,并检测T淋巴细胞亚群、血清补体和抗体的含量。结果:船员在航行中期(航行20-23 d)的心理健康水平明显低于航行前(起锚前3-5 d):有躯体化、强迫、抑郁、焦虑、敌意、恐怖和精神病性等7项因子得分高于航行前(P<0.05,P<0.01);航行后期(航行后32-34 d)精神状态较中期有明显改善;CD4/CD8在航行中期也达到了最低值,明显低于航行前(P<0.01),返航前比值有所升高,与心理健康水平呈同步性改变;多种抗体(IgG、IgA、IgM)和补体(C3、C4)的含量也发生了明显的改变。结论:远航作业严重影响了船员的心理健康和免疫功能。

^(60)Coγ射线照射诱发小鼠恶性肿瘤

目的 :建立 γ射线诱发小鼠恶性肿瘤动物模型。 方法 :BAL B/ c小鼠经 6 0 Coγ射线全身照射 ,每次吸收剂量 1.75Gy,吸收剂量率 0 .88Gy/ min,每周 1次 ,共 4次。照后每隔 1～ 2个月处死一批小鼠 ,分别取胸腺、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、胃、生殖腺、肠系膜、盲肠、大脑等组织器官 ,甲醛溶液固定后进行病理学检查及裸鼠致瘤实验。 结果 :照后 15个月 BAL B/ c小鼠出现的肿瘤类型以白血病为主 ,并发现汗腺瘤及恶性卵黄囊瘤 ;白血病经病理学证实为淋巴细胞型白血病 ;白血病及汗腺瘤的裸鼠致瘤实验已稳定连续传至第 12代。 结论 :成功建立 6 0

γ射线诱发的白血病小鼠胸腺细胞蛋白质酪氨酸磷酸化水平的变化

目的 :探讨γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞总蛋白质酪氨酸磷酸化水平的变化。方法 :35 3只 BAL B/ c小鼠分为照射组及对照组 ,照射组经 6 0 Coγ射线全身照射后 ,病理证实出现白血病者为癌变组 ,未出现任何肿瘤者为未癌变组 ;对照组为正常 BAL B/ c小鼠 ,未经γ射线照射 ,与照射组同步喂养。分离胸腺细胞 ,应用免疫沉淀法及 Western印迹分析检测蛋白质酪氨酸磷酸化水平。 结果 :癌变组胸腺细胞中蛋白质酪氨酸磷酸化水平总体上明显高于对照组及未癌变组 ,尤以相对分子质量 (4 7.5～ 83)× 10 3及 32 .5× 10 3附近蛋白变化最为明显 ;相对分子质量为 35× 10 3的蛋白在癌变组中酪氨酸磷酸化明显 ,而在对照组及未癌变组中未检测到磷酸化的发生。 结论

P44/42 MAPK和STAT3在γ射线诱发的小鼠白血病骨髓细胞中的表达

为了观察P4 4 / 4 2MAPK和STAT3在γ射线诱发的小鼠白血病骨髓细胞中的变化情况 ,首先利用γ射线诱发Balb/C小鼠发生白血病 ,成功地建立了辐射致癌模型 .在此基础上 ,将动物分为三组 :癌变组、辐射未癌变组和对照组 ,利用免疫沉淀和免疫印迹技术 ,检测各组骨髓细胞的P4 4 / 4 2MAPK和STAT3蛋白及磷酸化水平变化情况 .结果显示 :癌变组骨髓细胞P4 4 / 4 2MAPK蛋白及磷酸化水平均高于辐射未癌变组和对照组 (P <0 0 5 ) ;而STAT3蛋白及磷酸化水平在三组骨髓细胞之间无显著差异 (P >0 0 5 ) .说明Ras/P4 4 / 4 2MAPK途径可能在γ射线诱发的小鼠白血病中发挥一定的作用 。

Fas、Bcl-2在γ射线体外诱发的白血病小鼠骨髓细胞中的表达

目的 :观察 Fas、Bcl- 2在 γ射线体外诱发的急性淋巴细胞白血病小鼠骨髓细胞中表达情况 ,以探讨辐射致癌的机制。方法 :采用 4次 1.75 Gyγ射线全身照射 BAL B/ c小鼠诱发白血病模型 ,通过流式细胞仪对照射后白血病组、未癌变组及对照组小鼠骨髓细胞中 Fas、Bcl- 2的表达进行检测 ;应用抗 Fas抗体诱导细胞凋亡 ,进一步观察 Fas、Bcl- 2的表达对骨髓细胞凋亡的影响。 结果 :白血病小鼠骨髓细胞 Fas表达较未癌变组及对照组明显下降 (P<0 .0 1) ,而 Bcl- 2的表达明显增强 (P<0 .0 1) ;白血病小鼠骨髓细胞明显耐受抗 Fas抗体诱导的细胞凋亡。 结论 :Fas低表达、Bcl- 2高表达导致了细胞凋亡受到抑制 ,这可能是辐射引起小鼠急性淋巴细胞白血病的机制之一。

γ射线诱发小鼠白血病模型中p16基因的改变(英文)

目的 :研究 γ射线诱发小鼠白血病模型中 p16基因的失活机制。 方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)扩增 39例 γ射线诱发的白血病和对照小鼠胸腺组织中 p16基因第 1、第 2外显子 ,检测等位基因纯合性缺失 ;用限制性内切酶 - PCR法检测p16基因的甲基化发生情况 ;并应用 PCR-单链构象多态性分析银染方法检测 p16基因碱基突变的发生。结果 :在白血病模型中 ,外显子 2的缺失率为 33.3% ,甲基化的发生率为 2 3.1%。 结论 :γ射线诱发的小鼠白血病模型发生、发展过程中伴有 p16基因的改变 。

苯甲酸雌二醇对辐射诱导小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响

目的:观察苯甲酸雌二醇对γ射线诱导小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响,以探讨其抗放射作用机制。方法:昆明种小鼠,随机分为正常组、单纯照射组和用药照射组3组,每组各15只。单纯照射组小鼠用7射线照射4.0Gy;用药照射组于照射前10d每只小鼠肌内注射0.1mg苯甲酸雌二醇,同时用γ射线照射4.0Gy;正常对照组不作任何处理。采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测骨髓造血细胞DNA裂解片段,采用流式细胞术观察各组小鼠照射后4h、8h、12h骨髓造血细胞凋亡、Fas和Bcl-2表达的变化情况。结果:γ射线照后8h,骨髓造血细胞DNA裂解片段增加,出现了典型DNA"梯状"条带,而用药照射组和正常对照组均未见明显"梯状"条带。照射后4h、8h、12h,用药照射组骨髓造血细胞凋亡率均明显低于单纯照射组(P<0.01);Fas表达较正常对照组略有增加,并未出现单纯照射组所呈现典型的高峰期,与单纯照射组比较显著降低(P<0.01);Bcl-2表达不降反而升高,与单纯照射组相比差异显著(P<0.01)。结论:苯甲酸雌二醇可能是通过下调Fas和上调Bcl-2的表达抑制了γ射线诱导的小鼠骨髓造血细胞凋亡。

^(60)Coγ射线诱导的白血病小鼠中辐射致癌相关基因的筛选

目的 :研究辐射诱导的白血病小鼠胸腺组织中的辐射致癌相关基因。方法 :应用基因芯片技术对 6 0 Coγ射线诱导的小鼠白血病胸腺和正常对照组织中的 m RNA进行检测。 结果 :在 80 0 0条目的基因中共发现显著差异的表达基因 (差异在 3倍以上 ) 319条 ,其中表达上升的有 111条 ,下降的有 2 0 8条 ,这些基因涉及到信号转导、细胞周期调节、免疫球蛋白、DNA修复等功能。 结论

P44/42MAPK在γ射线诱发的白血病小鼠骨髓和胸腺细胞中的表达

目的 :探讨 P4 4 / 4 2 MAPK在 γ射线诱发的白血病小鼠骨髓和胸腺细胞中的表达及其作用。 方法 :建立 6 0 Coγ射线体外诱发 BAL B/ c小鼠白血病模型 ;分离白血病组辐射未癌变组和对照组小鼠胸腺和骨髓细胞总蛋白 ,应用蛋白印迹法分析各组细胞 P4 4 / 4 2 MAPK的表达及磷酸化水平。 结果 :白血病小鼠骨髓和胸腺细胞 P4 4 / 4 2 MAPK的蛋白表达均显著高于未癌变组和对照组 (P<0 .0 5 ) ;在 3组小鼠中 ,白血病小鼠的胸腺和骨髓细胞 P4 4 / 4 2 MAPK磷酸化水平最高 (P<0 .0 5 )。结论 :提示 P4 4 / 4 2

SHP-1蛋白在γ射线诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1蛋白在γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化特点。方法:建立γ射线体外诱发BALB／c小鼠白血病模型。实验分为癌变组、未癌变组及对照组,从各组小鼠获取胸腺细胞,应用Western印迹、免疫沉淀法及生物化学方法检测各组胸腺细胞SHP-1蛋白质的表达、酪氨酸磷酸化水平及酶活性。结果:癌变组SHP-1蛋白的表达明显高于对照组及未癌变组(P<0.01),但各组SHP-1的酪氨酸磷酸化水平及酶催化活性差异不显著(P>0.05),且其酪氨酸磷酸化水平与酶活性间存在明显相关性。结论:在γ射线诱发的白血病小鼠的胸腺细胞中,SHP-1蛋白表达明显升高,但可能存在酪氨酸磷酸化障碍,导致其活性降低,即表现出SHP-1蛋白表达与其活性分离现象,提示辐射致癌中SHP-1蛋白可能存在功能障碍。

原花青素预处理对体外人源细胞辐射损伤的防护作用

目的:探讨原花青素(PC)预处理对体外人淋巴母细胞AHH-1和肠腺上皮细胞HIEC电离辐射损伤的防护效果及可能的作用机制。方法:采用CCK-8法检测原花青素预处理对γ射线照射后AHH-1、HIEC细胞存活率的影响,Annexin-Ⅴ/PI染色和流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化,蛋白质印迹法检测细胞Bcl-2蛋白表达变化。结果:PC预处理的细胞辐照后存活率明显升高(P<0.01),4Gy照射用药组AHH-1细胞凋亡率(11.78%)显著低于单纯照射组(26.38%,P<0.01),8Gy照射用药组HIEC细胞凋亡率(5.32%)亦显著低于单纯照射组(12.45%,P<0.01)。PC预处理组AHH-1、HIEC细胞受照射后其Bcl-2蛋白表达下降受到抑制。结论:PC预处理对细胞的辐射损伤具有较好的防护效果,可能与其促进受损细胞Bcl-2蛋白表达有关。

HIV-1 Tat蛋白抑制DNA修复和增强细胞辐射敏感性

近年来临床研究发现,艾滋病合并肿瘤患者放疗后产生的正常组织和皮肤毒性反应明显高于普通肿瘤患者.本研究将探讨HIV-1Tat蛋白是否影响细胞对电离辐射敏感性及机理.两个表达Tat蛋白的细胞系TT2和TE671-Tat均来源于人的横纹肌肉瘤细胞(TE671)并已转染了不同来源的tat基因.使用细胞辐射后克隆形成率检测辐射敏感性,RT-PCR和Western印迹检测基因表达,彗星电泳和γ-H2AX位点检测DNA双链断裂和修复.TT2和TE671-Tat细胞的辐射敏感性与转染空载体及对照细胞相比明显增加.彗星电泳和γ-H2AX位点检测表明,在表达Tat蛋白的细胞中,辐射诱导DNA双链断裂的修复水平明显降低.通过RT-PCR和Western印迹检测进一步证实,表达Tat蛋白的细胞中DNA修复蛋白DNA-PKcs的表达被抑制.HIV-1Tat蛋白抑制DNA-PKcs的表达,降低DNA双链断裂的修复,使细胞的电离辐射敏感性增高.本研究为了解AIDS合并肿瘤患者对放射治疗敏感性变化提供了重要信息.

富勒烯赖氨酸衍生物对AHH-1细胞防护效应研究

本文研究了富勒烯赖氨酸衍生物C60-Lys对AHH-1细胞的辐射防护作用,并对其防护机理进行了初步研究。发现800mg/LC60-lys能提高辐照后AHH-1细胞存活率,在8Gy照射剂量时,给药组与对照组AHH-1细胞存活率分别为64.6%和41.3%。荧光凋亡实验发现,当C60-lys浓度为1200mg/L时,凋亡率为16.3%,这明显低于单纯辐照组的39.2%。在800mg/LC60-lys和4Gy辐照剂量时,给药时间对细胞存活率有显著影响,辐照前给药,AHH-1细胞平均存活率是85.6%,而辐照后给药则是64.1%。C60-lys降低4Gy辐射引起的AHH-1细胞的G2期阻滞及辐射对AHH-1细胞DNA损伤,尤其是减少8-羟基-2'脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)含量。