高级别浆液性卵巢癌类器官模型的建立及鉴定

目的 建立并鉴定高级别浆液性卵巢癌类器官模型。方法 选取行卵巢癌细胞减灭术的10例高级别浆液性卵巢癌患者的卵巢癌组织,将卵巢癌组织消化成单细胞,在基质胶中培养7天,构建高级别浆液性卵巢癌类器官模型。比较类器官与原发肿瘤的形态学特征、免疫组化特征和苏木精-伊红(HE)染色结果。结果 10例患者的高级别浆液性卵巢癌类器官模型均成功构建。光学显微镜显示类器官数量可观,形态呈类圆形3D立体结构。HE染色显示,在高倍镜下,类器官细胞核异型性明显,局部区域形成微乳头状结构。免疫组化显示黏蛋白16(MUC16)强阳性,p53弥漫性强阳性,类器官与原发肿瘤的免疫组化染色情况一致。结论 体外成功构建的高级别浆液性卵巢癌类器官模型具有明显的上皮性特征,与原发肿瘤高度相似,可用于卵巢癌的药物筛选和基础研究建模。

无锡非物质文化遗产传承保护的现状研究

无锡非物质文化遗产主要以无锡惠山泥人和无锡精微绣为代表,两项非遗项目在传承和保护的境遇都非常相似。非物质文化遗产跟以前百姓的生活密不可分,是百姓在社会发展过程中衍生出的共同的生活文化艺术产物,源于百姓生活,并反哺于百姓生活。通过数字化保护让其用不同艺术形式展现,是其内含价值和研究价值被大众所关注,让更多的年轻人了解传统艺术的魅力,继而传承发展,这是对非物质文化遗传最实在的保护形式。

γ-突触核蛋白通过调控自噬对结肠癌细胞起保护作用

目的:研究γ-突触核蛋白(γ-synuclein)对内质网应激诱导的结肠癌细胞自噬和凋亡的影响及其细胞保护作用。方法:针对稳定表达γ-synuclein siRNA的人结肠癌HCT116细胞和空载体HCT116细胞,通过基因表达谱芯片分析γ-synuclein下游差异基因,找到可能的自噬及凋亡相关分子。用毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)模拟内质网应激,采用Western blot检测γ-synuclein蛋白、自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、beclin-1、自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)和ATG7]及凋亡相关蛋白{多腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]、pro-caspase-3和pro-caspase-9}的表达,CCK-8法检测细胞活力,荧光显微镜观察吖啶橙染色的酸性囊泡细胞器和绿色荧光蛋白标记的LC3,检测人结肠癌HCT116和SW480细胞自噬、凋亡及活力的变化。分别采用γ-synuclein siRNA、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)抑制剂PD98059、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)抑制剂SP600125和JNK激活剂anisomycin预处理,Western blot检测γ-synuclein及ERK和JNK信号通路相关蛋白表达,检测伴随的HCT116细胞自噬和凋亡的变化,研究γ-synuclein通过调控相关信号通路对细胞自噬的影响及其细胞保护作用。结果:TG模拟内质网应激诱导的结肠癌细胞自噬主要发生在早期(0~24 h),细胞凋亡主要发生在晚期(36~48 h)。内质网应激上调γ-synuclein的表达,并伴有自噬的增强。γ-synuclein早期(0~24 h)通过激活ERK和JNK通路促进自噬,晚期(36~48 h)通过抑制JNK通路抑制凋亡,从而起到保护细胞的作用。γ-synuclein可能在内质网应激诱导的细胞自噬和凋亡之间的过渡发挥一定的作用。结论:在内质网应激环境下,γ-synuclein通过调控ERK和JNK信号通路来促进自噬、抑制凋亡,发挥针对结肠癌细胞的保护作用,这为抗肿瘤治疗提供了一个潜在的思路。

大鼠失血性休克后过氧化反应与肠粘膜损伤的关系

目的 观察失血性休克后肠道损伤情况与过氧化反应和TNF、IL 6的变化。方法 利用大鼠失血性休克模型 (30mmHg、70min) ,在复苏后 0、2、6、12、2 4、和 48h检测血液和小肠组织的过氧化物歧化酶 (SOD)活性 ,丙二醛 (MDA)、TNF和IL 6含量 ,以及小肠的病理改变和肠道菌移位情况。结果 大鼠血清MDA值在复苏后 0～ 2h升高 ,SOD活性多数时间点均升高 ;小肠MDA值在 0～ 2 4h升高 ,SOD活性 0～ 12h降低。血清TNF含量在 6～ 48h升高 ;小肠在 0～ 12h升高。IL～ 6含量无明显变化。小肠粘膜在复苏后 2h有明显的上皮脱落 ,6～ 12h ,可见细菌侵入粘膜层 ,6～ 48h ,在肠系膜淋巴结等脏器中检出肠道菌。结论 大鼠失血性休克后肠粘膜SOD合成能力的降低或活性抑制可能是加重局部损伤的机制之一。

三个品系小型猪Ⅱ型糖尿病模型的比较研究

目的比较三个品系小型猪对高糖高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病模型的敏感性，为我国小型猪在Ⅱ型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法4～5月龄巴马小型猪、五指山小型猪和中国农大小型猪各6头，以4头中国农大小型猪为对照，同步开展高糖高脂饲料喂养试验，试验周期8个月。每月称1次体重，测定血糖、血清胰岛素含量，每2个月进行1次静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT），测定脂质代谢相关指标。结果巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料比较敏感，在饲喂5～6个月后，开始出现糖代谢异常，表现为显著肥胖、血清胰岛素升高和胰岛素敏感性下降。至实验后8个月，巴马小型猪和五指山小型猪各有1头发展为糖尿病，分别有3头和2头出现糖尿病前期症状。中国农大小型猪对高糖高脂饲料诱发糖尿病相对不敏感，实验期间空腹血糖水平、血清胰岛素含量、胰岛素敏感指数和IvGlTr一直无显著变化，仅在实验后7个月开始表现肥胖，8个月出现胰岛素敏感性减低。三个品系小型猪在高糖高脂饲喂后，血脂相关指标（TG，CHO，HDL-C，LDL-C）普遍升高，以巴马小型猪升高幅度最大。结论巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病比较敏感，品系内个体差异较大。中国农大小型猪相对不敏感。这一结果为进一步的Ⅱ型糖尿病相关基因分析和高敏感家系培育研究提供了基础资料。

中国小型猪阻塞型睡眠呼吸暂停模型的建立

目的 建立一个稳定、可靠、与临床病理状态接近的阻塞型睡眠呼吸暂停 (OSA)动物模型。方法 中国小型猪 10头 ,分为A、B两组 ,A组采用凝胶外部注射法制作模型 ;B组采用凝胶内部注射法制作模型。手术过程中及结束后 ,用多导睡眠仪检测脑电图、口鼻气流、鼾声、胸式呼吸、腹式呼吸、血氧饱和度。 1周后复查多导睡眠图。 2周后行CT检查 ,3个月后处死动物行病理形态学检查。结果 手术结束后两组动物均出现呼吸暂停或低通气及血氧饱和度下降 ,组间相比呼吸暂停时间、呼吸暂停指数、血氧饱和度无明显差别。 1周后复查 ,两组呼吸暂停时间、呼吸暂停指数均较术后当天明显增加 ,血氧饱和度明显下降 ,P <0 0 5 ,B组上述指标的变化更为明显 ,P <0 0 5。CT检查结果 :A组咽腔有一定程度的狭窄 ;B组咽腔呈明显狭窄状。病理形态学结果 :光镜下可见呈交联状的凝胶 ,表面有一层由排列整齐的胶原纤维和弹性纤维形成的结缔组织薄膜 ,胶原纤维和弹性纤维向凝胶内部生长。结论 凝胶注射法建立的慢性阻塞型睡眠呼吸暂停模型稳定、可靠、重复性好 ,与临床病理状态接近 ,可进行长期的、动态的研究 ,可广泛应用于睡眠呼吸暂停综合征发病机制、病理生理及治疗学等领域的研究 ,相比而言 ,内部注射法更优。

灵光注射液对失血性休克大鼠胃肠粘膜的保护作用

目的 观察灵光注射液 (复方樟柳碱 )对失血性休克再灌注大鼠胃肠粘膜损伤的影响。方法 将 5 6只雄性Wistar大鼠随机分 4组 ,分别设为假休克组 (8只 )、模型组 (16只 )、灵光注射液低剂量组 (16只 )和高剂量组(16只 ) ,除假休克组外 ,大鼠均经历 4kPa ,70min的失血性休克 ,在休克复苏后 6h和 12h各组分别处死半数动物 ,观察大鼠肠道菌移位情况、病理组织学和超微结构变化。结果 灵光注射液对大鼠失血性休克再灌注引起的肠道细菌移位和胃肠粘膜形态损伤有明显的保护作用 ,其治疗机制可能与改善微循环。

紫杉醇与雷帕霉素复合药物涂层支架预防冠脉再狭窄动物实验研究

目的观察运用纳米技术不同剂量紫杉醇与雷帕霉素复合药物涂层支架对预防支架内再狭窄的安全性及有效性。方法采用小型猪冠状动脉过度扩张的再狭窄模型,于右冠状动脉植入3种不同剂量组合的雷帕霉素和紫杉醇复合药物涂层支架:A支架,中剂量紫杉醇+低剂量雷帕霉素;B支架,中剂量紫杉醇+中剂量雷帕霉素;C支架,低剂量紫杉醇+高剂量雷帕霉素。比较6周后冠状动脉造影及组织病理学结果。两次造影术后抽血化验肝、肾功能。结果共在4头小型猪右冠状动脉内成功植入支架8枚,A支架4枚,B支架2枚,C支架2枚,术后即刻冠状动脉造影显示均通畅,6周后冠状动脉造影显示1枚A支架内狭窄,余均通畅。病理结果显示,与其他支架比较,狭窄支架新生内膜明显增生(P<0.05),管腔面积明显减少(P<0.05),余支架内膜增生不明显,无明显管腔狭窄。每头猪术前术后肝、肾功能无明显变化。结论中剂量紫杉醇+低剂量雷帕霉素涂层支架不能完全抑制6周血管内膜增生,中剂量紫杉醇+中剂量雷帕霉素及低剂量紫杉醇+高剂量雷帕霉素涂层支架可以有效抑制血管内膜增生、预防再狭窄,安全性好。

五指山小型猪高脂血症模型的建立

目的本研究通过给与五指山小型猪高脂饲料，旨在诱发小型猪的高脂血症。方法将30头小型猪随机分成3组：①对照组（n=6），喂正常猪饲料；②1．5％胆固醇组（n=12），饲喂含1．5％胆固醇、10．0％的牛油、6．0％花生油和0．5％胆盐的饲料；③3％胆固醇组（n=12），饲喂含3．0％胆固醇、10．0％的牛油、6．0％花生油和0．5％胆盐饲料。高脂饮食6个月。每月测定体重和血脂（TG、TC、HDL-C、LDL-C）。结果和结论五指山小型猪对高脂饮食反应敏感，高脂饮食一个月内，高脂饮食组TC、HDL-C和LDL-C从极低水平迅速升高，随后逐月缓慢升高。至高脂饮食4个月时，TC达到15．5～17．7mmol／L，LDL-C达到12～13mmol／L，HDL-C达到4．45～5．76mmol／L，与基线相比，TC升高约10倍，LDL-C升高约15倍，HDL-C升高约7倍，4个月后变化趋于稳定，而对照组没有变化，TG没有明显变化趋势，形成了典型的高胆固醇血症。1．5％胆固醇组和3％胆固醇组血脂指标差异不明显（P〉0．05），提示1．5％的胆固醇含量就足以获得高脂血症模型。

开胸与微创方法制备小型猪急性心肌梗死模型的对比研究

目的观察开胸结扎冠状动脉法(简称开胸法)与微创冠状动脉内球囊封堵法(简称微创法)制备心肌梗死(MI)模型的差异。方法选用贵州小型猪,分别应用开胸法与微创法,阻断冠状动脉左前降支中段血流,造成心肌梗死,比较观察两种方法建立心肌梗死模型的异同。结果两种方法均可以形成心肌梗死模型,病理检查无显著差异。开胸法造模后出现通气性呼吸功能障碍,心肌酶升高水平与临床患者心肌梗死衍变有差异。微创法应用造影剂可能会有一过性肾功能损伤。结论微创法对实验结果干扰小,与临床条件相近,是一种更好的造模方法。

应用CRISPR/Cas9系统敲除PD-1基因对人T淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ的影响

目的:探讨应用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除PD-1基因对人T细胞增殖及分泌IFN-γ的影响。方法:设计靶向PD-1基因的sgRNA序列,应用T7 RNA聚合酶体外分别合成PD-1-sgRNA和Cas9mRNA。利用核转染技术将PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA混合物转入激活的人T淋巴细胞,测序确认基因敲除的效率。应用流式细胞术分析基因敲除后T淋巴细胞表型和PD-1的表达情况,锥虫蓝活细胞计数法检测T细胞增殖活力,ELISA检测T细胞分泌IFN-γ情况。结果:体外成功合成PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA。将PD-1-sgRNA和Cas9 m RNA核转染T淋巴细胞,测序证实PD-1基因序列编辑效率为58.3%。CRISPR/Cas9系统成功下调T淋巴细胞表面PD-1分子的表达水平[(9.6±1.85)%vs(16.2±2.05)%,P<0.05],PD-1基因敲除不影响T细胞的增殖活力和细胞表型(P>0.05);但PD-1-sgRNA组的效应T细胞分泌IFN-γ水平显著升高(P<0.01)。结论:CRISPR/Cas9基因编辑系统成功敲除人T淋巴细胞PD-1基因,降低PD-1分子表达可阻断PD-1/PD-L1负性调控从而增强T细胞的免疫活性,且促进效应T细胞分泌IFN-γ。

小型猪的麻醉及气管插管技术

由于猪与人类在解剖学、生理学、疾病发生机理等方面存在很大的相似性,其在生命科学研究领域的重要地位日益受到人们的关注。同时,随着动物保护的兴起及＂3Rs＂原则的逐渐推广,灵长类、犬等与人类感情亲密动物的实验应用日益受到限制,而小型猪作为替代的实验动物已广泛应用于肿瘤、

常用实验动物全麻后的气管插管

目的总结常用实验(用)动物气管插管的经验。方法选择正确的气管插管用具,实施合理的插管步骤,预防导管并发症,对实验(用)动物实施气管插管。结果与讨论气管插管成功率100%。

三种麻醉诱导方法对杂种犬吸入麻醉的影响

为评价3种麻醉诱导方法在吸入麻醉中对试验犬麻醉效果的影响。本试验将15只杂种犬,分为A、B、C 3组,每组5只。A组为盐酸氯胺酮、速眠新Ⅱ组,B组为戊巴比妥钠组,C组为盐酸氯胺酮、地西泮注射液组,各组在诱导麻醉后行气管插管,应用异氟烷进行吸入麻醉,在不同时间点对试验犬的心率(HR)、血压(BP)、血氧饱和度(SPO2)、体温(TPR)、心电(ECG)进行监测,监测各时间点参数应用SPSS13.0软件进行统计并与A组数据相比较。试验结果表明,B、C两组与A组在麻醉后的心率、诱导5 min后的血氧、试验犬诱导期差异显著P<0.05,A组麻醉诱导剂对试验犬存在心率抑制作用,部分试验犬出现心电延迟;3组试验犬诱导期为B<A<C,麻醉后的苏醒时间为C<A<B。

鼻咽癌病人同步放化疗前后身心适应状况及其相关因素

[目的]调查鼻咽癌同步放化疗病人治疗前后心理适应及T淋巴细胞功能水平,分析心理适应水平与T淋巴细胞功能的相关性,为临床心理护理工作提供依据。[方法]采用方便抽样的方法,收集2013年10月—2015年4月入住我院放疗科符合纳入及排除标准且接受同步放化疗的鼻咽癌病人126例,在治疗前、后分别使用一般资料调查表、简明癌症病人心理适应问卷(Mini-MAC-19)、症状自评量表(SCL-90)进行调查,并于治疗前、后在无菌技术操作下取病人外周抗凝血2mL,使用流式细胞仪测定CD__3、CD_4及CD_8免疫指标,分析心理适应状况与免疫指标的相关性。[结果]鼻咽癌病人同步放化疗前不同年龄段病人的心理适应评分不同,不同收入水平病人CD_3、CD_4指标不同,差异均具有统计学意义(P均<0.05);同步放化疗后不同婚姻状况病人SCL-90评分不同,不同婚姻状况病人CD_4、CD_8指标不同,造瘘病人SCL-90评分明显低于未行胃造瘘病人,差异均具有统计学意义(P均<0.05);同步放化疗病人治疗前、后SCL-90评分及CD_3、CD_4指标存在差异(P均<0.05);同步放化疗后心理适应总分与CD_3免疫指标呈正相关(P<0.05)。[结论]鼻咽癌同步放化疗病人治疗前应关注不同年龄段、文化程度病人及收入水平者的身心适应情况,治疗后应关注不同婚姻状况病人;同步放化疗对病人身心适应状况有明显的影响,病人治疗后心理适应状况较好者具有较强的T淋巴细胞免疫功能。

腹部手术中两种麻醉方法对幼龄小型猪麻醉效果比较

目的比较两种不同复合麻醉方法对幼龄小型猪的麻醉效果。方法将l2头中国农大幼龄小型猪分成两组,每组6头。A组:戊巴比妥钠(15 mg/kg)与速眠新Ⅱ(0.1 mL/kg)联合应用,采用不同部位肌肉注射给药;B组:氯胺酮(10 mg/kg)与速眠新Ⅱ(0.1mL/kg)按比例混合后,采用肌肉注射给药。麻醉后对动物实施腹腔探查术,观察动物麻醉维持时间、镇痛效果、呼吸频率(BR)、心率(HR)、血压(BP)、血氧饱和度(SpO2)及术后苏醒情况。结果两种方法麻醉后,动物分别在(10±2)min、(5±1)min进入麻醉状态(P<0.05),麻醉维持时间分别为(46±14)min、(43±9)min(P>0.05),术后苏醒时间分别为(54±11)min、(34±12)min(P<0.05)。在麻醉维持时间内呼吸频率分别为(33±7)次/min、(36±9)次/min(P>0.05),心率分别为(113±14)次/min、(92±11)次/min(P<0.05),血压分别为(118±17)mmHg、(109±14)mmHg(P>0.05),SpO2分别为(99±0.5)%、(95±1.5)%(P>0.05)。结论两种麻醉方法均能达到良好的麻醉效果,比较而言,氯胺酮联合速眠新Ⅱ麻醉安全性高且术后苏醒快,是一种比较理想的麻醉方法。

网膜填塞法闭合经自然腔道内镜手术胃壁瘘口的研究

目的应用动物模型评价网膜填塞法闭合经自然腔道内镜手术(NOTES)胃壁瘘口方法的可行性及有效性。方法 29只杂种犬经胃前壁内镜下全层切开(10 mm),经此入路完成NOTES腹腔探查术,其中12只应用网膜填塞法闭合胃壁瘘口(网膜填塞组),17只内镜钛夹闭合(钛夹组),闭合成功动物术后存活2周。比较两种胃壁瘘口闭合术的操作耗时、闭合成功率以及瘘口愈合和腹腔感染发生率。结果网膜填塞法闭合胃壁瘘口的成功率为91.7%(11/12),高于内镜下钛夹闭合方法成功率82.4%(14/17),但未见显著统计学差异(P>0.05);网膜填塞闭合法操作平均耗时(11.7±2.1)min/例次,明显低于钛夹闭合法(25.0±5.6)min/例次(P<0.05)。25只动物胃壁闭合成功后者术后均存活14 d,复查胃镜见胃壁瘘口愈合良好。处死后实验动物未发现腹腔严重感染及明显脏器损伤;网膜填塞组8只犬(72.7%,8/11)可见胃壁瘘口处胃壁浆膜面黏连,显著高于钛夹闭合组(14.3%,2/14,P<0.05)。结论网膜填塞法能有效闭合NOTES经胃壁瘘口,与传统内镜钛夹闭合法相比具有操作简单、成功率高的优点,但容易发生瘘口黏连是其明显不足。

三个品系小型猪正常心电图的比较

目的建立清醒状态记录小型猪心电图的方法，并对3个品系小型猪6个导联心电图进行分析比较。方法选用4月龄广西巴马猪7头、5月龄五指山小型猪6头、中国农大小型猪10头，清醒状态下吊床保定，测定Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、aVR、aVL和aVF6个导联的心电图。结果3个品系小型猪心电图的波形与人相似，心率较快，在3个品系之间差别不明显，存在偶发性窦性心率不齐。广西巴马猪、五指山小型猪和中国农大小型猪的P-R间期分别介于0．08—0．10s、0．08—0．11s和0．08—0．11s；QRS波群分别介于0．04—0．06s,0．04—0．07s和0．04～0．05s。3个品系小型猪均有清晰的S-T段，偏移小于1mm。结论本研究获得了3个品系小型猪清醒状态时的心电图基本数据，经比较，3个品系之间无明显差异。