基于指纹图谱与多元统计分析的栀子不同炮制品评价

目的建立栀子、炒栀子、焦栀子的UPLC指纹图谱,结合多元统计分析评价不同炮制品的差异。方法应用Waters超高效液相色谱仪(UPLC)进行测定,色谱柱为YMC Triart C18(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温为30℃,检测波长:0~6 min为238 nm,6~11 min为440 nm,11~18 min为238 nm。使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012年版)建立栀子、炒栀子与焦栀子的共有模式,并进行相似度评价。采用SIMCA-P 12.0软件进行正交偏最小二乘法判别分析(Orthogonal partial least square discriminant analysis,OPLS-DA),寻找对不同炮制品分组贡献最大的共有组分。结果3种炮制品共有7个共有峰,指认了其中的京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、西红花苷-Ι、西红花苷-Ⅱ4个化合物,各炮制品具有一定的相似度。OPLS-DA结果发现栀子与焦栀子、栀子与炒栀子、焦栀子与炒栀子均存在差异,对差异贡献最大的组分分别是京尼平龙胆双糖苷与西红花苷-Ι、西红花苷-Ι与西红花苷-Ⅱ、西红花苷-Ι与西红花苷-Ⅱ。结论本方法适用于栀子不同炮制品的指纹图谱分析,能有效区分栀子的不同炮制品,为栀子不同炮制品的质量标准提升提供一定的参考价值。

稻黑孢霉A8及其诱导的人工沉香次生代谢产物分析

目的:分析稻黑孢霉(Nigrospora oryzae)A8及其诱导的人工沉香次生代谢产物。方法:三氯甲烷萃取白木香内生真菌及其诱导的人工沉香,气相-质谱联用法(GC-MS)分析代谢产物,自动质谱退卷积定性系统(AMDIS)结合保留指数(RI)法鉴定挥发性成分。结果:N.oryzae A8发酵液共检出58个色谱峰,鉴定其中30种化合物,检出相对含量最高的化合物是β-苯乙醇;N.oryzae A8人工诱导白木香生产的3批沉香药材共鉴定出38种化合物,主要为倍半萜类、芳香族类、2-(2-苯乙基)色酮类等沉香特征性成分。结论:N.oryzae A8发酵液可高效诱导白木香结香,其次生代谢产物可能参与沉香形成过程。

沉香挥发性成分与其抗肿瘤活性的灰色关联度分析

目的对沉香挥发性成分与其体外抗肿瘤活性进行灰色关联度分析。方法 GC-MS法分析4种沉香三氯甲烷提取物的挥发性成分,磺酰罗丹明B(SRB)比色法测定其对Hep G-2、SF-268、MCF-7、NCI-H460细胞株的IC50,再通过灰色关联度分析成分峰面积相对含有量与相应IC50的相关性。结果沉香挥发性成分主要有倍半萜、色酮、甾体,对4种肿瘤细胞株的IC50在11.11~58.55μg/m L之间。与抗肿瘤活性关联度大于0.70的18个挥发性成分中,有6个2-(2-苯乙基)色酮、3个甾体、8个倍半萜。保留时间202.3 min的2-(2-苯乙基)色酮和豆固酮表现出较强的抗肿瘤活性,与4种肿瘤细胞株的IC50关联度均在0.8以上。结论沉香挥发性成分中的2-(2-苯乙基)色酮化合物在其抗肿瘤活性方面具有重要的作用。

白木香叶与沉香树脂形成相关的指标性成分研究

目的应用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术结合多元统计分析,筛选白木香叶中与沉香树脂形成相关的指标性成分。方法以GC-MS法分析已结香和未结香的白木香叶三氯甲烷提取物,正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)对样品进行分组,变量权重(VIP)结合相关系数[P(corr)]筛选差异组分,自动质谱退卷积定性系统(AMDIS)结合保留指数(RI)鉴定差异组分。以GC-MS的选择性离子检测(SIM)模式测定差异组分油酸酰胺、芥酸酰胺含量。结果已结香和未结香白木香叶中,与贮存时长无关的差异组分为油酰酸胺、芥酸酰胺、三十二烷、α-香树脂醇和羽扇豆醇。油酸酰胺和芥酸酰胺线性范围分别为0.68~6.8μg·mL^(-1)(r=0.9993)和2.72~27.2μg·mL^(-1)(r=0.9997);平均加样回收率分别为99.9%(RSD=3.69%)和93.8%(RSD=3.23%)。未结香组油酸酰胺与芥酸酰胺的平均含量均高于各结香组,而且未结香组油酸酰胺含量明显高于化学试剂诱导组(P<0.05)。结论油酰酸胺和芥酸酰胺可作为白木香叶中与贮存时长无关、与沉香树脂形成相关的指标性成分,可为沉香的采收时间提供判断依据。

基于特征图谱的法半夏炮制工艺研究

目的建立法半夏UPLC特征图谱方法,采用正交试验设计对法半夏的炮制工艺进行优化。方法选取浸泡天数、干燥时间、干燥温度为法半夏炮制主要因素,采用L_(9)(3^(4))因素水平表,以各炮制品中的特征图谱单位重量总特征峰峰面积为指标,对法半夏炮制工艺进行优选研究。结果结合生产经验及经济性,法半夏最佳炮制工艺参数为浸泡6天、70℃干燥、干燥20 h。结论建立了法半夏的UPLC特征图谱,该方法简单、可靠,可用于鉴别法半夏的质量;并以特征图谱为半定量指标,优选了法半夏炮制工艺,为法半夏的大生产炮制工艺提供了参考。