结核病实验室诊断技术研究进展

结核病(tuberculosis,TB)是机体感染结核分枝杆菌引发的疾病。尽管有疫苗接种及药物治疗,但由于糖尿病和AIDS等免疫缺陷性疾病合并结核感染,大量潜伏性结核感染和耐多药结核、广泛耐药结核的存在,以及近几年新冠肺炎的流行,使得TB的防治依然面临困境。在TB防治工作中,对TB及时准确的诊断至关重要。现从TB的细菌学检测、分子生物学检测、生化检测、免疫学检测、多组学筛选生物标识物及其他技术对TB的诊断进展进行综述。

α-Synuclein与14-3-3蛋白在体外分子间相互作用的鉴定

帕金森病(Parkinson's disease,PD)涉及两种蛋白——α-synuclein蛋白(SNCP)与14-3-3蛋白.通过重组,将这两种蛋白在大肠杆菌DH5α中表达,通过谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析将其纯化,得到GST-14-3-3蛋白;利用凝血酶对纯化的融合蛋白GST-SNCP切割,再经谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析获得SNCP.通过免疫共沉淀、GSTpull down和ELISA等技术,证明SNCP能够与14-3-3蛋白结合;为了进一步证明SNCP也与在脑组织中的天然14-3-3蛋白发生作用,利用His pull down方法进行实验.结果证明,SNCP能够和脑组织中的14-3-3蛋白发生相互作用.这些结果从分子水平提供了SNCP与14-3-3蛋白相互作用的实验证据,为进一步了解SNCP的结构和功能,及其在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础.

帕金森病相关蛋白α-共核蛋白的可溶性表达、纯化及抗体制备

目的利用分子克隆技术在原核细胞中表达α-共核蛋白(SNCP),并制备兔多克隆抗体。方法从人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA。利用PCR技术扩增获得SNCP的cDNA序列,测序正确后克隆至pQE-30-GST表达载体上,在大肠埃希菌中表达GST-SNCP融合蛋白。融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,制备特异性抗血清,并对该抗体进行检测。结果琼脂糖凝胶电泳显示获得的SNCP cD-NA序列为420 bp。SDS-PAGE和W estern b lot分析,表达的融合蛋白呈可溶性,相对分子质量约为45 000。以其为抗原制备的SNCP抗血清的ELISA效价达到1:32000,并且该抗体可与BALB/c小鼠脑组织中内源性SNCP发生特异性反应。结论人SNCP可在原核细胞中可溶性表达。用表达的蛋白制备获得特异性较好的SNCP抗血清,为进一步了解SCNP的结构和功能以及在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础。

信号系统评估体系构架

本文对欧洲铁路信号系统安全保障相关的技术法规、工作流程、相关责任及安全审批等基本要素进行分析研究,针对我国铁路客运专线和既有线信号发展现状,提出了信号系统安全认证体系构架的建议。

关于美国铁路的技术法规和标准

根据1966年交通运输法案(49U.S.C103第3(E)(1)条),美国成立了联邦铁路管理署(FRA),其最主要职责是保证铁路安全条例颁布实施,负责铁路系统的安全监管。美国铁路技术法规由FRA负责组织相关协会制定草案、递交法规提案,经国会讨论通过后,以“联邦法Title49交通运输”颁布施行,涉及轨道铺设、旅客服务、货车安全、信号安全及检查维护的规定。美国铁路的技术标准均由相应的协会和技术机构制定发布实施,最著名的是北美铁道协会(AAR)发布的技术标准,保障各公司的机车车辆及其部件的互换性、兼容性,协调各成员之间安全与运输方面的问题。按照AAR标准规定,美国铁路运行的机车车辆及其部件必须经过认证,确保制造材料、产品和服务的安全性、可互换性和经济性。

《铁路技术管理规程》修改前期研究

通过研究国外高速铁路技术和有关管理规范、调查现行《铁路技术管理规程》在实施中存在的问题,收集近3年铁道部颁发的技术规程、规范、文件、规定等方式,进行专题分析,提出修改原则、涉及速度划分、限界、新技术装备等主要修改内容和需进一步专项研究问题的建议,为修改第九版《技规》、适应铁路跨越式发展需要提供技术支持,更好地指导运输生产。

信号系统安全审核与评估人员需求分析

通过对国外安全审核与评估人员要求,以及国内相关政策的分析和研究,提出我国铁路信号系统安全审核与评估人员的需求分析。

铁路专用产品强制性认证研究

分析、对比我国强制性产品认证和铁路专用产品认证制度,提出铁路专用产品强制性认证的确定原则。针对铁路各专业典型性产品进行风险分析,研究实施强制性认证的可行性,得到继续推行自愿性铁路产品认证采信制度的结论。

PrP^C转化成PrP^(Sc)的影响因素研究进展

朊病毒蛋白有两种形式,即PrPC和PrPSc。PrPC是正常的细胞蛋白;而PrPSc是PrPC的异构体,具有致病性。大量的证据表明朊病毒是由PrPC错误折叠从而转变成PrPSc的,朊病毒病的发生与发展与PrPC转变成PrPSc密切相关,朊病毒病属于蛋白质构象病。本文将着重叙述PrPC转化成PrPSc的各种影响因素。

国内外铁路技术管理规章对比分析

为加强铁路技术管理、保障运输安全,世界各国均不同程度地建立自己的铁路技术管理法规体系,充分体现各国铁路运输业特有的技术差异和不同的管理方式。在介绍欧盟、德国、法国、英国、日本、俄罗斯、美国和我国铁路技术管理规章的制定机构、分类构成、主要内容等基础上,研究分析国外与我国铁路技术管理规章的差异。借鉴国外经验,对我国铁路改革、政企分开后行政职能的履行提出框架建议。

规范市场准入 提高产品质量 确保铁路运输安全

阐述我国铁路各种市场准入制度的执行现状,特别是《铁路运输安全保护条例》实施后铁路市场准入的6项条件,即型号合格证、生产许可证、维修合格证、型号认可证、企业认定、信息系统认定、产品认证。为确保铁路运输安全,铁路工业产品实行铁路工业产品监督抽查和铁路机车车辆产品驻厂验收的监督机制。分析铁路产品市场准入制度实施中存在的问题,并提出完善铁路技术法规,理顺不同层次的市场准入,引入安全保障系统评估和加强专业化生产的建议。

基于计算机控制技术的铁路信号系统产品认证方案与评价方法研究

针对基于计算机控制技术的铁路信号系统的网络化、系统性、高安全性特征,分析其对产品认证评价的影响。参考国外铁路信号系统产品的认证评价方法,提出我国铁路信号系统产品认证方案和评价方法,包括安全完整性的评估、安全证据的复核、申证产品的文件审查、标准符合性检查及获证后的变更等,为编制切实可行的认证实施规则提供基础。

应用反向遗传学技术在哺乳动物细胞中产生甲型流感病毒

在国内首次应用反向遗传学技术将多个质粒共转染哺乳动物细胞 ,得到了具有活性的甲型流感病毒。采用自行构建的含有 polⅠ和polⅡ启动子和终止子序列的pIVV2质粒 ,将A/PR/8/34(H1N1)流感病毒基因组全部 8个RNA节段的cDNA分别克隆到该质粒的两个启动子之间 ,得到了 8个可在真核细胞中复制和表达的质粒。将这 8个质粒共转染 2 93T细胞 ,培养 4 8h后吸取上清液 ,转接入MDCK细胞中 ,再经过 72h培养 ,发现在MDCK细胞中有明显的流感样细胞病变产生 ,测上清病毒血凝滴度为 1:10。将MDCK细胞冻融液继续接种鸡胚和MDCK细胞 ,培养后将鸡胚尿囊液和MDCK细胞冻融上清液进行血凝和血凝抑制实验 ,证明所得病毒为A/PR/8/34(H1N1)。

技术标准体系与市场准入基础知识(1)

本讲座分三部分刊出,第一讲主要介绍技术标准体系和国际标准;国外先进标准及其体系、中国标准体系及管理模式。第二讲主要介绍市场准入和市场准入概述;国外市场准入制度;我国市场准入制度。第三讲主要介绍及评论我国铁路标准体系;市场准入;与世界铁路先进水平的差距。

技术标准体系与市场准入基础知识(2)

本讲座分3部分刊出。第二讲介绍市场准入基本概念,技术性贸易壁垒协议(WTO/TBT协议)中的主要概念;欧盟市场准入概况,北美市场准入概况,韩国市场准入概况,欧美铁路市场准入概况;中国市场准入制度。

技术标准体系与市场准入基础知识(3)

本讲座分3部分刊出。第三部分介绍我国铁路标准体系概况,我国铁道行业标准体系及其管理体制;我国铁路市场准入概述、种类,技术机构对铁路产品市场准入制度的支撑,铁路市场准入后的监督;我国铁路标准体系和市场准入与世界铁路先进水平的差距。

MMP-7、MMP-10和TIMP-4在心力衰竭心室重构中的表达

目的:应用细胞因子抗体芯片技术筛选与心力衰竭心室重构关系密切的基质蛋白酶。方法:从本院的心脏病组织库中挑选6例病理诊断明确和各方面资料比较齐全的致心律失常性右室心肌病引起心力衰竭的心脏病标本(来源于心脏移植的受体),与年龄、性别和种族等因素相匹配的正常对照心脏组织(来源于心脏移植的供体)进行细胞因子抗体芯片分析,筛选在致心律失常性右室心肌病引起的心力衰竭中差异表达的基质蛋白酶,并应用酶联免疫分析和免疫组织化学的方法加以验证。结果:在所筛选的17种基质金属蛋白酶中,只有MMP-7和MMP-10在致心律失常性右室心肌病引起心力衰竭中高表达,而在4种基质金属蛋白酶内源性组织抑制剂中,只有TIMP-4低表达。经酶联免疫分析和免疫组织化学的方法证实,不仅在致心律失常性右室心肌病引起心力衰竭的心肌,在缺血性心肌病和扩张性心肌病引起的心力衰竭心肌中也发现MMP-7和MMP-10的高表达及TIMP-4的低表达。结论:心肌组织中MMP-7和MMP-10的高表达及TIMP-4的低表达在不同心肌病引起的心力衰竭心室重构分子机制中可能发挥重要的作用。

基于通信的列车运行控制系统安全通信协议的性能分析

安全通信协议是保证基于通信的列车运行控制系统中通信安全的主要因素,其性能分析具有重要意义。针对基于通信的列车运行控制系统安全通信协议,选择分层赋时有色Petri网(CPN)对其进行研究,建立状态转换模型与包含数据延时和信道故障的模型,通过改变数据延时的概率和信道无故障的概率,对安全通信协议的稳定性和失效率进行仿真,仿真结果对安全通信协议的设计有一定的参考意义,用概率论与数理统计知识对仿真结果进行分析,分析结果体现数据延时和信道故障是如何影响安全通信协议的性能的。分析结果表明基于通信的列车运行控制系统安全通信协议是合理的。

碳化锆碱熔制备氧氯化锆的研究

以碳化锆为原料,采用碱熔-水洗-酸浸-结晶工艺制备氧氯化锆,制得的氧氯化锆产品中ZrO2含量达到36.20%。考察了氢氧化钠与碳化锆物料比、碱熔温度、碱熔时间和碳化锆粒度对碱熔过程中锆转化率的影响,以及水与碱熔料比、水洗温度和水洗时间对水洗过程中除硅率的影响。用X射线衍射分析研究了碳化锆在煅烧碱熔过程中的物相变化。结果表明,碱熔过程中碳化锆转化为偏锆酸钠,碱熔的最佳工艺条件为:氢氧化钠与碳化锆的质量比为1.5,煅烧温度800℃,煅烧时间60 min,矿样粒度120目。在该工艺条件下碱熔,锆的转化率可达到99%以上。

致心律失常型右室心肌病引起的心力衰竭分子标志物的筛选

筛选致心律失常型右室心肌病引起心力衰竭的分子标志物。方法:从本院的心脏病组织库中挑选5例病理诊断明确和各方面资料比较齐全的致心律失常型右室心肌病引起心力衰竭的心脏病标本(来源于心脏移植的受体),与年龄、性别和种族等因素相匹配的正常对照心脏组织(来源于心脏移植的供体)进行全基因组表达芯片的比较研究。应用晶芯人类全基因组寡核苷酸微阵列基因表达谱芯片(含有人类基因35000个),筛选致心律失常型右室心肌病引起的心力衰竭基因表达谱的改变。应用real-timeRT-PCR验证致心律失常型右室心肌病引起的心力衰竭基因表达改变的真实性和准确性。结果:应用基因表达芯片研究方法共筛选出78个差异表达基因,其中有35个基因在致心律失常型右室心肌病引起的心力衰竭中表达升高,而另有43个基因表达降低。其中变化较多的基因属于与代谢相关的基因。对其中36个差异表达基因应用real-timeRT-PCR的方法进行了验证,差异表达基因的准确性在75%,并首次报告了心钠素在致心律失常型右室心肌病引起的心力衰竭中表达明显升高。结论:在世界上首次应用基因表达芯片的方法,观察了致心律失常型右室心肌病引起的心力衰竭基因表达谱的改变,为致心律失常型右室心肌病引起的心力衰竭分子机制的阐明和寻找疾病特异的分子标志物,以用于鉴别诊断、判断病情和预后及指导个性化治疗奠定了基础。