土鳖虫活性组分F2-2体内抗凝药效实验

目的:以PT、APTT、TT、FIB、血小板聚集率及纤溶图参数为指标,评价土鳖虫抗凝组分F2-2的体内抗凝药效。方法:大鼠皮下注射肾上腺素5天造成急性血瘀症模型后,对模型大鼠灌胃给药土鳖虫抗凝组分F2-2,9天后对各指标进行测定。结果:与模型组相比,灌胃给药后的大鼠PT/APTT均延长、FIB含量降低、血小板聚集率与血液最大凝固程度下降,TT则无差异。结论:土鳖虫抗凝组分F2-2有良好的体内抗凝药效,其作用机制尚有待进一步研究。

仿生酶解法提取土鳖虫的工艺研究

目的:研究土鳖虫仿生酶解的工艺条件。方法:在胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解温度已固定的基础上,以PT/APTT为指标,筛选酶底比和酶解时间主要工艺参数;并以血小板聚集率、血凝-纤溶动态图为指标,对酶解法提取土鳖虫的工艺合理性进行考察。结果:土鳖虫酶解条件为:37℃人工胃液温浴30min,再加入2.0%(酶底比)胃蛋白酶酶解3h,残渣转入45℃人工肠液,加入4%(酶底比)胰蛋白酶酶解2h。结论:该工艺条件简单、稳定。

土鳖虫多肽F2-2的体外药效研究

目的:通过体外试验,考察土鳖虫多肽F2-2的抗凝、抗血小板聚集与舒张血管药效。方法:以凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原含量(FIB)、血小板聚集率、纤溶图参数与离体血管环张力等为指标,评价多肽F2-2是否具有活血化瘀的作用。结果:土鳖虫多肽F2-2具有延长家兔血浆APTT/PT/TT、降低FIB、降低血小板聚集率、延长凝血启动时间并降低最大凝固程度以及增加大鼠离体血管环张力的作用。结论:体外实验表明,多肽F2-2是中药土鳖虫的活性组分,有继续研究的价值。

基于改善微循环药效的天麻素与葛根素配伍合理性研究

目的:研究天麻素与葛根素配伍后在抗凝血及抗血小板聚集方面的作用,探讨其配伍应用的合理性。方法:以体内外活化部分凝血活酶时间(APTT)和二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集率为指标,分别评价药物及其配伍后的抗凝血和抗血小板聚集作用。结果:天麻素和葛根素在一定剂量范围内均具有抗凝血、抗血小板聚集作用,且二药作用强于单一用药。结论:一定剂量天麻素和葛根素配伍后,其抗凝血及抗血小板聚集作用均有所增加。

蝉蜕不同提取工艺抗凝与纤溶活性比较研究

目的:比较蝉蜕不同提取工艺抗凝与纤溶活性。方法:以凝血酶原时间试验(PT)、活化部分凝血活酶时间试验(APTT)、血小板聚集率和血凝-纤溶动态图为指标,比较蝉蜕仿生胃/胰酶解物、水提物、醇提物、水提醇沉物的抗凝与纤溶活性差异,综合评价各提取物抗凝纤溶活性。结果:蝉蜕各提取物均不能延长家兔PT值,而仿生胃/胰酶解物和水提醇沉(渣)对于APTT、血小板聚集率、血凝-纤溶表现出抗凝纤溶作用。结论:蝉蜕仿生胃/胰酶解物和水提醇沉(渣)具有一定抗凝纤溶活性,具有后续研究价值。

善陈时事 同声相应──从文天祥《集杜诗》看杜诗对后世的影响

杜甫，是我国历史上的伟大爱国诗人，千百年来被人们称之为“诗史”、“诗圣”、“情圣”。这是由于杜甫长期苦难生活的深刻体验，使得他能对广大人民饥溺同怀、休戚相关，他的诗篇都是有感而发，那伤时忧国的涕泪，集中表现在他的诗作之中。关心时政，关心民瘼，正是杜诗...

中药通过调控肝脏巨噬细胞防治非酒精性脂肪性肝病的研究进展

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除酒精和其他明确损肝因素所致的肝细胞内脂质过度沉积为主要特征的临床病理综合征。NAFLD发病机制复杂,当肝脏受到损伤时,肝细胞内的脂质大量沉积,刺激肝细胞发生氧化应激、内质网应激和代谢失调等反应,免疫细胞进一步过度分泌炎性细胞因子释放入血引起全身炎症,因此在NAFLD的进程中,炎症反应扮演了重要的角色。巨噬细胞是肝脏内含量最丰富的免疫细胞,在肝脏炎症损伤中发挥重要的作用。肝脏巨噬细胞包括肝脏固有和单核细胞来源的巨噬细胞,其活化和极化过程参与NAFLD不同发展阶段。中药复方及其活性成分已被证实可调控巨噬细胞参与NAFLD病变中的炎症、损伤和恢复过程。根据现有的研究报道,本文以阐述巨噬细胞的来源、活化、极化及其与NAFLD的关系为切入点,系统综述中医药通过调控巨噬细胞活化、募集和极化,从而防治NAFLD的药效机制,以期为从中药中发现通过调控巨噬细胞防治NAFLD的创新性药物提供新的研究思路。

丹参水提物对野百合碱诱导大鼠肝窦阻塞综合征的抑制作用

目的 探讨丹参水提物对肝窦阻塞综合征(hepatic sinusoidal obstruction syndrome,HSOS)的作用及机制。方法 以野百合碱诱导大鼠HSOS,给予丹参水提物后,通过血清生化指标检测、肝脏病理切片观察以及肝组织基质金属蛋白酶9(metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达测定,评价丹参水提物对HSOS的抑制作用。通过TCMSP、HERB与GeneCards等数据库交联分析,获取丹参水提物抑制HSOS的关键靶点,并应用STRING与DAVID等数据库富集信号通路;进一步采用qRT-PCR与Western blotting对数据库结果予以验证。结果 与模型组比较,丹参水提物可显著抑制野百合碱诱导的大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)活力(P<0.05、0.01),降低肝脏MMP-9蛋白表达(P<0.05),并改善肝窦充血、中央静脉内皮脱落、Ⅲ区肝细胞坏死等病变。网络药理学分析筛选得到核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β以及一氧化氮合酶2(nitricoxide synthase 2,NOS2)等关键基因,京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析结果表明,以上靶基因主要富集于活性氧(reactive oxygen species,ROS)、TNF和NF-κB等信号通路。丹参水提物可降低野百合碱诱导的丙二醛(malondialdehyde,MDA)和ROS含量(P<0.05、0.01),减少F4/80、Ly6G阳性细胞浸润数目(P<0.05、0.01),诱导Nrf2核转位(P<0.01),促进谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位(catalytic subunit of glutamate-cysteine ligase,GCLC)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰亚基(glutamate-cysteine ligase modifier subunit,GCLM)、HO-1及醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)等基因的表达(P<0.05、0.01、0.001),升高GCLC、GCLM、HO-1蛋白表达水平(P<0.05、0.001);并抑制NF-κB核转位(P<0.001),降低TNF、IL-1β、IL-6、NOS2、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因表达(P<0.05、0.001),升高TNF-α、IL-1β、磷酸化NF-κB抑制蛋白(phosphorylated inhibitor of NF-κB,p-IκB)蛋白表达水平(P<0.05、0.001)。结论 丹参水提物可通过激活Nrf2抗氧化信号通路,抑制NF-κB炎性信号通路,而抑制野百合碱诱导的HSOS。

甘草次酸-丹参酮ⅡA复方脂质体包封率测定方法研究

目的建立甘草次酸-丹参酮ⅡA复方脂质体(GT-Lip)包封率的测定方法。方法分别采用葡聚糖凝胶过滤法、低速离心法分离脂质体和游离药物。以HPLC法为分析手段,比较该2种方法包封率的测定结果。结果葡聚糖凝胶G-50(M)对脂质体有一定吸附,不适合GT-Lip包封率的测定;低速离心法能使GT-Lip脂质体与游离药物有效分离,经HPLC法测定,丹参酮ⅡA(TSN)与甘草次酸(GA)平均包封率分别达到(81.50±0.76)%和(98.63±0.90)%。结论 HPLC法与低速离心法相结合可快速、有效用于甘草次酸-丹参酮ⅡA复方脂质体的包封率测定。

天麻素与葛根素配伍对DPPH自由基清除作用及溶解度的影响

目的:研究天麻素与葛根素配伍后在二苯代苦味肼基自由基(DPPH自由基)清除率、溶解度方面的相互影响,探讨其配伍应用的合理性。方法:采用紫外分光光度法测定体外DPPH自由基清除率及平衡溶解度。结果:天麻素浓度为200g/L时,未显示DPPH自由基清除能力,而葛根素5g/L时显示了一定的作用,其IC50为17.56g/L;天麻素在水中溶解度为303.81g/L,葛根素为1.62g/L,天麻素150g/L时使葛根素的溶解度增加了4.1倍。结论:天麻素与葛根素配伍后,可增加葛根素溶解度,但在一定浓度范围内对其自由基清除作用无显著性影响。

连翘酯苷A抑制四氯化碳诱导小鼠肝纤维化及其机制的研究

该研究旨在探讨连翘酯苷A(forsythiaside A, FTA)改善四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)诱导小鼠肝纤维化的药效及其机制。通过血清谷丙/谷草转氨酶(alanine/aspartate aminotransferase, ALT/AST)活力检测,肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline, HYP)含量测定和Ⅰ型胶原α1 (collagenⅠalpha 1, Col1a1)、Ⅲ型胶原α1 (collagenⅢalpha 1, Col3a1)基因表达的检测,并进行肝组织苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、马松三色(Masson′s trichrome, Masson)染色和天狼星红(Sirius red)染色评价FTA对CCl4诱导小鼠肝纤维化的改善作用;采用qPCR检测肝组织和肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)中α-平滑肌肌动蛋白(actin alpha 2/α-smooth muscle actin, Acta2/α-SMA)、转化生长因子β(transforming growth factor β, Tgfβ)等基因的表达,并采用Western blot检测肝组织和HSC中α-SMA蛋白的表达,评价FTA对HSC活化的抑制作用;采用Western blot检测肝组织血管富集部位中α-SMA、波形蛋白(vimentin, Vim)、血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin, Ve-cadherin)与血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1, PECAM-1/CD31)蛋白的表达,评价FTA对血管内皮-间充质转化(endothelial-mesenchymal transition, EMT)的逆转作用。结果显示,与模型组相比,FTA能明显地降低CCl4造成的肝细胞坏死、肝脏中的炎性细胞浸润和胶原沉积,表明FTA具有改善肝纤维化的药效。FTA可以降低肝脏组织中Acta2、Tgfβ、Col1a1、Col3a1基因的表达,减少HSC中升高的α-SMA蛋白表达;FTA还可以逆转肝组织血管富集部位中升高的Vim、α-SMA和降低的Ve-cadherin、CD31蛋白表达。上述结果表明,FTA可能通过抑制HSC活化和逆转EMT发挥抗肝纤维化的药效。

氧化苦参碱协同增加环磷酰胺诱导小鼠肝毒性的研究

环磷酰胺(cyclophosphamide,CPA)是治疗多种肿瘤的一线化疗药,但过量应用可引起肝损伤。本文旨在探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)与CPA的联合给药是否会加剧其肝毒性,并初步阐明其机制。小鼠单独给药OMT(100 mg·kg^-1)不同时间后,检测肝组织Cyp2b10 mRNA和CYP2B10蛋白表达。小鼠灌胃(intragastric adminis‐tration,ig)给药不同剂量OMT,同时隔天腹腔注射(intraperitoneal injection,ip)给予CPA(200 mg·kg^-1),10天后,检测血清谷丙/谷草转氨酶(alanine/aspartate aminotransferase,ALT/AST)活力,记录小鼠死亡率,检测肝组织Cyp2b10mRNA水平,并分析ALT/AST活力、死亡率和Cyp2b10 mRNA水平间的相关性。本文中动物福利和实验过程均遵循上海中医药大学实验动物伦理委员会的规定。结果发现,OMT单独给药可以显著提高小鼠肝组织中Cyp2b10mRNA和CYP2B10蛋白表达(P<0.05),并增强其酶活性(P<0.05)。OMT与CPA联合给药后,可明显提高CPA引起的小鼠死亡率(33.3%→58.3%);血清生化指标分析以及肝组织Cyp2b10 mRNA水平分析结果显示,OMT可进一步提高CPA诱导的小鼠血清ALT和AST活力以及肝组织Cyp2b10 mRNA水平(P<0.05)。血清ALT/AST活力与小鼠死亡率和肝组织Cyp2b10 mRNA水平之间均有良好的相关性。以上结果说明,OMT可以通过诱导小鼠肝组织Cyp2b10 mRNA表达,提升CYP2B10酶活性,促进CPA在肝脏代谢,从而加剧其诱导的肝毒性。

金银花-连翘提取物组合对CCl4诱导小鼠肝纤维化的改善作用研究

目的:探讨金银花-连翘提取物组合对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化的改善作用。方法:分别制备金银花和连翘提取物,混合后制得组合物(药材配比1∶2)。取雄性C57小鼠随机分为对照组、CCl4组、组合低剂量(0.5 g/kg)+CCl4组、组合高剂量(1.0 g/kg)+CCl4组、组合高剂量(1.0 g/kg)组,每组5只。除对照组和组合高剂量组外,其他各组小鼠腹腔注射CCl4诱导肝纤维化,每周2次,共4周。同时,各组灌胃给予相应剂量的组合物,连续4周。末次给药后,取血,收集肝脏组织。试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以及肝脏羟脯氨酸(Hyp)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)含量。HE染色观察肝组织形态学变化,天狼猩红染色和Masson染色观察肝脏胶原沉积。PCR检测肝组织胶原1a1(Col1a1)、胶原3a1(Col3a1)、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子β(TGF-β)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达,Western blot检测肝组织α-SMA蛋白表达。结果:(1)与CCl4组相比,组合高剂量+CCl4组血清ALT、AST水平显著降低(P<0.01),肝组织炎症反应和肝细胞坏死程度明显减轻。(2)与CCl4组相比,组合高剂量+CCl4组肝脏Hyp和ColⅣ含量显著降低(P<0.05,P<0.01),组合低剂量+CCl4组ColⅣ含量亦显著降低(P<0.05),且两组肝组织胶原沉积程度明显减轻。(3)不同剂量的金银花-连翘组合物干预后,可明显下调模型小鼠肝脏Col1a1、Col3a1、FN和TGF-β的mRNA表达(P<0.05,P<0.01),α-SMA的mRNA和蛋白表达亦明显降低(P<0.05,P<0.01)。(4)金银花-连翘组合物对正常小鼠肝组织形态及以上指标无明显影响。结论:金银花-连翘提取物组合可能通过抑制肝星状细胞活化,减少胶原沉积,从而改善肝纤维化。