银蓝调脂胶囊对ZDF大鼠(fa/fa)高脂血症合并糖尿病的改善作用

目的评价银蓝调脂胶囊对ZDF大鼠(fa/fa)高脂血症合并糖尿病的改善作用,并探讨其调节糖脂代谢紊乱的作用机制。方法采用高脂饮食诱导ZDF大鼠(fa/fa)建立高脂血症合并糖尿病模型,将大鼠随机分为模型组、非诺贝特+二甲双胍组和银蓝调脂胶囊高、低剂量组,每组6只,另取6只ZDF对照大鼠(fa/+)为正常组,灌胃给药12周后采血,检测各组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、葡萄糖(GLU)、胰岛素(INS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂联素(ADP)和瘦素(Leptin)水平,HE染色观察肝组织病理学并量化分析,蛋白免疫印迹法检测肝组织乙酰辅酶A羧化酶(ACC1)、脂肪酸合成酶(FAS)和转录因子肝X受体α(LXRα)蛋白表达。结果与模型组比较,非诺贝特+二甲双胍组和银蓝调脂胶囊各剂量组大鼠血清TC、TG、LDL-c、Leptin、TNF-α、IL-6、GLU、HbA1c水平降低(P<005,P<001),INS、HDL-c、ADPN水平升高(P<005,P<001),肝脏脂肪沉积减轻,脂滴空泡相对面积比例降低(P<005,P<001),肝组织FAS蛋白表达降低(P<005,P<001);非诺贝特+二甲双胍组和银蓝调脂胶囊高剂量组肝组织ACC1蛋白表达降低(P<005,P<001)。结论银蓝调脂胶囊可降低ZDF大鼠(fa/fa)高脂血症合并糖尿病的血脂、血糖水平,其作用机制可能与改善体内脂质代谢与炎症反应、调节胰岛素分泌、调控肝脏ACC1和FAS蛋白表达,进而减少肝脏脂质堆积有关。

健脾化瘀解毒方调控PI3K/Akt/HIF-1α通路干预胃癌前病变大鼠胃黏膜上皮细胞自噬及凋亡

目的探讨健脾化瘀解毒方(JPHY)调控PI3K/Akt/HIF-1α通路干预胃癌前病变(GPL)大鼠胃黏膜上皮细胞自噬及凋亡的机制。方法采用200μg·mL^(-1) N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)自由饮用+隔日禁食法造模28周复制GPL模型。将SD大鼠随机均分为空白组、模型组、维酶素组(270 mg·kg^(-1))、JPHY高剂量组(9 g·kg^(-1))和JPHY低剂量组(4.5 g·kg^(-1)),每组18只。第15周起,各给药组大鼠每天灌胃给药(10 mL·kg^(-1))1次,连续25周。分别于第18、28和39周,每组随机取6只大鼠,采用HE染色法观察大鼠胃黏膜组织病理学形态变化;Western Blot法测定胃黏膜组织PI3K、Akt、HIF-1α、Beclin1、Bcl-2、BAX蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜组织固有腺变薄,非固有腺锯齿样变,弥漫性细胞空泡样变,固有腺细胞变为体积小、胞质少、核质比例大、深染的异型增生细胞,呈假复层、跨腺腔灶状分布,有炎性细胞浸润,表现为以肠上皮化生为主;第18周,大鼠胃黏膜组织的PI3K、Akt蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、Beclin1、Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/BAX比值明显上调(P<0.05,P<0.01);第28周,PI3K、Akt、BAX蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、Beclin1蛋白表达及Bcl-2/BAX比值明显上调(P<0.01);第39周,Akt蛋白表达明显下调(P<0.05),HIF-1α、Beclin1、Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/BAX比值明显上调(P<0.05,P<0.01),PI3K、BAX蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,JPHY高剂量组的胃黏膜改善作用最明显,异型增生细胞数量、分布范围和分布密度有明显减少,固有层厚度明显增加,腺腔结构趋于正常;第18周的PI3K、Akt蛋白表达明显上调(P<0.01),HIF-1α、Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/BAX比值明显下调(P<0.05);第28周的PI3K、Akt、BAX蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、Beclin1蛋白表达及Bcl-2/BAX比值表达明显下调(P<0.01);第39周Akt蛋白表达明显上调(P<0.01),HIF-1α、Beclin1蛋白表达及Bcl-2/BAX比值明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论JPHY对GPL不同阶段的黏膜损伤均有明显保护作用,可能与其通过PI3K/Akt/HIF-1α通路调节肿瘤缺氧微环境以及调控细胞自噬、凋亡作用有关。

健脾化瘀解毒方调控PI3K/AMPK-mTOR-ULK1抑制ROS诱导GPL细胞自噬的机制研究

目的:探讨健脾化瘀解毒方通过抑制氧化应激所致胃癌前病变(GPL)大鼠胃黏膜上皮细胞(GECs)自噬,保护胃黏膜、防治癌变的机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、维酶素组及健脾化瘀解毒方高(9 g/kg)、低(4.5 g/kg)剂量组,复制GPL大鼠模型,于造模第12 w连续灌胃给药10 w,实验结束时麻醉大鼠后,取血分离血清检测ROS、SOD、MDA水平;取胃窦部胃黏膜,观察组织病理学(HE染色)和肠上皮化生(AB-PAS染色),检测GECs的PI3K、mTOR、AMPK、Raptor、ULK1、ATG13、Beclin1、ATG4B mRNA及miR182、miR30a、miR206和Beclin1、HMGB1、ATG5、MUC2、CDX2、ATG2B蛋白表达。结果:正常对照组大鼠胃黏膜无异常;模型组大鼠胃黏膜萎缩,空泡样变、组织异型性变,异型增生灶占胃黏膜厚度的1/3,各给药组胃黏膜病理学改变不同程度减轻;与模型组比较,健脾化瘀解毒方组PI3K、mTOR mRNA及miR30a、miR206显著升高,AMPK、Raptor、ULK1、ATG13、Beclin1、ATG4B mRNA及miR182和Beclin1、HMGB1、ATG5、MUC2、CDX2蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:健脾化瘀解毒方可通过影响miR182、miR30a、miR206等miRNAs活化,调控PI3K/AMPK-mTOR-ULK1通路,从而抑制氧化应激诱导自噬,逆转GPL大鼠GECs的肠化和损伤,防止GPL癌变。