基于非靶向代谢组学的肝阴虚小鼠模型评价

目的:基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS),从非靶向代谢组学的角度评价甲状腺片混悬液联合10%四氯化碳(CCl_(4))建立小鼠肝阴虚模型的情况,为中医证候模型的建立奠定基础。方法:将24只雄性ICR小鼠随机平均分为空白组、模型组,模型组连续14 d灌胃甲状腺片混悬液(0.0032 g·kg^(-1))且每周1次腹腔注射10%CCl_(4)(5 mL·kg^(-1))建立肝阴虚模型,空白组仅腹腔注射等量橄榄油并灌胃等量蒸馏水,实验期间喂食正常饲料,造模完成后每组随机选取6只小鼠生化检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及肝脏中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总蛋白(TP)、羟脯氨酸(HYP)等指标的水平。取肝组织切片进行苏木素-伊红(HE)染色并观察病理变化。每组剩余6只小鼠采用UPLC-Q-TOF-MS结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)筛选肝阴虚小鼠模型的差异代谢物,利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库分析差异代谢物的相应代谢通路。结果:与空白组比较,模型组小鼠出现体质量减轻,疲倦易困,毛发杂乱无光泽,尿液增多,易怒等肝阴虚表现;生化指标ALT、cAMP/cGMP、IL-6、AST、MDA、cAMP、TNF-α明显升高(P<0.05,P<0.01),SOD、IL-10、cGMP明显降低(P<0.05,P<0.01),HYP、TP变化差异无统计学意义;模型组切片图可见肝脏脂肪变性,肝板细胞的放射状排列出现扭曲;内源性物质分离明显,血清样品中鉴别出252个差异代谢物,主要涉及嘌呤代谢、类固醇激素生物合成、嘧啶代谢等代谢途径;肝脏样品中鉴别出229个差异代谢物,主要涉及核苷酸代谢、嘌呤代谢、类固醇激素生物合成、嘧啶代谢、抗叶酸耐药、胰岛素抵抗、初级胆汁酸生物合成、前列腺癌症、硫中继系统、花生四烯酸代谢等代谢途径。结论:通过血清、肝脏代谢组学分析,结合生化指标检测,成功建立并评价了CCl_(4)联合甲状腺激素的小鼠肝阴虚模型,为中医阴虚证候模型提供生物学依据及实验基础。

柴胡经鳖血炮制后五种皂苷成分变化规律研究

目的探究樟帮特色炮制饮片鳖血制柴胡中五种皂苷成分(SSa、SSd、SSc、SSb;、SSb;)含量的变化规律,为扩大鳖血制柴胡的临床应用提供理论支持。同时有利于推动具有区域特色中药饮片炮制的科学内涵研究。方法采集不同产地,不同来源,不同品种的13批生柴胡(北柴胡、南柴胡、锥叶柴胡),按照柴胡∶鳖血=100∶15的比例,在约110℃炒干。利用HPLC法测定五种皂苷含量,采用Agilent ZORBAX C18色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈-水(0.05%磷酸)梯度洗脱,流速为1.0 ml·min^(-1),检测波长分别为210nm(SSa、SSd、SSc)、254nm(SSb_(2)、SSb_(1))。结果经鳖血炮制后,所有柴胡SSa与SSd含量均有升高,增加率为10%~60%,其中道地产区陕西、山西、甘肃SSa、SSd皂苷变化量最大。陕西柴胡的SSb_(1)及山西柴胡的SSb_(2)含量略有减少,河北柴胡的SSc、SSb_(1)含量减少,其他成分含量均有升高。内蒙古柴胡五种皂苷成分含量均有升高。结论柴胡经过鳖血炮制后,五种主要皂苷成分的含量有不同程度升高和降低,但柴胡主要皂苷成分SSa、SSd有明显提高。此研究说明鳖血柴胡炮制工艺能够有效提高部分柴胡皂苷含量,为樟帮特色炮制品鳖血柴胡的应用及推广奠定了理论基础,也从现代科学的角度解释了鳖血制柴胡可挫缓柴胡"劫肝阴"之性。