对黏虫具有杀虫活性的Bt蛋白筛选及分析

为筛选对黏虫[Mythimna separata(Walker)]具有毒杀作用的苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白,本研究提取Cry1类、Cry2类、Cry9类及Vip3A类等11种蛋白,通过人工饲料喂毒方法对黏虫进行生物活性测定。结果表明,Cry1Ac、Cry1Ab、Cry2Ab、Cry1Be及Cry1Bb蛋白对黏虫具有杀虫活性,其致死中浓度依次为5.09、17.71、26.75、27.42及43.93μg/g;Cry9Aa、Cry9Eb、Cry9Ee蛋白对黏虫生长具有抑制作用,其浓度为10μg/g时的体重抑制率分别为78.4%、79.0%、86.9%,浓度为100μg/g时的体重抑制率分别为92.8%、95.7%、96.7%;Cry1Ba、Cry1Ca和Vip3Aa蛋白对黏虫无显著活性。本研究为黏虫的生物防治奠定了基础,并为抗虫转基因作物的研究提供优良的候选基因。

中国福建南平地区地中海贫血基因突变类型研究

目的:了解福建省南平地区地中海贫血基因突变类型及频率,为本地区预防和控制中型和重型地中海贫血患儿的出生提供依据,减少出生缺陷。方法:采用跨越断裂点PCR(gap-PCR)技术结合反向点杂交法(RDB)进行α和β地中海贫血基因分型检测,对基因分型检测阴性者应用Gap-PCR法进行3种罕见缺失型地中海贫血检测,对检测阴性者采用Sanger测序法进行罕见α地中海贫血突变和β地中海贫血突变检测。结果:1120例标本参加地中海贫血基因分型检测,检出547例地中海贫血基因,检出率为48.8%(547/1120)。340例标本确诊为α地中海贫血,检出率为30.6%,其中--^SEA/αα^256例、-α^3.7/αα^44例、-α^4.2/αα^12例、αα^QS/αα^8例、Hb H病3例(--^SEA/-α^3.72例,--^SEA/-α^4.21例)、αα^CS/αα^2例、αα^^WS/αα^2例、-α^3.7/-α^3.71例、-α^3.7/αα^QS1例。1120例中含有11例罕见型α地中海贫血,8种罕见α地中海贫血突变组合类型,分别是αα^IVS-Ⅱ-55(T→G)inα1/αα^4例、αα^IVS-Ⅰ-62(C→T)inα1/αα^1例、αα^CD106(CTG→GTG)inα2/αα^1例、αα^HBA2:c.-24C>G/αα^1例、αα^IVS-Ⅱ-55(T→G)INα1/αα^IVS-Ⅱ-55(T→G)inα1/1例、αα^IVS-Ⅱ-55(T→G)inα1/αα^IVS-Ⅱ-119(G;+CTCGGCCC)inα21例、αα^IVD-Ⅱ-88(G→A)inα2/αα^1例和--^THAI/αα^1例。其中,5种α突变位点是首次报道,分别是αα^IVS-Ⅰ-62(C→T)inα1、αα^IVS-Ⅱ-55(T→G)inα1、αα^IVS-Ⅱ-119(G;+CTCGGCCC)inα2、αα^IVS-Ⅱ-88(G→A)inα2和αα^CD106(CTG→GTG)inα2;2种α突变位点再次在中国人群中检测到,分别是αα^HBA2:c.-24C>G和--^THAI。188例标本确诊为β地中海贫血,检出率为16.8%,其中β^IVS-Ⅱ-654/βN68例、β^CD41-42/βN 47例、β^CD17/βN 20例、β^28/βN17例,β^CD27-28/βN7例、βE/βN7例、β^CD71-72/βN3例、β^CD43/βN2例。同时,含有17例罕见型β地中海贫血,8种罕见β地中海贫血突变组合类型,分别是β^IVS-Ⅱ-81(C→T)/βN4例、β^Hb J-Bangkok/βN3例,β^Hb New York/βN3例、β(^-96(C→T)/βN 2例、β(IVS-Ⅱ-806(G→C)/βN 2例、βCodons 8/9/βN1例、β^Hb G-Coushatta/βN1例、β^IVS-Ⅱ-827(A→T)/βN1例。其中有3个β突变位点是首次报道,分别是β^-96(G→T)、β^IVS-Ⅱ-806(G→C)和β^IVS-Ⅱ-827(A→T);β突变位点再次在中国人群中检测到,分别是βCodons 8/9、β^Hb G-Coushatta、β^Hb J-Bangkok、β^Hb New York和β^IVS-Ⅱ-81(C→T)。19例确诊α地中海贫血复合β地中海贫血,共检出15种地中海贫血突变组合类型,包含2例罕见稀有α地中海贫血复合β地中海贫血,分别是αα^IVS-Ⅱ-55(T→G)/αα^复合β^IVS-Ⅱ-81(C→T)/βN、αα^IVS-Ⅱ-65(G→A)inα1/αα^复合β^Hb G-Coushatta/βN。结论:福建省南平地区地中海贫血基因突变类型具有遗传异质性,本地区地中海贫血防治策略应该以常见α-地中海贫血和β-地中海贫血的防治干预为主,同时也要重视罕见和未知基因突变类型的筛查和检测。

染色体全自动扫描仪在低比例嵌合体核型分析中的应用

目的:为了提高低比例嵌合体核型分析的性能,研究染色体全自动扫描仪在该方面的作用,从而发现可改进的部分,以提高低比例嵌合体核型检出率。通过与传统方法比对,探讨染色体全自动扫描仪在低比例嵌合体核型分析中的价值。方法:收集在本院进行诊断、咨询的2000例女性患者作为研究对象,采用数字表法随机分为对照组(n=1000)和研究组(n=1000),对照组采用显微镜手动分析法,研究组采用染色体全自动扫描仪系统分析法,取外周血液淋巴细胞进行培养,常规染色体采用G显带技术核型分析,对照组和研究组均分析计数30个中期分裂相,分析5个核型,出现异常者则加倍核型分析,计数100个核型。结果:通过观察计数,对照组中,检查时出现低比例嵌合体5例,检查低比例嵌合体率为0.5%;研究组中,检查时出现低比例嵌合体20例,检查低比例嵌合体率为2%,查出率显著上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:相比传统手动核型分析方法,染色体全自动扫描仪在低比例嵌合体核型分析方面,提高了低比例嵌合体核型的检出率和准确度,给临床提供诊断参考,具有较高的应用价值。

苏云金芽胞杆菌3-羟基丁酮代谢基因簇的转录调控

【目的】通过分析苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)3-羟基丁酮代谢基因簇aco的转录调控和acoR突变体的表型特征,明确aco基因簇的转录调控机制和对芽胞产量及Cry蛋白产量的影响。【方法】通过生物信息学方法分析aco基因簇的结构,RT-PCR分析基因簇的转录单元,采用同源重组技术敲除苏云金芽胞杆菌HD73菌株的acoR基因,利用启动子融合lac Z的方法分析启动子的转录活性。利用总蛋白定量确定Cry1Ac蛋白产量。【结果】aco基因簇由aco ABCL 4个基因组成,形成一个转录单元。aco基因簇的启动子Paco A转录活性在sig L(编码Sigma 54因子)和acoR突变体中均明显降低。acoR基因的缺失对菌体生长和Cry1Ac蛋白产量无显著影响,但使菌体运动能力减弱,使芽胞产量略有下降,并且不能利用3-羟基丁酮。【结论】aco操纵子受Sigma 54控制,并由AcoR激活,aocR基因的缺失影响菌体对3-羟基丁酮的利用,但对Cry蛋白产量无显著影响。

苏云金芽胞杆菌Sigma K在大肠杆菌中的表达与纯化

【目的】在大肠杆菌中表达纯化苏云金芽胞杆菌HD73的转录调控因子Sigma K(σK)。【方法】PCR扩增出苏云金芽胞杆菌HD73中sig K基因的ORF(Open reading frame)装载到带有His标签的表达载体p ET21b上,转入到表达菌株BL21(DE3)中获得重组菌株BL21(p ETsig K),通过SDS-PAGE、镍柱亲和纯化、阴离子交换纯化和凝胶迁移实验(EMSA)等方法对Sigma K蛋白进行提取、纯化和生物活性分析。【结果】正确表达出大小约为27 k D的His-Sigma K蛋白,并获得了纯化的蛋白。EMSA结果表明纯化的His-Sigma K蛋白可以与受其控制的cry1Ac基因启动子结合。【结论】表达和纯化了His-Sigma K蛋白,His-Sigma K具有与受其控制的启动子结合的功能。

浅谈审计质量控制

加快完善社会审计质量规范工作 中国注册会计师协会从1995年开始,相继出台了三批《中国注册会计师独立审计准则》,这对提高注册会计师的审计质量无疑是一次革命,同时也奠定了社会审计质量的坚实基础。近几年,由于《独立审计准则》的出台和实施,注册会计师的执业行为得到了规范。

社会审计工作的新思路

当前,要切实做好社会审计工作,应从如下几个方面入手。 一、坚持“两手抓、两手都要硬”的战略方针 思想政治工作是一切工作的灵魂。我国的社会审计组织诞生于改革开放时期,是社会主义市场经济发展到一定时期的必然产物,它的产生和发展,离不开党的路线、方针、政策和邓小平建设有中国特色的社会主义理论的指导,只有依靠党和政府的正确领导,加强精神文明建设,才有欣欣向荣、蓬勃发展的社审事业,因此社审组织要继续认真组织党员、干部学习党的十五大报告和邓小平理论,加大思想政治工作的力度。