5636例疑似地中海贫血样本的异常血红蛋白分子特征及外周血参数分析

目的 了解可疑罹患(或携带)地中海贫血(简称“地贫”)基因人群中异常血红蛋白基因携带率、异常血红蛋白突变类型及其复合地贫时的分子特征和血细胞参数变化。方法 对中南大学湘雅医学院附属海口医院2016年10月至2022年8月5 636例疑似地贫受试者的样本采用高通量测序技术进行基因检测,对检测出的异常血红蛋白的样本及其血细胞参数进行回顾性分析。结果 5 636例疑似地贫样本中共检出异常血红蛋白46例,检出率为0.82%,突变类型有10种,分别是Hb Owari、Hb HekinanⅡ、Hb Port Phillip、Hb Saclay、Hb New York、Hb Hamilton、Hb J-Bangkok、Hb Shizuoka、Hb Zengcheng和Hb Hachioji;不同异常血红蛋白之间血液表型差异较大,其中Hb New York、Hb HekinanⅡ、Hb Hamilton、Hb Owari、Hb J-Bangkok五组血细胞参数[平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血红蛋白(Hb)和红细胞分布宽度(RDW)]比较差异均有统计学意义(P<0.05),Hb HekinanⅡ的MCV、MCH、MCHC和Hb平均值最低,Hb Hamilton的四种血细胞参数平均值最高;RDW的数据显示HB New York最高,其次是Hb HekinanⅡ,第三是Hb J-Bangkok,平均值均高于正常范围;性别间的血细胞参数比较差异无统计学意义(P>0.05);异常血红蛋白患者无论是合并α-地贫基因型还是β-地贫基因型,与单纯的异常血红蛋白组相比,血细胞参数差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 疑似地贫基因的样本中异常血红蛋白突变类型较多,且有罕见基因型;异常血红蛋白的血细胞参数变化不同,或可为地贫的致病机制找到新的思路。

近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞分离培养及生物学特性

目的:建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)脂肪间充质干细胞(adiposederived mesenchymal stem cells,ASCs)体外分离培养和鉴定方法。方法:选取6月龄健康ILMW 3头,从颈部皮下无菌获取脂肪组织约100 g,采用0.1%I型胶原酶消化组织,获得ILMW-ASCs,并进行体外培养和增殖;取第3,5,8,13代细胞进行如下实验:测量细胞大小,观察细胞形态,检测细胞表型、细胞周期、细胞凋亡,并进行细胞诱导分化和绘制细胞增殖曲线。结果:体外分离培养的ILMW-ASCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞培养36 h出现贴壁,第5天进入对数增殖期,约7 d后80%的细胞汇合。ILMW-ASCs细胞直径及体积分别为(17.00±0.54)μm和(2.58±0.24)×10–9 L。细胞表面抗原CD29,CD44和CD90呈高表达,不同代数之间的差异不明显(均P>0.05);CD45,CD8a和HLA-DR呈低表达,与第3代相比,随着代数的增加细胞表面抗原的阳性率逐渐增高(均P<0.05)。ILMW-ASCs成脂诱导结果为油红O染色呈阳性;ILMW-ASCs成骨诱导结果为茜素红染色呈阳性。ILMW-ASCs的第13代细胞出现凋亡和衰老,与较低培养代数相比细胞周期S期的比例下降(均P<0.05)。结论:ILMW-ASCs取材方便,贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后能保持稳定的生物学特性,是猪来源ASCs的最佳选择之一,可为大动物疾病模型和组织器官修复的细胞治疗提供候选干细胞来源。

脂肪间充质干细胞的研究进展

过去,脂肪只被看作是一种能量储存的组织而未引起研究者们重视。直到20世纪80年代中期,确定其参与性激素的新陈代谢后,脂肪组织变成一个参与人体新陈代谢和免疫应答重要的内分泌器官[1]。2001年Zuk等[2]首次报道一种新成体干细胞的来源。

IL-35在肺炎支原体感染患者血清的表达水平及在不同性别、年龄的差异

目的分析不同年龄段肺炎支原体感染患者血清中白细胞介素35(IL-35)的水平,探讨其与性别、年龄的相关性以及在肺炎支原体感染过程中的作用。方法将纳入标准的94例肺炎支原体感染阳性作为研究组,69例肺炎支原体阴性作为对照组。符合入选标准的研究组与对照组按年龄分为三组:分别是≤1岁组(n=56),>1-10岁组(n=54)和>60岁组(n=53)。通过ELISA方法分别检测各年龄组中血清IL-35水平,分析研究组与对照组血清IL-35水平在不同年龄组之间的表达差异以及相关性。结果≤1岁组中研究组IL-35水平[(41.65±28.80)ng/L]高于对照组[(27.87±19.69)ng/L,P=0.041],>1-10岁组中研究组IL-35水平[(18.55±10.08)ng/L]低于对照组[(30.46±10.61)ng/L,P=0.000],>60岁组中研究组IL-35水平[(33.22±14.65)ng/L]高于对照组[(22.61±8.92)ng/L,P=0.002];对照组血清IL-35水平在不同年龄组两两比较差异无统计学意义(P=0.226);研究组血清IL-35水平≤1岁组高于>1-10岁组(P=0.000);>60岁组高于>1-10岁组(P=0.002);≤1岁组与>60岁组之间差异无统计学意义(P=0.086>0.05)。结论 IL-35可能在肺炎支原体感染过程发挥了抗炎症作用。对照组与研究组血清中均存在IL-35表达,其表达水平与性别、年龄没有相关性,血清IL-35水平可以考虑作为肺炎支原体感染控制水平评估的免疫学参考指标。

检验医学实习生培养与就业

临床检验医学实习是巩固、提高、延伸和发展所学的专业知识。为培养符合要求,毕业后能胜任临床检验工作做铺垫,同时增强学生在多元的知识结构和文化环境下,适应社会的能力和就业竞争力,本文从检验医学实习生带教与管理现状存在的主要问题进行剖析,对如何在高校教学改革和医疗改革中有效培养检验医学实习生提出对策,为提高临床检验医学实习生的整体素质、学习效率及就业指导提供参考。

低强度脉冲超声增强人外周血淋巴细胞增殖及抗癌活性的实验研究

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人外周血淋巴细胞(HPBL)增殖和抗肿瘤效应的影响。方法采用Ficoll梯度离心法分离HPBL;将LIUPS强度0设为对照组,10 mW/cm^2组、20 mW/cm^2组、30 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组为刺激组刺激HPBL增殖,每天一次,每次刺激10 min,连续刺激2 d。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;酶联免疫吸附法检测抗肿瘤因子[γ干扰素(INF-γ)、白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]表达情况;采用共培养HPBL与人肺巨细胞癌95D细胞检测其抗肿瘤活性。结果 LIPUS刺激HPBL2 d共2次后,30 mW/cm^2组的细胞增殖能力增强,与对照组和其他强度刺激组比较,细胞数量和细胞团块数量均增多。CCK-8检测结果显示,30 mW/cm^2组光密度值与对照组、20 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组比较差异均有统计学意义(P=0.032、0.027、0.027、0.001)。抗肿瘤因子检测显示,30 mW/cm^2组INF-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF分别为(39.66±8.30)ng/L、(619.84±125.94)ρg/ml、(461.29±14.08)ng/L、(108.11±2.07)ng/L,均高于对照组[(24.40±6.84)ng/L、(279.56±128.18)ρg/ml、(417.17±21.44)ng/L和(96.53±1.56)ng/L]和50 mW/cm^2组[(16.52±0.87)ng/L、(141.00±93.71)ρg/ml、(171.96±9.46)ng/L、(72.56±8.95)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.01)。共培养实验显示,30 mW/cm^2组人肺巨细胞癌95D细胞杀伤率为51.11%±5.21%,显著高于对照组(42.86%±0.55%)和50 mW/cm^2组(42.00%±3.67%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LIPUS刺激可提高HPBL的增殖活性和杀伤率。

人脂肪间充质干细胞体外高效扩增新方法

目的运用低强度脉冲场超声(LIPUS)刺激促进人脂肪间充质干细胞(hASCs)增殖,为临床干细胞体外高效增殖提供新方法。方法通过LIPUS体外刺激hASCs细胞生长,采用Scepter 2.0手持细胞计数器进行细胞计数,运用荧光倒置显微镜观察细胞形态,运用流式细胞仪检测细胞表面标志物,并进行干细胞临床前质量检测。结果刺激组50 mW/cm^2和60 mW/cm^2的LIPUS刺激强度均能促进细胞增殖,60 mW/cm^2强度更显著,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞倍增时间比对照组缩短,差异具有统计学意义(P<0.05),刺激后刺激组细胞表面标志物无变化,增殖后干细胞质量检测符合标准要求。结论 LIPUS刺激可促进hASCs有效增殖,低强度脉冲场超声可作为干细胞体外扩增的新方法。

两种人包皮成纤维细胞分离培养方法的比较

目的:作为理想的种子细胞,成纤维细胞的高效获取及纯化尤为重要。本研究通过比较改良组织块培养法(improved tissue culture method,ITCM)及酶消化培养法(enzyme digestion method,EDM)分离培养人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFF),以探讨两种方法的优缺点。方法:ITCM是将剪碎的皮肤组织置0.1%Ⅱ型胶原酶中于4℃下消化过夜,分离表皮与真皮,对真皮组织采用0.25%胰酶于室温下再次消化15 min,待组织块贴壁于培养皿后进行培养。EDM是将剪碎的皮肤组织置0.25%胰酶中于4℃下消化过夜,分离表皮与真皮,将真皮组织再次于4℃下用0.1%Ⅱ型胶原酶消化过夜,然后将组织块与酶的混合物一起过滤、挤压,用含有胎牛血清的培养基冲洗滤网,对得到的细胞悬液进行培养。ITCM与EDM均采用两种酶进行消化,但两种酶的使用顺序、消化时间及温度不同,最终接种于培养皿中进行后续培养的分别是组织块和细胞悬液。本研究利用ITCM和EDM分离、培养HFF,观察ITCM组和EDM组HFF的原代至第3代(Passage 0~Passage 3,P0~P3)的细胞形态;染色波形蛋白、CD68和角蛋白以鉴定细胞纯度;绘制P3生长曲线对比两组细胞的增殖能力。采取120 mJ/cm^(2)的中波紫外线(medium-wave ultraviolet,UVB)照射P3 ITCM组和EDM组HFF,建立光损伤模型。根据有无照射紫外线,实验分为UVB组和未照射对照组(Control)。采取二次离心法提取贫血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP),用含不同浓度(0,2.5%,5.0%及10.0%)PPP的完全培养基对ITCM组和EDM组的HFF进行分组培养,加入PPP 24 h后用CCK-8试剂盒检测损伤细胞的增殖情况。结果:ITCM组培养至第3天时可观察到大量HFF,受杂质影响小;EDM组HFF形态的观察受到较多杂质影响;第9天时,两组细胞均可传代;两种方法体外分离培养的HFF均呈长梭形、旋涡状生长。HFF培养至P2时ITCM组和EDM组波形蛋白的阳性率比较差异有统计学意义[(97.36±0.76)%vs(99.4±0.56)%,P<0.01],CD68的阳性率比较差异有统计学意义[(70.8±0.46)%vs(78.37±0.75)%,P<0.01],pan-keratin的表达分别为阳性和阴性。HFF培养至P3时ITCM组与EDM组比较,波形蛋白和角蛋白染色结果差异无统计学意义(均P>0.05),CD68的阳性率比较差异有统计学意义[(74.73±1.37)%vs(85.27±2.63)%,P<0.001]。EDM组P3 HFF的增殖能力显著高于ITCM组(P<0.05)。经UVB(120 mJ/cm^(2))照射后,两种方法获取的HFF出现光损伤改变;2.5%PPP组修复损伤细胞的能力显著高于其余浓度组(P<0.05或P<0.001)。结论:与ITCM法比较,EDM法获得的HFF具有纯化速度快、增殖能力强的优点;PPP对HFF的紫外线损伤具有修复作用。实验结果可为后续临床治疗研究提供理论依据。

2008~2018年我国手足口病流行性分析

目的∶分析我国20082018年手足口病的流行情况,为手足口疫情预防与控制提供参考。方法∶从中国知网(CNKI)网站上检索符合条件的文献,对20082018年全国手足口病报道数据进行系统分析。采用Excel表格和SPSS 20.00进行数据统计,GraphPad Prism 6进行制图。结果∶分析结果显示,20082018年我国手足口病平均发病率约为(123.37±93.14)例/10万人,男女比例为(1.50±0.15)∶1,发病人群绝大多数集中于5岁以下年龄段,以散居儿童为主;发病时间呈现明显的季节性特征,其中单峰的省份高于双峰省份,双峰发病趋势分别为47月份和1011月份,单峰发病趋势主要集中在57月份。基于空间分布研究显示发病规律出现明显的地区差异(P<0.05),高发病率地区主要集中在我国的东南部,自西向东和自北向南呈现发病率逐渐增高趋势。致病病原体以EV71、CA16和其他肠道病毒为主,其中以EV71为主要致病病原体占53.5%;以CA16为主要致病病原体占14.3%;以其他肠道病毒为主要致病病原体占32.2%。结论∶我国手足口病发病率高,有明显地域、季节、性别和年龄等分布特征。根据本地区手足口病发病规律,对重点区域和人群提前做好防控是切断疫情传播的有效途径。

猪链球菌2型溶菌酶释放因子MRP在重组沙门菌中的表达

从猪链球菌2型(SS2)四川分离株分离溶菌酶释放因子基因mrp,将其克隆至T载体上,再将asd基因插入到重组质粒的抗生素抗性基因中,电击转入asd缺陷型沙门菌X4072中表达,形成依赖asd基因的质粒-宿主平衡致死系统。经酶切、PCR及蛋白电泳鉴定,证实重组菌株能够稳定表达MRP,从而为SS2的防制提供了可能候选疫苗株。

MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的定位和本质鉴定

目的检测和分析非肌性肌球蛋白重链ⅡA(NMMHC-ⅡA)在MYH9-RD患者中性粒细胞胞浆中的定位及表达,以确定包涵体的构成本质。方法应用间接免疫荧光技术,观察MYH9-RD患者及正常对照者NMMHC-ⅡA在胞浆中的定位和分布情况;应用Western blot技术检测和分析中性粒细胞中NMMHC-ⅡA在患者和正常对照者之间蛋白表达水平的差异。结果免疫荧光技术清楚地显示了患者中性粒细胞胞浆中呈绿色荧光的"梭形"包涵体的形态和轮廓,与瑞特姬姆萨染色显示的包涵体形状、大小基本一致,但更为清晰;而正常对照者除有散点状的荧光斑点外,无包涵体形成;Western blot结果显示患者NMMHC-ⅡA表达量较正常对照者降低。结论 MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的主要成份是NMMHC-ⅡA,NMMHC-ⅡA的显阴性作用导致了包涵体的形成。

适于脑胶质瘤浸润MRI研究的动物模型构建

目的：建立适用于MRI瘤周浸润研究的鼠脑胶质瘤模型。方法：通过立体定向技术，将c6细胞接种至A、B两组大鼠右侧尾状核，对照组在相同部位注射全培养基。A、B两组荷瘤大鼠分别于接种后1～2和3～4周利用3．0T磁共振扫描仪行常规MRI、T1wI增强扫描。病理观察肿瘤级别及肿瘤浸润程度，分析A、B两组肿瘤细胞浸润程度差别。结果：49只存活的细胞接种大鼠，在随后的MRI或病理检查中证实有肿瘤形成，对照组大鼠0=5）未见肿瘤形成。磁共振成像显示B组瘤体较A组体积大，信号欠均匀，增强后呈明显均匀强化或环状强化。A、B组荷瘤大鼠瘤周浸润程度分别平均为（0．083士0．005）和（0．315±0．012），两组结果经两样本，检验显示差别有统计学意义（t=11．8，P〈0．05）。结论：肿瘤细胞接种后3～4周是肿瘤细胞浸润最明显的阶段，可作为MRI脑胶质瘤浸润研究的理想模型。

低强度脉冲场超声促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附

背景:间充质干细胞是目前组织工程和再生医学研究的热点之一,然而如何在体外进行干细胞的有效扩增以满足临床需求仍是研究者们面临的难题。目的:探讨低强度脉冲场超声对人脂肪间充质干细胞增殖和黏附的影响。方法:取第3代人脂肪间充质干细胞,在人脂肪间充质干细胞培养24,48,72 h时以0,10,30,50 mW/cm~2低强度脉冲场超声强度进行第1,2,3次刺激,每次刺激时间为5 min,刺激结束后将细胞置于培养箱继续培养24 h,然后采用CCK-8实验筛选最佳刺激条件。选用30 mW/cm~2强度刺激2次后的细胞为实验组进行后续实验,0 mW/cm~2刺激为对照组。流式细胞仪术检测细胞表面标志物;免疫组化染色观察细胞增殖相关抗原Ki-67和黏着斑激酶FAK的表达;RT-PCR检测细胞增殖通路相关基因Cyclin D1和c-myc的表达;转录组测序检测转录水平基因的变化。结果与结论:①30 mW/cm~2强度连续刺激2次是促进人脂肪间充质干细胞增殖的最佳条件;②与对照组相比,30 mW/cm~2低强度脉冲场超声刺激后细胞表面标志物未改变,增殖相关基因CyclinD1、c-myc和黏着斑激酶FAK表达上调;③转录组测序结果显示有27个基因出现显著性差异,其中15个基因上调,12个基因下调;④结果表明,低强度脉冲场超声通过上调CyclinD1、c-myc基因和FAK的表达,伴随转录组多个基因的调控,在细胞未分化的状态下,促进人脂肪间充质干细胞增殖。

骨髓间充质干细胞治疗小鼠放射性唾液腺损伤的疗效分析

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗放射性唾液腺损伤的效果。方法选取6周龄C57小鼠150只,随机将小鼠分为正常对照组、阴性对照组及实验组,每组50只。阴性对照组和实验组分别注射生理盐水和微小唾液腺细胞小滴,同时阴性对照组和实验组再随机分为5个亚组(A、B、C、D、E亚组),分别给予12 Gy、15 Gy、18 Gy、21 Gy和24 Gy照射剂量。采用HE染色和透射电镜观察颌下腺组织结构,检测颌下腺组织重量以及小鼠唾液流量率和唾液淀粉酶。结果阴性对照组和实验组各亚组颌下腺组织腺泡细胞结构均明显受损,但实验组各亚组损伤情况轻于阴性对照组各亚组;实验组颌下腺重量为(137. 22±20. 15) mg,明显高于阴性对照组(P <0. 05),且实验组各亚组颌下腺重量[A、B、C、D、E亚组:(150. 03±17. 11) mg、(142. 06±15. 43) mg、(132. 03±17. 04) mg、(124. 06±18. 01) mg、(114. 31±19. 06) mg]均明显高于阴性对照组各亚组(P <0. 05);实验组唾液流量率为(71. 16±30. 14)μl/min,明显高于阴性对照组(P <0. 05),而唾液淀粉酶为(751. 07±79. 23)μ/dl,明显低于阴性对照组(P <0. 05);实验组各亚组唾液流量率[A、B、C、D、E亚组:(82. 24±12. 03)μl/min、(73. 55±11. 12)μl/min、(62. 20±10. 43)μl/min、(54. 03±12. 22)μl/min、(43. 31±11. 10)μl/min]均明显高于阴性对照组各亚组(P <0. 05),而唾液淀粉酶[A、B、C、D、E亚组:(651. 44±80. 14)μ/dl、(702. 24±68. 84)μ/dl、(750. 54±72. 03)μ/dl、(803. 15±80. 22)μ/dl、(845. 20±77. 46)μ/dl]明显低于阴性对照组各亚组(P <0. 05)。结论骨髓间充质干细胞对小鼠放射性唾液腺损伤有一定保护作用,可促进唾液腺细胞结构和功能的恢复。

益脾活血方调控B7-H1/PD-1通路对大鼠肝癌切除术后防止复发的机制研究

目的:研究益脾活血方调控细胞程序性死亡-配体1(B7-H1)与细胞程序性死亡受体~1(PD-1)结合通路对大鼠肝癌切除术后防止复发的机制。方法:选用健康SPF级雄性SD大鼠36只,将其随机分为对照组、西药组、中药组,每组12只,三组接种人肝癌细胞,7天后取肝脏已成瘤裸鼠进行肝癌手术切除建立肝癌术后裸鼠模型,分别给予益脾活血方和5-氟尿嘧啶进行干预,连续4周。观察并记录裸鼠一般情况、采用PET/CT影像学检查术后复发情况、苏木精-伊红染色法(HE法)检验术后复发组织病理变化、蛋白质印迹法(WB法)检测B7-H1/PD-1表达量、流式细胞术检测CD4^+、CD8^+T淋巴细胞水平。结果:对照组、西药组、中药组三组均可在裸鼠左中上腹发现高摄取区域,西药组和中药组复发率远远低于对照组(P<0.05),西药组和中药组复发率无显著差异(P>0.05),与对照组相比,西药组和中药组B7-H1相对表达量显著降低(P<0.05),西药组B7-H1相对表达量低于中药组(P<0.05),与对照组相比,中药组和西药组术后复发裸鼠CD4^+、CD4^+/CD8^+在外周血、脾脏中显著上升(P<0.05),CD8^+细胞水平明显降低(P<0.05);西药组在外周血和脾脏中CD4^+水平显著高于中药组(P<0.05),外周血中中药组和西医组CD8^+水平比较无明显差异(P>0.05)。结论:益脾活血方可通过介导B7-H1/PD-1改善T淋巴细胞亚群失衡防止肝癌术后复发。

非肌球蛋白重链9相关疾病大家系患者中性粒细胞包含体特点分析

目的分析一非肌球蛋白重链9相关疾病(MYH9-RD)大家系患者中性粒细胞包涵体的形态和结构特点,阐明MYH9-RD中性粒细胞包涵体形成的特点,以探讨MYH9-RD中性粒细胞包涵体的致病机制。方法应用光学显微镜(瑞姬染色)和电子显微镜观察中性粒细胞包涵体形态和超微结构特点;应用间接免疫荧光复染技术观察MYH9-RD患者与正常对照者之间非肌性肌球蛋白IIA(NMMHC-IIA)在胞浆中的分布情况。结果光学显微镜和电子显微镜下可见中性粒细胞中明显的包涵体,形态多样,大多位于细胞边缘;间接免疫荧光复染技术显示患者和正常人之间NMMHC-IIA在中性粒细胞中的分布有差异,中性粒细胞胞浆中存在明显绿色荧光的包涵体,其形态和轮廓与瑞一姬氏染色显示的包涵体形状、大小基本一致,但更为清晰;正常对照的粒细胞胞浆中未见包涵体。结论光学显微镜和电子显微镜进一步确认了家系患者包涵体的存在。免疫荧光技术显示患者和正常人之间NMMHC-IIA在中性粒细胞中的分布有差异;MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的主要构成成份是NMMHC-IIA;包涵体的形态结构复杂多样可能与本家系临床表型复杂多样有关,该家系对进一步揭示MYH9-RD的致病机制具有重要的意义。

两种月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞生物学特性的比较

背景:干细胞是再生医学研究的热点,影响干细胞生物学特性的因素很多,其中供体年龄是重要的影响因素之一。目的:观察两种月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞生物学特性的变化,筛选最佳种子细胞来源。方法:以4月龄和12月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞为研究对象,分别选取第3代细胞和第10代细胞,观察细胞形态,绘制细胞增殖曲线,检测细胞表面抗原、细胞周期、细胞凋亡情况,然后进行成骨诱导分化茜素红染色和成脂诱导分化油红O染色以及细胞衰老β-半乳糖苷酶染色等。结果与结论:①4月龄和12月龄细胞均呈漩涡状贴壁生长,表面标志物CD29、CD44和CD90表达均为阳性,CD8a、CD45和HLA-DR表达均为阴性;②4月龄和12月龄第3代细胞增殖能力均较强;第10代细胞,与4月龄相比,12月龄G0/G1期百分比增高(P<0.001),早期凋亡增加(P<0.001),而S期和G2/M期百分比显著下降(P<0.001);③4月龄和12月龄第3代细胞的体外诱导分化能力无显著性差异;12月龄第10代细胞的钙化结节率和脂滴率与4月龄相比显著降低(P<0.001);④4月龄和12月龄第3代细胞β-半乳糖苷酶几乎不表达;12月龄第10代细胞β-半乳糖苷酶阳性细胞与4月龄相比显著增加(P<0.001),且细胞形态变得更加扁平和肥大、折光性弱;⑤结果表明,4月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞具有更强的增殖和分化能力,且细胞衰老活性更低,提示4月龄更适合用于自体移植的种子细胞。

双标细胞因子诱导的杀伤性细胞系构建

目的构建表达荧光素酶(Luc)及绿色荧光蛋白(GFP)双标细胞因子诱导的杀伤性(CIK)细胞系。方法体外原代培养C57BL/6小鼠CIK细胞,使用构建好的表达Luc及GFP的慢病毒载体包装重组慢病毒,感染培养第14天的CIK细胞,嘌呤霉素筛选2 w后,采用荧光倒置显微镜观察GFP表达情况,PCR、基因测序及体外活体成像系统对感染后的CIK细胞表达Luc进行验证。结果Luc-GFP-CIK双标细胞系构建成功,能够稳定表达Luc及GFP。荧光倒置显微镜观察显示转染后CIK细胞形态正常且表达GFP;PCR和测序结果显示转染后CIK细胞获得Luc基因;体外活体成像系统检测显示转染后CIK细胞表达Luc。结论初步构建了简便、安全的双标CIK细胞系,该方法便于普及,可为CIK细胞在体内的进一步研究提供前期基础和实验工具。

一MYH9-RD家系患者血小板中NMMHC-ⅡA检测与分析

非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病（non-muscle myosin heavy chain 9 related disease,MYH9-RD）是一类罕见的常染色体显性遗传性血液性疾病,典型病例具有巨大血小板、血小板减少和粒细胞包涵体三大特点及不同的临床表型,是遗传性大血小板症的一个类型。

基于公共数据库分析FABP5在肾透明细胞癌中表达及预后的意义

目的探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)基因在肾透明细胞癌中的表达及预后意义。方法提取Oncomine和GEO数据库中有关FABP5的信息并进行表达情况分析,通过DAVID数据库对差异基因进行功能注释,采用GEPIA进行预后分析。结果 Oncomine数据库中共找到445项FABP5在不同肿瘤类型中的研究数据集,表达差异有统计学意义的结果中表达增高的有32项(肾癌5项),表达降低的有24项(肾癌0项)。肾癌中有4项涉及肾透明细胞癌和正常组织中FABP5的表达研究数据集。综合比较这4项数据集发现,FABP5在肾透明细胞癌中的表达量高于正常组织(P<0.05)。GEO数据库中GSE66271芯片数据分析结果发现差异基因FABP5在肾透明细胞癌中的表达量显著高于正常组织(P<0.01)。DAVID功能分析发现这些差异基因主要集中于影响细胞的转运蛋白活性和蛋白质的消化和吸收代谢功能。使用GEPIA分析来自TCGA数据库和GTEx项目的 516例患者预后发现FABP5高表达的患者总体死亡率较高,低表达FABP5的患者预后较好(P=0.001 1)。结论 FABP5在肾透明细胞癌组织中呈现高表达,并与肾透明细胞癌预后差相关,其有望成为抗肾透明细胞癌药物的重要治疗靶点。