含表皮生长因子受体的外泌体诱导肿瘤特异性调节T细胞

目的探讨树突状细胞(DC)能否捕获含表皮生长因子受体(EGFR)外泌体并转化为成熟DC,诱导生成肿瘤特异性调节T细胞,及后者对肿瘤特异性CD8+T细胞的作用。方法提纯NSCLC肿瘤标本中的外泌体并验证其有EGFR成分,通过外泌体诱导DC转化为免疫耐受型,观察后者诱导生成的调节T细胞对肿瘤特异性CD8+T细胞的影响。结果 NSCLC样本中的EGFR阳性率为80%,而对照肺组织仅为2%。与外泌体共培养7 d后,DC呈现IDO表达高于对照组(80.8%±3.2%vs 65.6%±6.4%,P<0.05)。IDO+DC诱导生成调节T细胞亦明显超过对照组(24.1%±5.2%vs 4.2%±2.3%,P<0.01),进而明显抑制肿瘤特异性CD8+T细胞增殖(5.4%±0.2%vs 86.7%±9.3%,P<0.01)。结论肿瘤细胞的EGFR能够通过外泌体形式排出细胞外,EGFR+外泌体能够诱导免疫耐受IDO+DC产生,进而诱导调节T细胞生成,后者对肿瘤特异性CD8+T细胞有强大抑制作用。

肺癌肺叶袖状切除术的安全性和有效性

目的:评价肺癌肺叶袖状切除术后患者的手术安全性和远期生存状况。方法:回顾分析了1999年10月至2003年12月行肺癌根治术的94名病例,其中肺叶袖状切除术11例(Ⅰ组),全肺切除术17例(Ⅱ组),肺叶切除术66例(Ⅲ组)。通过比较三组术后气管插管时间、ICU停留时间、吻合口并发症率及围手术期死亡率,评价肺叶袖状切除术的手术安全性,比较Ⅰ、组间的生存期和转移复发率探讨其远期有效性。组间率比较用χ2检验或FisherⅡ精确检验,均数比较用t检验,生存分析用K aplan-M eier法,生存曲线比较用Log rank检验。显著性差异标准α=0.05。结果:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的手术死亡率为0,11.8%,3.0%,组间无显著性差异;平均气管插管时间为0.5±2.3天,2.0±7.2天,0.6±4.1天(Ⅰ、ⅢVSⅡ组,P<0.05);吻合口并发症率为3.0%,0,5.8%,组间无显著性差异。Ⅰ组1年、3年生存率为45.5%、32.5%,组为58.8%、Ⅱ45.8%。两组生存率、远期局部复发率和转移率无显著性差异。结论:肺癌肺叶袖状切除术具有和肺叶切除术相近的手术安全性,优于全肺切除术,而其复发转移率、远期疗效与后者相近,是安全有效的手术方式。

大鼠在体心肌缺血再灌注损伤组织间液钙离子动态与胞膜钠钙交换体表达

目的检测大鼠心肌在体缺血再灌注损伤(IR)组织间液钙离子浓度,比较IR前后心肌胞膜钠钙交换体(NCX)mRNA表达水平,探讨其对钙超载的意义。方法 12只SD大鼠随机分为IR组和对照组,以微透析技术连续收集心肌组织间液标本,原子吸收光谱法检测钙离子浓度。IR组通过结扎(20min)后松解(60min)冠状动脉前降支造成心肌缺血再灌注,结束时收取左心室缺血区和右心室心肌行NCX mRNA定量PCR检测,实验前后采血检测血钙和肌钙蛋白T(cTnT)。对照组免除结扎、松解前降支,其余操作与IR组一致。结果 IR组血浆cTnT浓度显著升高[对照组vs IR组,ng/mL:(1.62±0.60)vs.(4.29±2.22),P=0.031]。IR组心肌组织间液钙离子浓度在缺血期无明显变化,再灌注20min显著下降,心肌析出液钙离子浓度与对照组存在显著性差异[对照组vs.IR组,ng/mL:(224±31)vs.(136±39),P=0.002]。血浆Ca2+浓度实验前后无显著差异。心肌细胞膜NCX mRNA表达水平在组间和组内均无显著差异。结论大鼠在体心肌缺血20min再灌注60min,组织间液钙离子浓度在缺血期无明显变化,再灌注期迅速下降,这种变化趋势与胞膜NCX表达无关。

肺癌肺叶袖状切除术的围手术期安全性评估

【目的】评估肺癌肺叶袖状切除术的围手术期安全性。【方法】回顾分析了1994年10月至2003年12月行肺癌根治术的94名病例,其中肺叶切除术66例(Ⅰ组),肺叶袖状切除术11例(Ⅱ组),全肺切除17例(Ⅲ组)。【结果】Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的手术死亡率为3.0％,0,11.8％(P>0.1);中位气管插管时间为0.6(0～5)d,0.5(0～7)d,2.0(0-14)d(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,P<0.05);吻合口并发症率为3.0％,0,5.8％(P>0.1)。【结论】肺叶袖状切除术较标准肺叶切除术并不增加围手术期并发症率和死亡率,对可切除的中央型肺癌较全肺切除术更加安全,但其远期疗效尚需观察。

气道上皮细胞衍生的胰岛素样生长因子触发偏移CD8^+T细胞极化

目的探讨气道上皮细胞衍生的胰岛素样生长因子(IGF1)对CD8+T细胞极化的影响。方法人气道上皮细胞株RPMI2650与鼠过敏原Der p1共培养72 h,用定量PCR及Western免疫印迹检测其IGF1表达情况。将前述上皮细胞、重组IGF1和IGF1抗体分别加入抗体激活的CD8+T细胞中培养,用流式细胞仪检测细胞凋亡。检测Der p1活化的上皮细胞及IGF1对CD8+T细胞p53基因甲基化及表达的影响。结果加入Der p1共同孵育后,RPMI2650细胞IGF1mRNA(23.1%±5.2%vs 5.2%±2.3%,P<0.01)和蛋白表达(33.4±6.4 vs 9.2±4.6,P<0.01)均明显增加。将CD3/CD28抗体激活的CD8+T细胞与Der p1活化的上皮细胞共培养,凋亡细胞增加的趋势被抑制(41.7%±8.2%vs5.2%±1.8%,P<0.01)。直接加入重组IGF1有同样效果,而IGF1抗体能阻断该效应。Der p1活化的上皮细胞能抑制活化CD8+T细胞p53基因mRNA(29.1%±5.9%vs 16.2%±4.3%,P<0.01)和蛋白表达(63.3±8.9 vs 26.9±5.6,P<0.01),加入IGF1抗体后这种作用消失。重组IGF1使CD8+T细胞p53基因甲基化增加。结论 Der p1蛋白能够诱发RPMI2650细胞产生IGF1,后者通过诱导p53基因甲基化抑制CD8+T细胞凋亡。

螺旋CT仿真支气管镜技术在非小细胞肺癌中的应用体会

目的 :评估仿真支气管镜 (VBS)在非小细胞肺癌 (NSCLC)检查中的价值。方法 :回顾收集了 1 2例肺癌病例资料 ,所有病人均接受多图层螺旋CT扫描 ,原始数据传送到AW3 1工作站生成内镜视像。仿真镜像下的大气道结构、左上肺叶能观察到的最远端支气管及所有异常发现均被记录 ,图像质量以优、良、差三等级划分。结果 :VBS逼真地模拟了支气管树内镜视像 ,基本上完全显示三级以内气道 ,而亚段支气管以上显现率和图像质量均明显下降 (P <0 0 5)。 3例术前中心型肺癌肿块均被显现 ,1例支架植入术后气管壁“活瓣样”阻塞未显现。 7例周围型肺癌中有 3例于段支气管查见阻塞 ,其中之一为黏液所致。阶梯状伪影最常见 ,它表现为大气道的环形纹理和小气道的中断、缺损。结论 :VBS综合了二维CT准确和三维模型直观的优点 ,能展示病变气道和邻近纵隔结构的关系、狭窄气道远端情况 ,测量准确客观 ,但仍存在空间分辨率低、无法提供局部细节信息 ,适时性差 ,伪影干扰 ,远端气道显现不良等缺点。VBS应用于NSCLC是安全有效的 ,可作为传统支纤镜和横断面CT的有益补充 。

siRNA沉默KLF4的表达促进食管癌KYSE140细胞的增殖及迁移

目的:探讨体外沉默Kruppel样因子4(Kruppel like factor 4,KLF4)基因的表达对食管癌KYSE140细胞增殖及迁移的影响。方法:Western blotting法检测人食管癌细胞株KYSE140、KYSE150、EC109及EC9706及食管永生化细胞NE3中KLF4蛋白的表达,化学合成2对靶向KLF4的siRNA(KLF4-siRNA1,KLF4-siRNA2),并设对照siRNA(Ctrl-siRNA),分别体外转染至高表达KLF4的食管癌KYSE140细胞中,形成KLF4-siRNA1-KYSE140、KLF4-siRNA2-KYSE140及Ctrl-siRNA-KYSE140细胞,通过MTT实验、Transwell实验分别检测转染后食管癌KYSE140细胞的增殖及迁移。结果:食管癌细胞株KYSE140中KLF4蛋白的表达明显高于KYSE150、EC109及EC9706细胞株[(5.62±0.02)vs(1.71±0.23)、(3.24±0.35)、(3.16±0.41),均P<0.05]。KLF4-siRNA1-KYSE140、KLF4-siRNA2-KYSE140与Ctrl-siRNA-KYSE140细胞相比,KLF4蛋白表达明显降低[(0.49±0.18)、(0.32±0.09)vs(0.98±0.19),均P<0.05],细胞增殖能力明显增高[(1.2±0.8)、(1.4±0.1)vs(0.6±0.1),均P<0.05],迁移细胞数量也明显增加[(780±22)、(475±25)vs(83±17)个,P<0.05]。结论:KLF4在人食管癌细胞的增殖和迁移过程中起着负调控作用。

胸腔镜辅助Heller肌层切开术治疗贲门失弛缓症

目的总结胸腔镜辅助Heller肌层切开术治疗贲门失弛缓症的经验。方法2001￣2003年间5例贲门失弛缓症患者行胸腔镜辅助Heller肌层切开术。其手术要点为纵行切开由贲门上6cm至贲门下1cm胃底、食管肌层,直达黏膜下层,同时确保黏膜完整。结果男3例,女2例,年龄16～65岁,平均(43.7±22.6)岁,病史2～32a。1例为外院手术治疗后复发,其余患者术前未接受治疗。手术2.0～4.5h,平均(2.8±1.4)h。胸腔引流管置管2～7d,胸腔引流110～460mL。住院4～21d。所有患者均未发生食管漏,无手术死亡。随访3个月以上,吞咽困难均缓解良好。结论胸腔镜辅助Heller肌层切开术治疗贲门失弛缓症具有安全、有效、微创的优点。

激活蛋白酶活化受体2抑制肺癌细胞凋亡

目的观察蛋白酶激活受体2(PAR2)活化对肺癌细胞株A549表皮生长因子受体(EGFR)表达及凋亡影响。方法在A549及EGFR基因沉默的A549细胞株培养液中加入类胰蛋白酶,用定量RT-PCR及Western blot法检测EGFR表达,观测细胞凋亡情况及与Bax/Bcl-xL表达水平。结果与类胰蛋白酶共培养48 h后,A549细胞EGFR表达明显增加。凋亡比例明显降低,而且这种降低呈现剂量浓度依赖性。细胞中Bax表达明显减少而Bcl-xL明显增加。EGFR基因沉默后,类胰蛋白酶对A549细胞凋亡的抑制作用被阻断,对Bax/Bcl-xL比率亦无影响。结论类胰蛋白酶能增加肺癌细胞株A549EGFR表达,减少其凋亡,明显减少Bax表达而增加Bcl-xL表达。

非小细胞肺癌孤立性脑转移21例临床分析

目的评估非小细胞肺癌合并孤立性脑转移患者接受外科治疗的有效性。方法回顾分析21例行脑部和胸部病灶联合切除的非小细胞肺癌孤立性脑转移患者临床及随访资料。结果 21例患者进行了孤立性脑转移病灶切除和后续的肺癌根治术1,8例(86%)患者有纵隔淋巴结转移,其中N1淋巴结阳性8例,N2淋巴结阳性10例。中位生存期32个月(95%CI 15～49个月)1,2、和5年生存率分别为70%4、3%和22%。对可能影响预后的指标进行单因素分析,提示淋巴结转移是影响预后的危险因素(P=0.002)。结论在保证病灶完全切除和手术耐受性前提下,对胸部和脑部病灶同时采取积极的外科治疗策略是治疗非小细胞肺癌孤立性脑转移的最佳方案。

针形胸腔镜下不同节段胸交感干切除对足多汗的影响

目的:探讨增加胸5节段交感干切断能否提高胸3-4交感切除术对足多汗的缓解率。方法:回顾分析比较本单位2008年7月至2010年7月间,行针形胸腔镜下胸3-4交感干切除术(T3-4)和胸3-4交感干切除+胸5切断术(T3-4/5)的手足多汗症患者临床及随访资料。结果:共计239例患者符合条件,A组(T3-4)155例,B组(T3-4/5)84例,B组失访2例。全组患者无严重并发症及手术死亡,术后手多汗均得到缓解。137例(57.8%)患者术后足汗消失或得到缓解,其中B组55例(67.1%),A组82例(52.9%),两组间差异有统计学意义(P=0.02)。两组患者术后代偿性多汗发生率分别为40.0%(A组)和36.6%(B组),组间差异无显著性。结论:增加T5切断可以提高(T3-4)交感切除术对足多汗的缓解率而不增加并发症率,(T3-4/5)交感切除术尤其适合手足多汗症患者。

脑转移联合胸部原发病灶切除治疗非小细胞肺癌

目的:评估非小细胞肺癌合并孤立性脑转移患者接受外科治疗的有效性。方法:回顾分析本单位2001年至2011年间行脑部和胸部病灶联合切除的非小细胞肺癌孤立性脑转移患者临床及随访资料。结果:共计21例患者进行了孤立性脑转移病灶切除和后续的肺癌根治术,18例(86%)患者有纵隔淋巴结转移,其中N1淋巴结阳性8例,N2淋巴结阳性10例。中位生存期32个月(95%置信区间15～49个月),1年,2年和5年生存率分别为70%,43%,22%。对可能影响预后的指标进行单因素分析,提示淋巴结转移是影响预后的危险因素(P=0.002)。结论:对于非小细胞肺癌孤立性脑转移的患者,保证病灶完全切除和手术耐受性前提下,对胸部和脑部病灶应同时采取积极的外科治疗策略以获得最佳疗效。

胸3～4与胸3～5交感神经干切除术治疗手足多汗症

目的:比较胸3～4(T3～4)与胸3～5(T3～5)交感神经干切除术治疗手足多汗症的安全性及有效性。方法:239例手足多汗症患者分别行T3～4切除术(A组,155例)与T3～4切除术加T5部分电灼切断(B组,84例),比较两组疗效、并发症及患者满意度。结果:全部患者无严重并发症及手术死亡,术后手多汗均得到缓解,随访期限内无复发。137例(58%)患者术后足汗消失或得到缓解,其中B组55例(67%),A组82例(53%),两组比较差异具统计学意义(P<0.05)。两组患者术后代偿性多汗发生率分别为40%(A组)和36%(B组),组间比较差异无统计学意义。结论:T3～4切除术与T3～4切除术加T5部分电灼切断对手多汗均具理想疗效,后者能提高足多汗缓解率而不增加并发症,适用于合并足多汗患者。

健择+顺铂和泰索帝+铂尔定对高龄晚期非小细胞肺癌病人的毒副反应比较

【目的】了解健择和泰索帝加铂类对其在高龄 (≥ 70岁 )晚期非小细胞肺癌病人中应用的毒副反应。【方法】回顾收集了 35例ⅢB或Ⅳ期NSCLC肺癌病例资料 ,Karnofsky评分≥ 80。所有病人均接受健择 +顺铂 (GP ,n =19)或泰索帝 +铂尔定 (TP ,n =16 )两疗程化疗。化疗期间每 3～ 5d查血常规及生化 ,至末次用药后 2周 ,其他毒副反应以电子表格形式在病程记录中体现。毒性反应按WHO标准作等级评价。【结果】性别组成以男性为主 ( 6 5 7% ) ,病理类型以鳞癌占优势 ( 6 8 6 % ) ,病人基线特征在组间分布均衡。无致命或需要中止治疗的毒副反应发生。两组 3/4度白细胞减少相近 (GPvsTP ,47 4%vs31 3% ,P =0 83) ,GP组 3/4度贫血 (GPvsTP ,31 6 %vs6 3 % ,P =0 0 72 )和血小板减少 (GPvsTP ,2 1 1% vs6 3 % ,P=0 2 2 7)有较高发生倾向。两组 3/4度非血液学毒性发生率相近。【结论】行为状态良好的高龄晚期非小细胞肺癌病人对健择 +顺铂与泰索帝 +铂尔定联合化疗方案均能耐受 ,两者血液学毒性相近 ,主要为中性粒细胞减少 ,但前者较后者更容易发生 3/4度血小板减少和贫血。这一结论尚待前瞻性的临床随机对照研究进一步证实。

Kruppel样因子在人食管癌细胞中的作用研究

目的探讨Kruppel样因子(KLF4)对食管癌细胞生长、侵袭及迁移等生物学行为的影响,揭示其与食管癌发生发展的关系。方法检测人食管癌细胞株KYSE140、KYSE150、EC109及EC9706及食管永生化细胞NE3中KLF4的表达,通过siRNA的方法将KLF4高表达的KYSE140细胞敲降KLF4基因,通过MTT试验、软琼脂集落形成实验、Transwell小室侵袭实验检测该细胞生物学行为的变化。结果与转染control siRNA的细胞相比,转染KLF4-siRNA1、KLF4-siRNA2的KYSE140细胞生长速度上升,细胞穿过Transwell微孔膜的细胞数量增加,并且形成的集落明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 KLF4在人食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移过程中起着负性调节的作用,可能成为早期诊断和判断食管癌预后的分子标志物以及临床治疗的分子靶点。

控氧灌注抑制犬肺局部及全身炎症因子表达

目的:探讨控氧灌注对体外循环犬肺局部及全身炎症反应及肺损伤的影响。方法:14只健康犬随机分为对照(IR)组和控氧灌注(OCR)组,每组7只,开胸建立体外循环,经过60min升主动脉阻断和90min再灌注。OCR组在主动脉开放瞬间FiO2为40%,随后每5min依次上调10%,最后达80%并保持至实验结束,IR组开放后再灌注全程FiO2保持80%不变。在开胸后(T1)、主动脉开放后25min(T2)、90min(T3)分别留取血液标本及肺标本,检测血白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α);肺组织NF-κB蛋白表达、髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量;肺组织干湿重比及光镜下病理变化。结果:在T2和T3时点,OCR组肺组织NF-κB蛋白表达显著低于IR组(T2,0.321±0.116vs.0.547±0.067;T3,0.318±0.071vs.0.525±0.025,P<0.05),MPO及MDA也较低。血IL-6(T2,166.7±28vs.1088.3±300;T3,168.1±24vs.1052.5±315,P<0.05)和TNF-α(T2,74.9±6vs.503.8±144;T3,73.2±6vs.451.2±130,P<0.05)也显著低于IR组。OCR组肺组织干湿重比在T2和T3时点高于IR组,病理改变也较轻。结论:控氧灌注降低犬肺局部及全身炎症因子表达,减轻肺损伤。

控氧灌注对体外循环犬肺损伤的影响及机制探讨

目的探讨控氧灌注(OCR)对体外循环犬肺缺血再灌注损伤的影响及机制。方法将14只健康犬随机分为OCR及IR组各7只。两组均开胸建立体外循环,经过60 min升主动脉阻断和90 min再灌注。OCR组主动脉开放瞬间FiO2为40%,随后每5 min依次上调10%,最后达80%并保持至实验结束;IR组主动脉开放后再灌注全程FiO2保持80%不变。开胸后(T1)、主动脉开放后25 min(T2)、90 min(T3)分别留取血液标本及肺标本,检测血清IL-6和TNF-α含量,肺组织核转录因子κB(NF-κB)蛋白表达、髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量、肺组织干湿重;光镜下观察肺组织病理变化。结果 OCR组动脉血氧分压于主动脉开放后各时点均低于IR组(P<0.05);T2和T3时OCR组肺组织NF-κB蛋白表达显著低于IR组(P均<0.05),肺组织MPO活性、MDA,血IL-6和TNF-α水平明显低于IR组。OCR组肺组织干湿重比在T2和T3时点明显高于IR组,病理改变较轻。结论控氧灌注可减轻体外循环肺损伤;其机制可能为降低肺组织NF-κB蛋白表达及减轻局部炎症反应。

肺癌根治术对单发脑转移的治疗价值

目的:评估非小细胞肺癌合并单发脑转移患者接受外科治疗的有效性。方法:分析行脑部和胸部病灶联合切除的非小细胞肺癌单发脑转移患者的临床及随访资料。结果:21例患者进行了单发脑转移病灶切除和后续的肺癌根治术,18例(86%)患者有纵隔淋巴结转移,其中N1淋巴结阳性8例,N2淋巴结阳性10例。中位生存期32个月(95%置信区间15～49个月),1、2和5年生存率分别为70%、43%、22%。对可能影响预后的指标进行单因素分析,提示淋巴结转移是影响预后的危险因素(P=0.002)。结论:对于非小细胞肺癌单发脑转移的患者,在保证病灶完全切除和手术耐受性的前提下,宜对胸部和脑部病灶同时采取积极的外科治疗策略,以获得最佳疗效。

控氧灌注对体外循环犬肺缺血-再灌注损伤的保护作用

目的:探讨控氧灌注对体外循环犬肺损伤的保护作用。方法:14只健康犬随机分为实验组和对照组,每组7只,开胸建立体外循环,经过60 min升主动脉阻断和90 min再灌注。实验组在主动脉开放瞬间调整FiO2至0.40,随后每5 min依次上调0.10,最后达0.80并保持至实验结束,对照组开放后再灌注全程FiO2维持0.80。分别留取开胸后、主动脉开放后25、90min的血液标本及肺标本,检测血清IL-6和TNF-α含量,肺组织NF-κB蛋白水平、髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛含量,肺组织干/湿重比及光镜下病理变化。结果:再灌注后5、10、15、20 min实验组的PaO2均低于对照组(P均<0.05)。再灌注后25、90 min实验组肺组织NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05),其肺组织MPO活性、丙二醛,血IL-6和TNF-α水平也低于对照组(P<0.05或0.01)。再灌注后25、90 min实验组肺组织干/湿重比值高于对照组,肺损伤评分也较低(P<0.05)。结论:控氧灌注可有效降低体外循环犬肺NF-κB等炎症因子表达,减轻肺损伤程度。

PLCE1调控p53诱导食管癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨磷脂酶Cε1(PLCE1)基因抑制食管癌细胞凋亡的作用机制。方法选用人食管癌细胞株OE33和CPC作为研究对象。采用qRT-PCR、Western blot法分别检测转染PLCE1 siRNA前、后食管癌细胞OE33和CP-C中PLCE1、p53 mRNA和蛋白水平的表达;甲基化特异性PCR重亚硫酸盐法检测p53启动子区甲基化状态;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果食管癌细胞株OE33和CP-C均高表达PLCE1,抑制PLCE1表达后食管癌细胞CP-C中p53表达上调并促进p53去甲基化,细胞凋亡明显增加。结论 PLCE1通过促进p53启动子区甲基化抑制p53的表达,从而抑制食管癌细胞凋亡。